预测慢性肝炎转为重症肝炎的实验及临床研究

目的本研究旨在探索慢性肝炎转化为重症肝炎的早期预测．方法实验研究采用D-半乳糖胺大鼠肝损伤模型，初态观察血清肿瘤坏死因子（TNF）、F蛋白（FP）、血清胆红素（SB）、凝血酶元时间（PT）及丙氨酸氨基转移酶（ALT）指标的变化肝脏病理变化用图象分析仪进行定量分析，分析结果与上述各指标用计算机软件作多元线性相关、回归及逐步回归分析，初步探索其间的相关性．临床研究以慢性活动性肝炎（根据新的诊断标准为慢性肝炎中度以上）的患者为观察对象，动态检测SB，ALT，PT，FP，TNF，白介素2受体及乙肝病毒前C区基因变异等项指标，检测数据全部用美国SAS计算机软件进行数据分析．结果综合实验及临床研究结果，并结合临床实际，制定出慢性肝炎转为重症肝炎的预测方案，将临床动态检测的各项指标代入预测公式，可预测慢性（活动性）肝炎是否转化为重症肝炎的不同倾向．结论慢性肝炎转为重症肝炎的预测方案，为临床医师早期预测慢性肝炎演变为重症肝炎提供参考．     

基因芯片检测HBV DNA及YMDD变异的临床意义

基因芯片技术是新近发展起来的新技术,在检测病原学指标方面具有较高的特异性和灵敏性,我们采用HBV DNA基因芯片技术,对154例慢性乙型肝炎患者进行HBV DNA突变检测,现将结果报告如下。1资料与方法1·1一般资料154例为2003年3月-2005年9月我科门诊及住院患者,其中男129例,女25例,年龄16~65岁,平均38岁。其中,未服用拉米夫定者42例(均为有临床症状,准备服用拉米夫定者),服用拉米夫定(9~30个月)者112例。全部患者的诊断符合2000年9月西安会议修订的《病毒性肝炎防治方案》[1]中的慢性乙型肝炎的诊断标准。静脉采血1 ml,收集血清,-20℃冰箱…     

预测慢性肝炎转为重症肝炎的实验与临床研究(摘要)

目的:探索慢性肝炎转化为重症肝炎的早期预测。方法:实验研究采用D-半乳糖胺大鼠肝损伤模型,动态观察血清肿瘤坏死因子(TNF)、F蛋白(FP)、血清胆红素(SB)、凝血酶元时间(PT)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)指标的变化。肝脏病理组织变化用图像分析仪进行定量分析,分析结果与上述各指标利用计算机软件作多元线性相关、回归及逐步回归分析,初步探索其间的相关性。临床研究     

BPDCN白血病患者骨髓涂片肿瘤细胞形态学特点分析

目的分析母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤(BPDCN)白血病患者骨髓涂片肿瘤细胞形态学特点。方法采用回顾性研究,收集100例BPDCN白血病患者的临床资料,对患者骨髓涂片标本进行收集。于油镜下观察BPDCN白血病患者肿瘤细胞胞体、胞核、胞浆及染色质等形态学特点。结果 100例患者均出现皮肤受累,脾大77例(77.00%),肝大68例(68. 00%),淋巴结肿大81例(81. 00%)。发病时均存在外周血象异常,多为贫血,23例患者伴有全血细胞减少; 62例患者外周血涂片出现类似异常幼稚细胞。典型BPDCN细胞存在明显异质性,核不规则形或圆形,中等大小,胞浆灰蓝色,浆内无颗粒,染色质丝网状,呈现不均匀弱嗜碱性,沿胞膜下出现珍珠项链样排列的空泡,特征性伪足突出; BPDCN细胞可大致分为急性淋巴瘤细胞白血病样、急性淋巴细胞白血病样和急性单核细胞白血病样三种类似形态。BPDCN白血病患者过氧化物酶均为阴性,糖原染色均为阳性,且呈现大块状、颗粒状或圆珠样阳性。免疫表型分析结果显示,骨髓中肿瘤细胞均表达CD123、CD38、CD56、CD4及HLA-DR,部分患者表达CD13、CD33,不表达c MPO、CD3、CD15、CD34、CD11b、CD14、CD8、CD20、CD19、CD10、CD22。结论 BPDCN细胞存在特征性的形态学表现,细胞形态可大致分为淋巴瘤细胞样、原幼淋巴细胞样和原始单核细胞样;如若患者存在皮肤受累,则存在BPDCN白血病的可能,临床中可通过病理活检和流式细胞学检查以进一步明确诊断。     

