呼吸道病毒感染的病原体变迁

病毒在呼吸道感染性疾病的病因中占有很重要的位置，受到环境变化和生态平衡破坏的影响，病毒也发生了各种变异，尤其出现了一些新的病毒(emerging virus)，常突然爆发，病情凶险，病死率高，给临床诊断和治疗及疾病的监控带来很大困难，医务人员需提高警惕。以下介绍近年来出现的致呼吸道疾病相关病毒。     

遗传性凝血因子XIII缺陷症基因突变的检测

目的研究一例遗传性凝血因子XIII(FXIII)缺陷症家系的基因缺陷。方法采用PCR、核苷酸测序的方法对该家系先证者及其家属外周血白细胞基因组DNA的FXIIIA基因进行检测。结果先证者第72045位缺失两个核苷酸A,位于外显子5;先证者的父母及先证者的姐姐分别在DNA水平相同位点呈杂合缺失。结论这例遗传性凝血因子FXIII缺陷症是由于FXIIIA基因缺陷造成。     

血友病的携带者与产前分子诊断

目的：建立一种简便、快速的血友病携带者检测与产前诊断体系。方法：用聚合酶链反应(PCR)方法分别检测FⅧ内含子22倒位及血友病A家系中FⅧ基因内的BclⅠ位点、内含子13和22中STR和FⅧ基因外的DXS 52(ST14)位点的多态性；对血友病B家系检测FⅨ基因外6个STR位点(DXS1192、DXS1211、DXS8094、DXSS013、DXS1227、DXS102)的多态性。结果：综合应用直接检测倒位和遗传连锁分析。21个血友病A家系的可诊断率为94．7％；联合FⅨ基因外6个STR位点对血友病B家系进行遗传连锁分析。使10个家系全部得到诊断。结论：FⅧ内含子22倒位检测阳性，可以直接诊断血友病A的携带者及患儿；检测FⅧ基因内、外及FⅨ基因外多个位点的多态性并进行遗传连锁分析，是血友病携带者检测与产前诊断的简便、快速的方法。     

遗传性无纤维蛋白原血症分子机制的研究进展

遗传性无纤维蛋白原血症是一种由于纤维蛋白原基因缺陷所致的常染色体院性遗传性疾病。引起该病的突变皆为纯合突变成复合杂合突变，其中FGA基因IVS4 1G＞T剪接突变为其突变热点。但无论何种突变都可引起纤维蛋白原基因的异常表达，从而造成血浆中纤维蛋白原缺如，最终导致无纤维蛋白原血症的临床表现。本文对近年来该病分子机制的研究进展作一综述。     

人凝血因子ⅧcDNA在小鼠体内的转染与表达

本研究观察逆转录病毒载体和聚酰胺-胺型(PAMAM)树枝状聚合物介导的人凝血因子Ⅷ(FⅧ)基因在小鼠体内的转染和表达，并与体外转染方法作比较。应用含B区缺失(760aa-1639aa)人FⅧcDNA(FⅧBD cDNA)的以逆转录病毒为框架的重组表达质粒载体pLNC-FⅧBD包装成为逆转录病毒LNC-FⅧBD，ex vivo转染小鼠骨髓基质细胞，同时将pLNC-FⅧ BD与PAMAM树枝状聚合物按照1：15混合以形成复合体PAMAM-pLNC-FⅧBD进行小鼠in vivo转染。分别于注射后第24，48小时，第1，2，3，4周取血，分离血浆，采用一期法测定人FⅧ活性(FⅧc)，ELISA法测定人FⅧ抗原(FⅧAg)，并采用Bethesda inhibitor assay测定人FⅧ抗体；同时取脏器肝、脾、肺、肾提取RNA，进行RT-PCR，观察各组织的转录，并用苏木素-伊红染色法观察各组织的形态学改变。结果表明，逆转录病毒转染人FⅧ基因的骨髓基质细胞输入体内后，可以在体内继续表达人FⅧ，并且能有效地分泌至血液中。宿主小鼠体内可检测到的人FⅧ表达持续3周以上，注射后第24小时表达最高水平，人FⅧAg平均为8．6ng/ml，此后人FⅧ抗体逐渐生成，人FⅧ Ag水平渐低，于注射后第4周不再能测出人FⅧ Ag。注射复合体PAMAM-pLNC-FⅧ BD在体内转染后，获得了短暂的人FⅧ生理水平的表达，在注射后第48小时表达水平最高，人FⅧc和FⅧ Ag的平均水平分别为0．62U／ml和115．5ng／ml；注射后第3周平均水平降至0．042U／ml。RT-PCR结果表明，各脏器表达人FⅧ的水平不一，脾脏和肺脏表达水平高，且时间长，注射后各个时间点的小鼠血浆均未见人FⅧ抗体产生。组织病理学检查未发现小鼠各器官组织有病理改变。结论：经逆转录病毒介导的人FⅧ经ex vivo转染于BALB/C小鼠体内，其表达人FⅧ水平较低且该小鼠免疫原性增强，容易产生抗体；C57BL/6J小鼠在注射复合体PAMAM-pLNC-hFⅧ BD(即体内转染)后可获得短暂的人FⅧ生理水平的表达，在注射后第48小时表达水平最高，至少可持续表达2周以上。     

