脂质体介导姜黄素抑制Bel-7402细胞增殖和诱导其凋亡的作用

目的:研究提高姜黄素治疗肝癌生物学效应的新技术和新方法.方法:对比观察脂质体-姜黄素水溶制剂对人肝癌细胞(Bel-7402)凋亡及凋亡相关调控基因Bax、Bcl-2的影响.MTT(四甲基偶氮唑蓝)法观察脂质体-姜黄素对Bel-7402细胞增殖的抑制作用.原位末端标记法(TUNEL技术)观察脂质体-姜黄素诱导Bel-7402细胞凋亡的作用.免疫组织化学染色(SABC)法检测脂质体-姜黄素对Bax和Bcl-2基因表达的影响.结果:10μg/ml、5μg/ml、2.5μg/ml脂质体-姜黄素对Bel-7402细胞增殖有显著抑制作用,P＜0.01,其抑制率分别为38.67%、26.67%和17.33%,与同浓度的姜黄素的抑制率(29.33%、20.00%、5.33%)比较,差异有显著性意义(P＜0.05);增殖抑制作用随药物浓度增高而有加强趋势,3个有效浓度组间差异均有显著性意义(P＜0.05).10μg/ml、5μg/ml、2.5μg/ml脂质体-姜黄素处理组Bel-7402细胞凋亡率分别为68.9%、43.4%、26.9%,与同浓度姜黄素组的Bel-7402细胞凋亡率(53.3%、30.2%、14.9%)比较,差异有显著性意义(P＜0.05).脂质体-姜黄素对细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2表达的影响,与对照组比较差异无显著性意义.结论:脂质体能显著提高姜黄素对Bel-7402细胞增殖的抑制和诱导其凋亡的作用.脂质体-姜黄素对Bax、Bcl-2的表达无显著影响.     

PCR-SSCP银染技术筛检HBV基因突变实验方法的建立

为了对乙肝患者ＨＢＶ基因突变进行大样本大面积筛检,我们建立了良好简便快速的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染色筛检ＨＢＶ基因突变的实验方法,结果显示本法具有很高的特异性和较高的敏感性,ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术筛检出的ＨＢＶ基因突变的阳性标本经直接测序证实全部存在ＨＢＶ基因突变,并证实该方法能特异性的检出１８９８位或１９０１位发生了Ｇ→Ａ出现了ＴＡＧ终止密码的突变,具有一定的推广应用价值。     

2型糖尿病患者糖原合成酶激酶3β的表达及活性

目的 探讨糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)在2型糖尿病患者和健康者外周血单个核细胞中的蛋白表达及活性水平。方法 运用酶联免疫吸附法(ELISA)检测30例2型糖尿病血糖未控制患者(实验1组)、30例2型糖尿病血糖控制患者(实验2组)和30例健康者(健康对照组)外周血单个有核细胞GSK-3β蛋白表达及活性水平,并分析其结果。结果2型糖尿病患者GSK-3β蛋白水平比健康对照组升高(P0.05),实验1组GSK-3β活性水平比健康对照组和实验2组升高(P0.05);实验2组GSK-3β蛋白水平比健康对照组升高(P0.05)。实验1组男性GSK-3β活性水平比健康对照组男性升高(P0.05)。结论 2型糖尿病患者GSK-3β蛋白高表达。经药物治疗后血糖控制者GSK-3β蛋白仍高表达,但活性水平明显下降。2型糖尿病血糖未控制男性患者GSK-3β活性水平明显增高。     

芍药甙对人肝癌细胞株Bel—7402增殖的影响

目的：研究芍药甙对人肝癌细胞株Bel-7402增殖的影响。方法：采用人肝癌细胞株Bcl-7402和细胞药理学方法、对比观察3种措施（阴性无药对照、阳性阿霉素对照及芍药甙）对Bel-7402细胞增殖的影响。结果：芍药甙（2mgml,1mg/ml,0.5mg/ml)对Bel-7402细胞增殖均有显著性抑制作用（均P＜0．01），其抑制率分别为33．78％、22．22％和11．56％；增殖抑制作用随药物浓度增高而加强，呈显著的量效关系。结论：芍药甙对人肝癌细胞株Bel-7402增殖有一定的抑制作用。     

