抗人大肠癌双价单链抗体基因的构建及表达

目的:构建抗人大肠癌重组双价单链抗体ND- 1sc(Fv)2的融合基因,并在大肠杆菌中表达．方法:采用基因重组技术借助GGGGS Linker序列,将2个相同的ND-1scFv基因共价连接,构建pET-28a( )ND-1sc(Fv)2表达载体,并在大肠杆菌中表达双价单链抗体的融合蛋白．表达产物用Ni-NTA resin亲和层析方法纯化,SDS- PAGE和Western blotting检测表达的目的蛋白．间接免疫荧光和ELISA检测抗体的免疫活性．结果:序列测定表明:ND-1sc(Fv)2基因全长1473 bp,包含了2个729 bp的scFv序列和15 bp的GGGGS序列．SDS-PAGE和Western blotting检测显示,融合蛋白的Mr55 000,与预期值一致．ND-1sc(Fv)2表达产物以不溶性包涵体形式存在,经亲和层析纯化后蛋白纯度达90％,间接免疫荧光及ELISA检测表明,ND-1sc(Fv)2保留了亲本抗体的免疫活性,对表达有相应抗原的靶细胞具有特异结合活性,其免疫活性明显高于ND-1scFv．结论:成功地构建了抗人大肠癌双价单链抗体ND-1sc(Fv)2,并在大肠杆菌中高效表达．融合蛋白具有良好的免疫活性．     

人大肠癌抗原基因cDNA噬菌体表达文库的构建和鉴定

目的:为获得大肠癌的特异性抗原基因,构建人大肠癌抗原基因的cDNA噬菌体表达文库.方法:从2株人大肠癌细胞CCL-187和CX-1中提取总RNA,分离纯化mRNA,并以此为模板合成第1链cDNA,用置换法合成第2链cDNA.双链cDNA经末端削平、EcoR Ⅰ接头连接、Xho Ⅰ酶切、过柱分级分离,除去＜400 bp片段.收集符合需要的cDNA片段与噬菌体ZAP Express载体连接,体外包装后获得人大肠癌抗原基因的cDNA噬菌体表达文库.结果:构建的人大肠癌抗原基因的cDNA噬菌体文库,原始库容量为2.3×109 pfμ/L,重组率97%.重组子插入cDNA片段平均大小1 kb以上.结论:成功地构建高质量的人大肠癌抗原基因的cDNA噬菌体表达文库,为大肠癌的特异性抗原筛选奠定了基础.     

新兴学科课程教学的思路

保证和提高新兴学科课程的教学质量是学科发展对教学提出的新课题。新兴学科课程的教学应从培养目标出发 ,明确学科在培养目标中的地位和作用 ;在内容安排上应注重发挥学科优势 ,突出学科特点 ,不过分强调学科系统性 ;在实验课设计上注重融入新的技术和手段 ,使学科教学与学科发展有机结合     

内窥镜鼻窦手术前后应用激素94例的疗效观察

目的：分析内窥镜鼻窦手术前后激素应用对其疗效的影响。方法：对94例鼻内窥镜手术前后全身及局部应用类固醇激素，并用患作随访观察，与不同激素的117例内窥镜鼻窦手术患作对照。结果：2组随访1－2年，用激素组复发率5．3％，总有效率94．7％，对照组昨发率12．8％，总有效率87．2％。结论：手术前后合理使用粝固醇激素可提高手术疗效，减少复发。     

细胞生物学学习辅导（第四章）

重点内容：真棱细胞的基本结构，细胞膜的基本结构和功能；各种细胞器的结构和功能。     

鼻内镜下鼻咽活检术在鼻咽癌诊断中的价值

我科自2000年以来,通过对120例鼻咽部CT检查提示鼻咽部有黏膜下软组织肿物,而间接鼻咽镜下未能窥清鼻咽部病灶者,采用了鼻内镜引导下鼻咽活检术,取得了重要的临床诊断资料.现总结报告如下.     

