显微切开睾丸取精术在继发性睾丸损伤所致非梗阻性无精子症患者中的应用

目的:探讨显微切开睾丸取精术(micro-TESE)应用于因继发性睾丸损伤导致非梗阻性无精子症(NOA)患者的疗效。方法:回顾性分析2014年9月至2017年12月接受micro-TESE并具继发性睾丸损伤病史的121例NOA患者,分析不同睾丸损伤病因患者micro-TESE取精成功率的差异。并进一步比较micro-TESE获得精子与重度少精子症患者(精子浓度1×106/ml)射出精子的卵细胞胞质内单精子注射(ICSI)助孕结局,比较两组间女方年龄、受精(2PN)率、第3天(D3)可移植胚胎率、D3优质胚胎率、D14血h CG阳性率、胚胎种植率、临床妊娠率。结果:104例患者(86.0%,104/121)成功通过micro-TESE获得精子。按其继发性睾丸损伤的病史,microTESE取精成功率分别为:睾丸炎98.4%、隐睾下降固定术后75.5%、化疗/放疗损害63.6%。micro-TESE所获得精子和重度少精子症患者射出精子ICSI助孕周期的2PN受精率(59.4%vs 69.3%)、D14血h CG阳性率(44.6%vs 57.9%)、胚胎种植率(31.8%vs 32.6%)、临床妊娠率(41.5%vs 48.7%)均无统计学差异(P0.05),但两者D3可移植胚胎率(40.5%vs 52.2%)、D3优质胚胎率(32.5%vs 42.1%)均有显著差异(P0.05)。结论:micro-TESE应用于继发性睾丸损伤所致的NOA患者时取精成功率较高,可作为首选治疗方法,但需要进一步探索改善micro-TESE获得精子后行ICSI助孕结局的有效手段。     

玻璃化冷冻法保存人类胚胎干细胞

[目的]探讨玻璃化冷冻方法保存人类胚胎干细胞的效率.[方法]冷冻保存人类胚胎干细胞,按冷冻方法的不同分为玻璃化冷冻组和慢速冷冻组,比较两组解冻后人类胚胎干细胞的细胞复苏率、克隆生长与分化情况,并比较分析解冻后的与未经冷冻的胚胎干细胞的生长、分化情况,鉴定解冻后人类胚胎干细胞的全能性.[结果]玻璃化冷冻组与慢速冷冻组解冻后的细胞复苏率分别为81.9%和22.8%(P＜0.001).慢速冷冻组解冻后克隆生长较玻璃化冷冻组缓慢且更易分化.两组未分化的胚胎干细胞继续培养的生长与分化情况一致.玻璃化冷冻组解冻后第6代人类胚胎干细胞染色体核型正常,SSEA-4、SSEA-3阳性,表达OCT-4基因.人类胚胎干细胞来源的畸胎瘤包含了来源于3个胚层的组织细胞.[结论]玻璃化冷冻是保存人类胚胎干细胞的有效方法,解冻后的干细胞在继续培养过程中仍可保持其正常核型和全能性.     

应用钙离子载体A23187及6-甲基嘌呤对人卵母细胞进行孤雌激活

目的 :观察钙离子载体 A2 3 1 87( Ca-A2 3 1 87)及 6-甲基嘌呤 ( 6-DMAP)对人类卵母细胞的孤雌激活作用。方法 :收集体外受精周期中不适于进行卵胞浆内单精子注射的生发泡期或第一次减数分裂中期的不成熟卵母细胞 2 44个在体外培养成熟 ,其中 1 55个体外成熟卵母细胞按不同激活方案分组 :5μmol/ L Ca-A2 3 1 87组、1 0 μmol/ L Ca-A2 3 1 87组、对照组、6-DMAP组及 Ca-A2 3 1 87+6-DMAP组。激活处理后 1 2～ 1 8h观察第二极体排出及原核形成情况。结果 :5及 1 0 μmol/ L Ca-A2 3 1 87组卵母细胞激活率分别为 40 .7% ( 1 1 / 2 7)和 3 7.1 % ( 1 3 / 3 5) ,较对照组的 9.5% ( 2 / 2 1 )明显增加 ( P<0 .0 1 ) ;6-DMAP组的激活率 ,1 1 .5% ( 3 / 2 6)较 Ca-A2 3 1 87+6-DMAP组 ,58.7% ( 2 7/ 46)明显下降。 Ca-A2 3 1 87激活后卵母细胞主要表现为一原核二极体 ,而 Ca-A2 3 1 87+6-DMAP激活的卵母细胞以一原核一极体占多数 ( 1 9/ 2 7,70 .4% )。结论 :卵母细胞孤雌激活的发生及原核形成类型与激活方案有关 ,单独 Ca-A2 3 1 87或与蛋白激酶抑制剂 6-DMAP联合应用都能使人类卵母细胞发生孤雌激活 ,二者联合应用更易于诱导卵母细胞发生孤雌激活     