应用PCR—SSCP银染技术检测HBV基因点突变

目的：为了对乙型肝炎患者HBV基因突变进行大大面积筛检,建立简便 可靠的检测HBV基因突变的方法。方法：采用单链构象多态性（SSCP）银染技术,检测HBV Pre-C基因突变。结果：在10份HBeAg阳性标本中,有8份PCR阳性,SSCP显示有2份标本有HBV Pre-C基因突变,直接测序证实为非终止密码突变。48份抗－HBe阳性标本中,有12份为PCR阳性,有8份SSCP显示PCR产物单链泳运动状态异常,其中4份标本经直接测序证实在1898位发生了G→A变异,出现了TAG终止密码突变。结论：PCR－SSCP银染技术检测HBV Pre-C基因点突变有很高的特异性和敏感性,该方法稳定、简便、快速,能基本满足临床大面积大样本筛检的需要。     

脂质体-姜黄素水溶制剂抗肝癌效应的稳定性研究

目的研究脂质体-姜黄素水溶制剂抗肝癌效应的稳定性。方法M TT法观察脂质体-姜黄素水溶制剂(放置1、2、4、8、12个月)对B e l-7402细胞增殖的抑制作用。原位末端标记方法(TUNEL技术)观察脂质体-姜黄素水溶制剂放置12个月后诱导B e l-7402细胞凋亡的作用。免疫组织化学染色(SABC)法检测脂质体-姜黄素水溶制剂放置12个月后对B ax、B cl-2和P 53蛋白表达的影响。结果姜黄素水溶制剂随着放置时间的延长,抑制B e l-7402细胞增殖和诱导凋亡的作用均显著减弱。脂质体-姜黄素随放置时间的延长,抑制B e l-7402细胞增殖和诱导凋亡的作用无明显衰减现象,至放置12个月后脂质体-姜黄素10、5及0.25μg/mL 3个剂量对B e l-7402细胞增殖仍有显著抑制作用,与同质量浓度的姜黄素比较,差异显著(P<0.01),抑制作用随药物质量浓度增高而有加强趋势,最高抑制率可达43.90%,且呈量效关系,3个剂量组间差异有显著性(P<0.01),同质量浓度的脂质体-姜黄素的抑制率显著高于姜黄素的抑制率(P<0.01)。姜黄素-脂质体放置12个月,B e l-7402细胞凋亡率达63.7%。结论脂质体能显著提高姜黄素对B e l-7402细胞增殖的抑制和诱导凋亡作用。脂质体-姜黄素水溶制剂放置12个月后对P 53表达有显著影响,但对B ax和B cl-2的表达无显著影响。     

海珠益肝胶囊对HepG2215细胞Fas、Bax、Bcl-2的影响

目的应用2215细胞株作为体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的实验模型,在观察海珠益肝胶囊对乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg),表面抗原(HBsAg)抑制作用的基础上,从细胞凋亡和凋亡相关基因表达影响的角度,探讨该药抗HBV的药物作用机制.方法细胞染色采用S-P免疫组化法,通过图像分析仪测定阳性细胞染色的平均光密度,并应用流式细胞仪检测药物诱导细胞凋亡情况,观察药物对2215细胞调控蛋白Fas、Bsa、Bcl-2以及对2215细胞本身凋亡诱导的影响.结果(1)海珠益肝胶囊对Fas、Bsx基因蛋白的表达与正常对照组相比有显著性差异(P＜0.05),即能诱导Fas、Bax的高表达;同时能下调bcl-2的表达,与正常对照组比亦有显著性差异(P＜0.05).(2)用海珠益肝胶囊处理过的2215细胞的单细胞悬液,经流式细胞仪检测其DNA含量,呈现典型的凋亡图谱.结论海珠益肝胶囊通过调节肝细胞凋亡、调控蛋白基因表达,并诱导被感染的肝细胞凋亡是其抗病毒机制之一.     

抗纤软肝颗粒对肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的:研究抗纤软肝颗粒(KXR)对肝星状细胞增殖、凋亡及凋亡相关蛋白的影响.方法:传代培养的大鼠肝星状细胞系HSC-T6与中药复方抗纤软肝颗粒(终浓度为5mg/ml、2.5mg/ml、1.25mg/ml)及药物血清(5%、10%、20%)共同培养48小时后,应用MTT法测定细胞增殖,TUNEL法及流式细胞仪测定细胞凋亡、免疫组化检测凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax.结果:抗纤软肝颗粒无论是药物还是含药血清,均能显著抑制HSC-T6增殖,并使细胞周期阻滞于S期,在安全浓度范围内,5mg/ml组和10%药物血清组作用最强(P＜0.01); 并可诱导HSC凋亡, 且凋亡抑制分子Bcl-2表达下调, 促凋亡分子Bax表达增强(P＜0.01).结论:抗纤软肝颗粒抗肝纤维化的作用机制可能在于抑制肝星状细胞增殖,并通过下调Bcl-2/Bax比率,促进HSC凋亡.