不同中药药对调节氢化可的松药源性证候小鼠肾上腺皮质功能的研究

目的研究不同治法中药配伍调节肾上腺皮质功能的作用。方法小鼠ig给予1.65 mg/(kg·d)氢化可的松14 d诱发药源性证候,同步给予助阳散寒(附子-肉桂)、滋阴泻火(知母-黄柏)、补气生津(人参-黄芪)、补血益精(熟地-山茱萸)4种中药药对干预,检测小鼠体质量、抓力、腋温、旷场活动度、躯体不同部位红外温度等表征信息;取脾脏、胸腺称定质量并计算脏器指数;运用ELISA法检测血清皮质酮、促肾上腺皮质激素(ACTH)、肾上腺素和去甲肾上腺素含量;采用实时荧光定量PCR技术检测肾上腺类固醇合成急性调节蛋白(StAR)、胆固醇侧链裂解酶(Cyp11a1)、21-羟化酶(Cyp21a1)、11β-羟化酶1(Cyp11b1)和11β-羟化酶2(Cyp11b2)、酪氨酸羟化酶(Th)、多巴胺脱羧酶(Ddc)、多巴胺β-羟化酶(Dbh)、苯乙胺-N-甲基转移酶(Pnmt)基因表达;运用Western blotting方法检测肾上腺低密度脂蛋白受体(LDLR)、B族I型清道夫受体(SR-BI)、StAR蛋白表达。结果 4种治法对氢化可的松造成的小鼠体质量下降和体温下降效果不显著,附子-肉桂组小鼠抓力显著高于模型组(P0.05)。与模型组比较,知母-黄柏组小鼠血清皮质酮含量显著升高(P0.01),StAR、Cyp11b1、Cyp11b2基因表达水平显著升高(P0.05、0.01),SR-BI、StAR蛋白表达水平均显著升高(P0.01)。结论滋阴泻火治法寒性药对(知母-黄柏)对小剂量氢化可的松诱发的药源性证候小鼠肾上腺皮质功能的纠正作用最佳。     

《黄帝内经》心理论的建构研究

对《黄帝内经》中含有"心"字的经文进行梳理,发现《黄帝内经》对心的生理解剖、生理特性、生理功能和病理表现进行了描述,对于针灸治疗、食疗和其他疗法及预后等进行整理;认为在《黄帝内经》中心系包括心、心包,心包络、血脉、手少阴心经和手厥阴心包经及其络脉。     

基于芯片数据分析丝裂原激活蛋白激酶信号通路基因在不同证候H22肝癌小鼠肾上腺的表达差异

目的:探索丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号通路基因在不同证候H22肝癌荷瘤小鼠肾上腺的表达特征.方法:采用小鼠标准化四诊及辨证方法,以及GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,检测H22肝癌小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证共4个证候肾上腺基因表达的差异,分析不同证候小鼠肾上腺组织MAPK信号通路的表达特征.结果:与正常小鼠比较,①肝癌小鼠各证候中,ERK通路、p38/MAPK通路、ERK5通路基因在肾上腺中表达升高;②JNK通路基因在各证候肝癌小鼠肾上腺中表达下降;③其他级联激酶基因在MAPK信号通路中表达也下降.结论:H22肝癌小鼠肿瘤发生后,其肾上腺组织MAPK信号转导中与TGF-β相关的p38/MAPK通路被激活,而JNK通路被抑制;另外两条ERK与ERK5通路同样也被激活.提示不同证候肝癌小鼠的肾上腺组织主动参与了MAPK信号转导过程.     

中药五味标准化检验方法的建立

目的:探索和建立标准化中药五味检验方法。方法:试验人员经培训后,10人同步、盲法对黄柏等10味中药饮片和黄连解毒汤等6张小复方标准水煎剂以及小檗碱等7个中药有效组分溶液进行品味和打分及综合评价,并研究和建立标准化中药五味检验的方法。结果:(1)知母、黄柏、生栀子、生大黄、苦参、生黄芪、生晒参、淫羊藿、制附子、制吴茱萸等10味中药饮片五味检验结果多与2005《中华人民共和国药典》所载近似,但有较为准确的程度刻画与区分;个别药物如淫羊藿、制附子以苦味为主,而非《药典》所载的辛、甘;(2)首次对黄连解毒汤、大黄附子汤、左金丸、参附汤、吴茱萸汤、疗本滋肾丸等6个小复方的五味进行了检验与刻画;(3)首次对菝葜皂苷元、小檗碱、栀子苷、大黄酚、大黄素、淫羊藿苷、乌头碱等7个中药有效组分进行了检验与刻画,发现这些组分多与其对应饮片的五味近似,惟大黄素、大黄酚未能检出生大黄的苦味,而菝葜皂苷元的苦味也远弱于知母。结论:所建立的中药五味的标准化检验方法能准确、客观、量化地检出中药、中药小复方和中药有效组分的五味,这对于验证已有中药五味及当代中药新药标准化研发是有益的。     