卵子第一极体形态与胚胎形态和临床妊娠关系分析

目的 了解卵子第一极体形态与胚胎形态和临床妊娠的关系。方法 对因男性不能的91例患进行单精子卵胞浆内注射（ICSI）治疗91个周期，进行ICSI操作时对卵子第一极极形态评定，胚胎移植当天对胚胎形态进行评定，胚胎移植后确定临床妊娠，分析卵子极体形态与胚胎形态和临床妊娠之间的关系。结果 随着极体形态不规则化，取卵后第3天胚胎发育≥6个细胞的胚胎比例和碎片（20％的胚胎比例呈下降趋势；使用射出精进行单精子细胞浆内注射的74例患妊娠中移植的1级和2级极体胚胎总比例显高于非妊娠组（P＜0．05），且在＜35岁患组中随移植胚胎中1、2级极体胚胎数目的增多，临床妊娠率和多胎妊娠率高。在使用附睾清和睾丸精患中，妊娠组称移植的1级和2级极体胚胎比例高于非妊娠组，但不具统计学差异。结论 对卵子极体评定有助于选择质量的胚胎进行移植。     

少量细胞模板下多重置换扩增技术的保真度评估

目的 应用单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)芯片,检测以少量细胞(1～10个)为模板的多重置换扩增(multiple displacement amplification,MDA)产物的保真度.方法 结合10K 2.0 SNP芯片平台与MDA,以纤维母细胞系GM02732(47,XY,+18)作为模板,共分6组进行实验,其中A组与B组分别为阳性对照组(细胞gDNA)与阴性对照组(无模板MDA);C～F组为实验组,分别以1、2、5和10个细胞为模板进行MDA扩增,产物与芯片杂交,检测并比较各组产物的基因组覆盖率、等位基因杂合性缺失(loss of heterozygosity,LOH)率以及等位基因脱扣(allele dropout,ADO)率.结果 阴性对照组的MDA产物与gDNA序列有3.2%的重叠.随着起始模板从单细胞提升至10细胞,MDA产物的基因组覆盖率从86.4%逐步上升至96.4%,平均LOH率和ADO率则逐渐下降,各组之间比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论 多重置换扩增技术是一种高效而可靠的全基因组扩增方法 ,随着模板细胞的增加,MDA产物的保真度可获得明显的改善.10K 2.0 SNP芯片可快速准确地在全基因组水平对DNA扩增产物进行保真度分析,但应注意区分LOH中的ADO和等位基因优势扩增,以避免产生误差.     