抗人大肠癌单链抗体与绿色荧光蛋白融合基因的构建和表达

目的构建并表达绿色荧光蛋白(GFP)和鼠抗人大肠癌单链抗体ND-1scFv的融合蛋白,产生具有荧光的抗体。方法将鼠抗人大肠癌单链抗体ND-1scFv的基因克隆到pET28a(+)-GFP的表达载体,转化到大肠杆菌BL21中进行融合基因ND-1-scFv/GFP诱导表达。Ni-NTA亲和层析对表达产物进行分离、纯化,免疫印迹和荧光显微镜方法验证融合蛋白的表达。结果 ND-1scFv被克隆到表达载体pET28a(+)-GFP中,诱导表达的融合蛋白以包涵体形式存在,分子量为58kDa。SDS-PAGE灰度扫描结果显示纯化后的蛋白纯度为90%,荧光显微镜检测显示,表达有目的蛋白的大肠杆菌BL21具有明显的绿色荧光。结论成功构建并表达融合基因ND-1-scFv/GFP,为该单抗的肿瘤特异成像研究奠定了基础。E.coli     

柴胡桂枝汤治疗荨麻疹验案举隅

荨麻疹是一种较常见的过敏性皮肤病,其特点为突发的局部或全身大小不等的瘙痒性风团,发无定处,骤起骤消。本文以六经辨证为思路,用柴胡桂枝汤原方治疗慢性、急性及寒冷性荨麻疹各1例,取得良好疗效。     

宫颈上皮内瘤变临床特点及预后情况分析

目的 探讨89例宫颈上皮内瘤变临床特点及预后情况.方法 回顾性分析近十年89例宫颈上皮内瘤变患者进行液基薄层细胞检测(TCT)、HC2-HpVDNA、阴道镜检查、多点活检等检查,并将检查的结果进行分析,确定宫颈上皮内瘤变临床特点,采用宫颈上皮内瘤变锥切术后的预后情况.结果 宫颈上皮内瘤变主要以无症状为多,占48.3%;其中接触性出血占9.0%,白带增多占27.0%,不规则阴道出血占4.5%,外阴瘙痒占13.5%.随着CIN级别的增加,HVP感染率明显增加,CIN Ⅲ级的HVP感染率最高为97.1%,CIN Ⅰ级最低为72.0%,总HVP感染率为87.6%.不典型鳞状上皮细胞(ASCUS)患者22例,低度鳞状上皮内病变(LSIL)31例,高度鳞状上皮内病变(HSIL)30例,结果正常及炎症6例.阴道镜检出88例,检出率为98.9%,CIN Ⅰ级1例和CIN Ⅲ级1例未见异常图像.患者复发率为14.6%,好转率为89.9%.结论 89例宫颈上皮内瘤变患者不同分级,表现出现的临床特点存在一定差异,对其进行检查并采取合理的措施可以减少复发,提高患者的预后.     

甲状腺素及甲状腺内注射地塞米松治疗伴亚临床甲减的桥本甲状腺炎

目的:口服左旋甲状腺素钠(LT4)联合甲状腺内注射地塞米松磷酸钠治疗伴亚临床甲减(SCH)的桥本甲状腺炎(HT).方法:294例伴SCH的HT患者随机分为2组(n=147):(1)左旋甲状腺素钠组(LT组):口服LT4维持血清游离甲状腺素(FT4)和促甲状腺激素(STSH)在正常参考值范围共20周;(2)地塞米松组(DX组):除同LT组处理外,甲状腺内注射地塞米松磷酸钠注射液(5 mg,每周1次×8次,以后每2周1次×4次,共12次).2组于治疗前及治疗后第6、12、18及24个月随访,检查症状、甲状腺肿、FT4、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、STSH、抗甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、皮质醇、促肾上腺皮质激素(ACTH),以出现临床甲减(OVH)作为研究终点.结果:LT组147例中,3例(2%)退出,垂体甲状腺轴功能38例(26%)转为正常,9例(6.25%)转为OVH,97例仍为SCH;DX组147例中2例(1.4%)退出,68例(47%)转为正常,2例(1.38%)转为OVH,75例仍为SCH.HT患者由SCH进展为OVH,DX组相对危险度减少78%,绝对危险度减少为4.87%,防止1例OVH需治疗人数为21;HT患者由SCH逆转为正常垂体甲状腺轴功能,DX组相对获益增加率为81%,绝对获益增加率为21%,逆转1例SCH需治疗人数为5.DX组在缩小甲状腺肿、降低甲状腺自身抗体滴度及改善颈部外观及压迫症状等方面均优于LT组(P＜0.05).结论:口服LT4联合甲状腺内注射地塞米松磷酸钠预防HT患者由SCH进展为OVH及逆转为正常垂体甲状腺轴功能明显优于单用LT4.