大、小鼠甲状腺和甲状旁腺的解剖

目的明确大鼠、小鼠甲状腺及甲状旁腺的解剖位置和取材方法。方法采用KM小鼠和SD大鼠,进行解剖和组织学观察。结果大鼠、小鼠甲状腺位于甲状软骨下方和气管上端两侧外缘,甲状旁腺依附在甲状腺的外侧后缘。小鼠甲状腺于会厌、甲状软骨向气管方向1min处开始出现,长约2mm,左右两侧不完全对称;大鼠相应略大。结论解剖时肉眼难以分辨大鼠、小鼠甲状腺和甲状旁腺;采用注射器针头挑取是甲状腺取材的便捷方法,但不易彻底取尽。     

RNAi研究角蛋白18在肝癌增殖中的作用及不同中医治法的调节

目的观察不同中医治法对大鼠肝癌角蛋白18（CK18）表达的调控差异,及其在人肝癌细胞增殖中的作用。方法 （1）采用DEN诱发大鼠肝癌模型,分别经中药健脾益气、清热解毒、活血化瘀等治法治疗后,检测肝癌组织（和正常肝组织）CK18表达的差异;（2）设计2个人CK18基因siRNA靶点,将重组质粒电转入SMMC-7721人肝癌细胞株,MTT法检测细胞生长增殖情况、Realtime-PCR检测该基因的表达差异。结果 （1）芯片结果显示,CK18基因在大鼠肝癌形成后表达显著增加,不同中医治法对其具有不同程度的轻度调控作用,其中健脾益气治法下调作用较明显;（2）采用MTT法筛选到一个CK18基因RNA干扰有效靶序列,转染144h后细胞的生长增殖得到了明显的抑制;（3）实时荧光定量PCR检测表明,转染72h后该基因的表达已明显降低。结论肝癌细胞恶性增殖有赖于CK18基因的高表达,目前常用治法对该基因的调控作用有限,因而该基因可望作为肝癌疗效筛选评价指标。     

同病异证H22肝癌小鼠脾脏细胞周期通路基因表达的特征

目的 观察同病异证H22肝癌小鼠脾脏细胞周期通路基因转录的特征.方法 运用小鼠计量化四诊及辨证方法及Affymetrix GeneChip Mouse Exon 1.0 Array等技术,从接种H22肝癌昆明种小鼠出瘤早期筛选邪毒壅盛证、气虚证小鼠,检测其脾脏细胞周期通路基因的表达.结果 与正常组比较,邪毒壅盛证和气虚证小鼠脾脏细胞周期通路相关基因一致发生了明显的上调,其中,邪毒壅盛证上调更明显.结论 肿瘤发生后,小鼠脾脏细胞周期通路总体处于比较活跃的状态,细胞增殖加速,邪毒壅盛证、气虚证等同病异证小鼠差别不大.     

RNAi研究肝癌侵袭转移相关基因进展

RNA干扰(RNAi)是存在于真核生物体内的一种阻断外源基因表达的自我防御体系,是由双链RNA介导的使与其互补的具有同源序列的单链RNA进行特异性的降解过程。近年来,国内学者将RNAi技术广泛应用于肝癌相关基因的功能研究,综述了RNAi技术研究与肝癌转移复发相关基因功能的进展。     

Smad信号转导通路在不同证候H22荷瘤小鼠肾上腺的基因表达

目的 研究TGF-β、Bmp/Smad信号通路基因在不同证候H22肝癌荷瘤小鼠肾上腺的表达特征.方法 采用小鼠标准化四诊及辨证方法,以及GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,检测H22荷瘤小鼠接种第8天(早期)邪毒壅盛证和气虚证、接种第21天(中期)阳气虚证、接种第29天(中晚期)气阴阳虚证共4个证候肾上腺基因表达的差异.通过系统聚类法分析不同证候肾上腺Smad信号通路基因表达模式的相似性及其差异特征.结果 就证候而言,邪毒壅盛证与气虚证的基因表达模式相似,而阳气虚证和气阴阳虚证的基因表达模式类似.就基因而言,TGF-βr1、2、3等基因具有相似的表达模式;Smad2与Smad4,Bmp1与Bmp4也具有相似的表达模式.Smad信号通路中,TGF-β受体及Bmp受体表达量分别高于TGF-β与Bmp基因.结论 芯片数据提示,H22荷瘤小鼠肿瘤发生后,不同证候的肾上腺Smad通路基因多数被激活,且基因表达模式可能与不同证候有关.