ＧＤＦ９和ＢＭＰ１５在未刺激多囊卵巢综合征卵巢组织中的异常表达

摘要：【目的】检测未经过促排卵刺激的ＰＣＯＳ患者和正常排卵妇女卵巢组织中ＧＤＦ９和ＢＭＰ１５的蛋白表达水平以及比较两组之间的表达差异。【方法】收集未经过卵巢刺激的ＰＣＯＳ患者（ＰＣＯＳ组）和正常排卵妇女（对照组）的卵巢组织,采用免疫组织化学染色的方法检测卵母细胞和颗粒细胞中ＧＤＦ９和ＢＭＰ１５的蛋白表达水平。【结果】ＧＤＦ９和ＢＭＰ１５蛋白在未刺激卵母细胞和颗粒细胞中均有表达,并且呈现阶段依赖性。ＧＤＦ９蛋白在ＰＣＯＳ早期卵泡卵母细胞和颗粒细胞中的表达水平均低于对照组并且表达滞后（Ｐ＜０．０５）,ＢＭＰ１５蛋白在ＰＣＯＳ早期卵泡的颗粒细胞中也存在表达水平降低和滞后现象（Ｐ＜０．０５）,但是在ＰＣＯＳ卵母细胞中的表达与对照组没有差异（Ｐ＞０．０５）。【结论】ＧＤＦ９和ＢＭＰ１５蛋白在未刺激卵母细胞和颗粒细胞中均呈现阶段依赖性表达;两种因子在ＰＣＯＳ早期卵泡阶段存在表达水平降低并且滞后现象,提示可能与ＰＣＯＳ卵泡发育紊乱有关。     

胚胎实验室质量控制

胚胎实验室质量控制是辅助生殖技术中重要的一环。通过质量控制,生殖中心的胚胎实验室培养体系得以保持稳定的状态。这对于维持生殖中心良好的妊娠率具有至关重要的作用。良好的质量控制包括胚胎实验室仪器设备、培养液耗材、人员质控以及定期质控自查。本文将结合本中心实际情况分别对这四方面进行论述。     

卯母细胞滑面内质网聚集的研究进展

在人类辅助生殖中,经促排卵体外获得的卵母细胞中,有滑面内质网聚集(smooth endoplasmic reticulum aggregate,SERa)形成者占有一定比例.既往研究显示,SERa对胚胎质量及妊娠结局会造成不良影响.但近年来研究显示:SERa卵母细胞可诞生完全健康的新生儿.卵母细胞胞质内SERa的形成可能与遗传因素、卵巢过度刺激、超促排卵方案及扳机日高雌二醇(E2)等多种因素相关.大多数学者认为卵母细胞SERa的形成会导致受精率、卵裂率和囊胚形成率降低及胚胎质量的下降,使得妊娠率显著降低;然而,也有多项报道已证实SERa的卵母细胞的胚胎质量与正常卵母细胞并无差异.因此对于那些临床助孕治疗中获得SERa胚胎或者胚胎数目不足的患者,可考虑移植SERa胚胎.未来,应多关注SERa对体外受精(IVF)结局的影响及着重阐明SERa形成机制,从而从根本上防止异常卵母细胞的出现.     

输卵管积水造口术对体外受精与胚胎移植的影响

【目的】探讨在体外受精与胚胎移植 (IVF ET)之前输卵管积水患者行输卵管造口术对IVF ET治疗效果的影响。【方法】回顾分析 1999年 2月至 2 0 0 1年 1月因女性输卵管因素不孕行IVF ET治疗的 90 8个周期的资料。按输卵管积水患者在IVF ET前是否治疗分 3组 ,A组 :输卵管积水未手术治疗行IVF ET 2 3个周期 ,B组 :在IVF ET之前行输卵管积水造口术 (腹腔镜下或开腹 ) 2 2个周期 ,C组 :对照组 (输卵管阻塞 ,未发现输卵管积水 ) 86 3个周期。【结果】A组、B组、C组的IVF ET的种植率分别为 9 7%、17 9%、16 7% ,临床妊娠率分别为 2 1 7%、4 0 9%、39 2 %。A组的种植率及临床妊娠率比其它组低 ,经 χ2 检验 ,有统计学意义。【结论】输卵管积水未治疗行IVF ET的种植率及临床妊娠率较低 ,但在IVF ET之前行输卵管造口术可改善IVF ET的种植率及临床妊娠率     

迈之灵预防卵巢过度刺激综合征的临床价值

目的:评价口服迈之灵对预防和治疗体外受精-胚胎移植（ in vitro fertilization-embryo transfer, IVF-ET）后卵巢过度刺激综合征（ovarian hyperstimulation syndrome,OHSS）发生及其严重程度的作用。 方法:选择2018年2月...