海珠益肝胶囊对免疫性肝损伤小鼠神经肽SP VIP 及辅助性T细胞亚群的影响

目的:观察海珠益肝胶囊对免疫性肝损伤小鼠神经肽SP、VIP及辅助性T细胞亚群的影响。方法:应用尾静脉注射卡介苗(BCG)和脂多糖(LPS)建立免疫性肝损伤小鼠模型,分离小鼠淋巴细胞,经佛波醇乙酯(PMA)、离子霉素、莫能菌素刺激培养6h后,收获细胞,利用细胞内细胞因子染色流式细胞术检测Th1/Th2比例:采用放免法检测血浆和脑垂体中SP、VIP含量。结果:在模型组,外周血和脑垂体中SP含量较正常组逐渐增加,VIP含量较正常组逐渐降低,第18天、25天与正常组比较有显著性差异(P<0.05);Th1细胞的百分率逐渐升高,Th2细胞的百分率逐渐降低,Th1/Th2的比值增大,与肝组织损害程度呈现正相关:海珠益肝胶囊能够降低外周血和脑垂体中SP含量,增加V lP含量,与模型组第25天比较有显著差异(P<0.01),能够恢复SP与V lP的平衡;降低Th1细胞的百分率,恢复Th1/Th2的比例,对肝组织损害具有保护和改善作用(P<0.05)。结论:在小鼠免疫性肝损伤过程中,存在SP与VIP的分泌紊乱及Th1/Th2细胞失衡,海珠益肝胶囊能够恢复SP/VIP、Th1/Th2细胞的平衡,对肝组织损害具有保护利改善作用,可能是其免疫约理机制之一。     

海珠益肝胶囊对免疫性肝损伤小鼠PRL、ACTH及辅助性T细胞亚群的影响

目的:观察海珠益肝胶囊对免疫性肝损伤小鼠内分泌激素物质PRL、ACTH及辅助性T细胞亚群的影响。方法:应用尾静脉注射卡介苗(BCG)和脂多糖(LPS)建立免疫性肝损伤小鼠模型,分离小鼠淋巴细胞,经佛波醇乙酯(PMA)、离子霉素、莫能菌素刺激培养6 h后,收获细胞,利用细胞内细胞因子染色流式细胞术检测Th1/Th2比例;采用放免法检测血浆和脑垂体中PRL、ACTH含量。结果:模型组外周血和脑垂体中PRL含量较正常组逐渐增加,ACTH含量较正常组逐渐降低,第18天、25天与正常组比较有显著性差异(P<0.05);Th1细胞的百分率逐渐升高,Th2细胞的百分率逐渐降低,Th1/Th2的比值增大,与肝组织损害程度呈现正相关;海珠益肝胶囊能够降低外周血和脑垂体中PRL含量,增加ACTH含量,与模型组第25天比较,差别有统计学意义(P<0.01),能够恢复PRL与ACTH的平衡;能降低Th1细胞的百分率,恢复Th1/Th2的比例,对肝组织损害具有保护和改善作用(P<0.05)。结论:在小鼠免疫性肝损伤过程中,存在PRL与ACTH的分泌紊乱及Th1/Th2细胞失衡,海珠益肝胶囊能够恢复PRL/ACTH、Th1/Th2细胞的平衡,对肝组织损害具有保护和改善作用,可能是其免疫药理机制之一。     

免疫性肝损伤小鼠Th1/Th2细胞的变化

目的:探讨Th1/Th2细胞在免疫性肝损伤小鼠中的作用.方法:应用尾静脉注射卡介苗(BCG)和脂多糖(LPS)建立免疫性肝损伤小鼠模型,分离小鼠淋巴细胞,经佛波醇乙酯(PMA)、离子霉素、莫能菌素刺激培养6小时后,收获细胞,利用细胞内细胞因子染色流式细胞术检测Th2/Th2比例;另外经刀豆蛋白A(ConA)刺激培养72h后,收集培养上清,ELISA法检测IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10的水平,同时观察地塞米松对Th1/Th2细胞的影响.结果:在模型组,随着时间的延长,小鼠外周血PBMC中Th1型细胞因子IL-2、IFN-γ水平逐渐升高,Th2型细胞因子IL-4、IL-10水平逐渐降低,Th1细胞的百分率逐渐升高,Th2细胞的百分率逐渐降低,Th1/Th2的比值逐渐增大,与肝组织损害程度呈现正相关.地塞米松能够抑制Th1型细胞因子的分泌,降低Th1细胞的百分率,恢复Th1/Th2的比例,对肝组织损害具有保护和改善作用(P＜0.05).结论:Th1/Th2细胞失衡是造成小鼠免疫性肝损伤的原因之一,Th1应答占主导地位.     