脂多糖刺激RAW264.7和Ana-1形态改变及细胞因子表达的差异

Objective To compare the morphologic change and cytokines expression in RAW264.7 and Ana-1 stimulated by lipopolysaccharide(LPS). Methods RAW264.7 and Ana-1 were cultivated with various concentrations of LPS(0.1 mg/L, 1 mg/L, 10 mg/L, 100 mg/L). MTT was performed to evaluate the proliferation ability of cells. Two kinds of cells were cultivated with 1 mg/L. Then,the concentrations of TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-10 in culture medium were detected by ELISA in different times(0 h,4 h,8 h,12 h,24 h). Results The survival rates of RAW264.7 and Ana-1 (162.05±28.14)% and (159.92±20.43)% were significantly higher in 1 mg/L group than those of other groups. When stimulated with 1 mg/L LPS, both RAW264.7 and Ana-1 expressed cytokines in time-dependent manner (increased first and decreased finally). The concentrations of TNF-α and IL-10 in RAW264.7 group were higher than those Ana-1 group in 4 h only. IL-1β and IL-6,however,were in higher concentrations in RAW264.7 group than Ana-1 group all the time. Conclusions When stimulated with 1 mg/L LPS, both RAW264.7 and Ana-1 have higher survival rate. RAW264.7 and Ana-1 have different ability in expressing cytokines after being stimulated by LPS. Therefore,RAW264.7 and Ana-1 have variant response to LPS slightly.     

影响肺癌化疗患者PICC导管相关性静脉血栓的危险因素分析

目的分析影响肺癌化疗患者发生经外周中心静脉置管(peripherally inserted central catheter,PICC)导管相关性静脉血栓的危险因素。方法回顾性分析我院2014年1月—2018年6月收治的184例行PICC置管的肺癌化疗患者的临床资料,根据有无血栓形成分为观察组(n=16)和对照组(n=168)。记录患者的一般资料、治疗情况及实验室指标,分析影响肺癌化疗患者发生PICC导管相关性静脉血栓的危险因素。结果本研究16例发生PICC导管相关性静脉血栓,发生率为8. 70%;发生位置为锁骨下静脉6例,腋静脉5例,肱静脉3例,颈内静脉2例;发生于PICC置管后2周7例,置管后2周～1个月6例,置管1个月后3例。单因素分析显示,两组肿瘤分期、病理分型、合并糖尿病、置管静脉、导管尖端位置、中心静脉导管(central venous catheter,CVC)和(或) PICC置管史、活动度、置管前D-二聚体水平比较差异具有统计学意义(P 0. 05)。多因素logistic回归分析结果显示,肿瘤分期、合并糖尿病、导管尖端位置、活动度、置管前D-二聚体水平为PICC导管相关性静脉血栓发生的独立危险因素(P 0. 05)。结论在临床治疗、护理过程中,应结合患者具体情况,给予个性化处理,重视静脉血栓发生的危险因素,延长PICC导管使用时间,提高治疗效果。     

脂多糖刺激RAW264.7和Ana-1形态改变及细胞因子表达的差异

Objective To compare the morphologic change and cytokines expression in RAW264.7 and Ana-1 stimulated by lipopolysaccharide(LPS). Methods RAW264.7 and Ana-1 were cultivated with various concentrations of LPS(0.1 mg/L, 1 mg/L, 10 mg/L, 100 mg/L). MTT was performed to evaluate the proliferation ability of cells. Two kinds of cells were cultivated with 1 mg/L. Then,the concentrations of TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-10 in culture medium were detected by ELISA in different times(0 h,4 h,8 h,12 h,24 h). Results The survival rates of RAW264.7 and Ana-1 (162.05±28.14)% and (159.92±20.43)% were significantly higher in 1 mg/L group than those of other groups. When stimulated with 1 mg/L LPS, both RAW264.7 and Ana-1 expressed cytokines in time-dependent manner (increased first and decreased finally). The concentrations of TNF-α and IL-10 in RAW264.7 group were higher than those Ana-1 group in 4 h only. IL-1β and IL-6,however,were in higher concentrations in RAW264.7 group than Ana-1 group all the time. Conclusions When stimulated with 1 mg/L LPS, both RAW264.7 and Ana-1 have higher survival rate. RAW264.7 and Ana-1 have different ability in expressing cytokines after being stimulated by LPS. Therefore,RAW264.7 and Ana-1 have variant response to LPS slightly.     

抗结核药物性肝损伤临床危险因素分析

目的分析肺结核化疗中发生抗结核药物性肝损伤(ATLI)的临床危险因素。方法收集2013年1月到2014年7月期间在我院住院治疗的肺结核合并抗结核药物性肝损伤病例100例为观察组,随机抽取同一时间段在我院住院治疗的肺结核无合并抗结核药物性肝损伤病例100例为对照组,采用回顾性病例对照研究的方法,用Logistic多因素回归分析法对所有的病例肺结核病的初/复治、肺结核病变范围、痰涂片找结核菌情况,合并肺外结核、乙肝表面抗原携带者、嗜酒史、原有除乙肝外的其它肝病史、糖尿病、呼吸衰竭、心功能不全、低蛋白血症、贫血共12个因素进行统计学处理,分析影响抗结核药物性肝损伤的危险因素。结果 Logistic多因素回归分析显示抗结核药物性肝损伤的危险因素包括乙肝表面抗原携带者(OR=3.113、P=0.005)、嗜酒史(OR=3.427、P=0.008)、原有除乙肝外的其它肝病史(OR=2.359、P=0.032)、呼吸衰竭(OR=1.622、P=0.045)、心功能不全(OR=1.700、P=0.015)、低蛋白血症(OR=1.860、P=0.012)和贫血(OR=1.718、P=0.014)等7项。结论乙肝表面抗原携带者、嗜酒史、原有除乙肝外的其它肝病史、呼吸衰竭、心功能不全、低蛋白血症和贫血是抗结核药物性肝损伤的危险因素。     

蛋白C基因C64W和F139V突变致蛋白C缺陷的分子机制研究

目的研究蛋白C（PC）基因C64W、F139V和K150缺失突变（K150d）致PC缺陷症的分子机制。方法构建PC基因野生型和突变体表达质粒（PCwt、PC C64W、PC F139V、PC K150d）并瞬时转染至COS-7细胞或CHO细胞，进行体外表达试验和细胞免疫荧光染色；用荧光实时PCR（real-time PCR）检测转染细胞PC mRNA表达量的改变；蛋白降解抑制实验检测突变蛋白在细胞内的降解途径；内糖苷酶-H（Endo H）酶切试验检测PC翻译后侧链糖化修饰。结果PC C64W未从转染细胞内分泌且在细胞内逐渐降解，PC F139V仅部分从细胞内分泌，大部分未分泌并在细胞内逐渐降解，PC K150d突变体蛋白的分泌未受突变的明显影响。real-time PCR结果显示，与野生型PC mRNA相比，突变体PC mRNA不降低；蛋白降解抑制实验显示，PC C64W和PC F139V通过蛋白酶体途径进行细胞内降解。Endo H酶切和转染细胞荧光染色显示，PC C64W和PC F139V主要位于前高尔基体。结论分泌障碍和细胞内降解是PC C64W和PC F139V导致PC缺陷症的原因，PC K150d对突变体蛋白的分泌无明显影响。