左归丸药物血清对骨髓间质细胞转化为肝细胞的作用

目的:一些实验已证实骨髓干细胞可以向肝细胞横向分化,观察补肾中药左归丸含药血清对骨髓间质细胞分化为肝细胞的影响。方法:实验于2002-01/2004-12在湖北中医学院附属医院肝病研究所完成。①实验动物:选取SPF级纯系Wistar大鼠46只,1只用于骨髓间质细胞的分离及培养,剩余45只用于含药血清的制备。另取2d龄Wistar乳鼠20只,用于肝脏细胞的培养。②实验方法:以体外肝细胞培养上清为诱导条件培养液,采用贴壁分离法纯化大鼠骨髓间质细胞。45只Wistar大鼠依次取15只用生理盐水、中药左归丸(由熟地、淮山药、枸杞子、山茱萸、菟丝子、川牛膝、鹿角胶、龟版胶组成)浓缩煎剂、中药八珍汤(由人参10g,白术10g,茯苓10g,甘草6g,当归15g,川芎10g,白芍15g,熟地15g组成)浓缩煎剂按10mL/kg灌胃,灌胃量以生药10g/kg计算,1次/d。第15天灌胃后2h,腹腔麻醉颈动脉插管取血,分管盛装含药血清,放置备用。大鼠骨髓间质细胞传至6代,分6组诱导培养:常规培养组使用常规培养液(DMEM培养液 体积分数为0.2的胎牛血清 2mmol/L谷氨酸胺)进行培养;肝细胞生长因子诱导组以常规培养液 25μg/L肝细胞生长因子 10-7mol/L地塞米松进行培养;肝细胞生长因子加左归丸组以常规培养液 25μg/L肝细胞生长因子 10-7mol/L地塞米松 10%左归丸含药血清进行培养;条件培养液加对照血清组以常规培养液 50%条件培养液 10%正常大鼠血清进行培养;条件培养液加八珍汤组以常规培养液 50%条件培养液 10%八珍汤含药血清进行培养;条件培养液加左归丸组以常规培养液 50%条件培养液 10%左归丸含药血清进行培养。③实验评估:诱导28d,每组10个复孔,分别于诱导第0,7,14,21,28天免疫细胞化学法检测肝细胞标志物甲胎蛋白、细胞角蛋白18及白蛋白阳性细胞率,PAS染色检测糖原阳性细胞率。结果:①诱导第0天,各组甲胎蛋白、白蛋白阳性细胞呈极少数表达(t=0.44～1.90,P>0.05),细胞角蛋白18及糖原均未见阳性细胞表达。②肝细胞生长因子加左归丸组、条件培养液加左归丸组在诱导第7,14,21,28天白蛋白、细胞角蛋白18、糖原的阳性细胞率均显著高于其他4组(t=5.42～55.00,P<0.05);甲胎蛋白阳性细胞率于诱导第7天时增高显著(t=55.00,P<0.05),此外各时间点又明显降低。③与肝细胞生长因子加左归丸组比较,条件培养液加左归丸组白蛋白阳性细胞率在诱导第14,21,28天时显著升高(t=4.06～7.49,P<0.05);甲胎蛋白阳性细胞率在诱导第7天时显著升高(t=83.69,P<0.05),至诱导第14,21,28天则明显下降(t=55.53～83.00,P<0.05)。结论:左归丸含药血清能够影响骨髓间质细胞向肝系细胞转化过程中的肝细胞标志物,从而提高骨髓间质细胞向肝细胞的转化率。     

中药复方搏癌丸对人肝癌细胞周期及bax、bcl-2、p53基因表达调控的影响

目的:研究中药复方搏癌丸对人肝癌细胞HepG2周期及相关调控基因表达的影响.方法:采用药物血清和细胞药理学方法:①用流式细胞仪观察搏癌丸对人肝癌HepG2细胞凋亡及周期的影响.②用免疫组织化学染色(SABC)法检测搏癌丸3个有效药物血清浓度对bax、bcl-2、p53基因表达的调控.结果:①10%搏癌丸药物血清作用HepG2细胞48小时后,FCA检测的细胞凋亡率为25.34%,均显著高于相应无药血清对照组的3.54%,P＜0.05.②能上调HeG2细胞凋亡调控基因bax、p53的表达,与无药血清对照组比较,差异有显著性意义,P＜0.05,且呈剂量依赖关系.结论:搏癌丸诱导HepG2细胞凋亡的作用机制之一可能是上调促凋亡基因bax和p53的表达.     

海珠益肝胶囊对2215细胞乙肝病毒标志物的影响

目的 :应用 2 2 15细胞株作为体外抗乙型肝炎病毒的实验模型 ,研究益肝胶囊对乙肝病毒抗原(HBeAg)、表面抗原 (HBsAg)的抑制作用。方法 :通过细胞毒性实验以确定对细胞无毒性作用的最高药物浓度 ,直接加药物到细胞培养液中 ,分别采取第 4天、第 8天的细胞培养上清 ,用固相放射免疫方法测定其HB sAg、HBeAg含量。结果 :海珠益肝胶囊最大无毒浓度TCD <1.2 5mg/ml,海珠益肝胶囊有明显抑制HBsAg、HBeAg的作用 ,各浓度间存在量效关系 ,其中对HBeAg的作用优于对HBsAg的作用。结论 :海珠乙肝胶囊对 2 2 15细胞HBV标志物有显著的抑制作用。