人正常神经组织许旺细胞的体外培养

背景:周围神经组织工程所需要的许旺细胞数量巨大.在以往的研究中,由于正常入神经组织的缺乏,常选用大鼠、兔等动物神经组织分离许旺细胞进行培养,而作为异种细胞在临床的应用相对受限.目的:体外培养人正常周围神经的许旺细胞,寻找一种最佳的获取、培养、纯化的方法.方法:切取脑瘫患者周围神经缩窄术中的正常周围神经,以消化培养法为主,结合差速贴壁法纯化培养许旺细胞.将神经组织剪成碎块,接种于含胎牛血清、胶原酶、Dispase酶的培养液中消化培养,离心,将组织块加入培养基中,吹打成单细胞悬液,再移入有多聚赖氨酸的DMEM培养皿中,加入碱性成纤维细胞生长因子培养,当贴壁细胞覆盖培养皿达B5%～90%即可开始传代培养.锥虫蓝染色对培养后的第2,3,4,5,6,7,8,9,10天不同时间许旺细胞进行计数,并经S-100蛋白免疫组织化学染色鉴定计算细胞纯度.结果与结论:4 d后镜下可见基本为纯净的许旺细胞,密度在0.5×10~8 L~(-1)以上.传3代后,许旺细胞计数可达到9×10~8 L~(-1)以上;许旺细胞纯度达85%以上.结果表明,以消化培养法结合差速贴壁方法培养许旺细胞所需时间短,可获得较高纯度的人许旺细胞,能够为进一步的神经组织工程提供细胞来源.     

仿生多层纳米羟基磷灰石/壳聚糖复合支架对兔骨缺损的修复

目的:观察仿生多层纳米羟基磷灰石/壳聚糖复合支架及其结合自体骨髓后对兔腓骨缺损的修复作用。方法:实验于2005-09/2006-05在清华大学生物系生物膜与膜生物工程国家重点实验室完成。选择成年新西兰大白兔10只,按随机数字表法分为3组,阴性对照组2只,材料植入组4只,材料 骨髓植入组4只。以纳米羟基磷灰石/壳聚糖复合支架为基础材料,制备仿生多层纳米羟基磷灰石/壳聚糖复合支架。在兔腓骨造成5mm的缺损,分别旷置缝合(阴性对照组),植入仿生多层纳米羟基磷灰石/壳聚糖复合支架(材料植入组),以及植入复合自体骨髓的仿生多层纳米羟基磷灰石/壳聚糖复合支架(材料 骨髓植入组)。分别在术后8周和12周,X射线检测缺损部位的钙化情况。麻醉处死动物前10d和3d注射四环素(25mg/kg),不脱钙骨切片进行四环素荧光检测和VonKossa染色,检测实验动物骨缺损部位新生骨钙化情况。脱钙骨切片用苏木精-伊红染色,检测缺损部位的骨修复情况。结果:纳入兔10只,均进入结果分析。①术后8周时,X射线检测显示阴性对照组缺损部位无明显钙化,材料植入组和材料 骨髓植入组均有钙化。术后12周时,阴性对照组缺损部位大部分仍无明显钙化,材料植入组和材料 骨髓植入组钙化明显,材料 骨髓植入组钙化更完全。②不脱钙骨切片VonKossa染色结果表明,阴性对照组骨缺损处充满纤维组织,并有少量肌肉组织压迫侵入,无明显的钙化区。材料植入组兔的骨缺损的中心区域,出现染成黑色的钙化区,中间夹杂着中性红复染的组织细胞。材料 骨髓植入组兔的骨缺损部位的中心呈现多个“钙化岛”,成骨更加完全。③不脱钙骨切片四环素荧光检测结果表明,阴性对照组两个断端之间未见钙化荧光出现,材料植入组材料的中心有零星的小片钙化区域,材料 骨髓植入组缺损部位的中心有许多的“钙化岛”,并且这些“钙化岛”呈现出连接成片的趋势,同时伴随着更多材料的降解。④脱钙骨切片苏木精-伊红染色结果表明,材料植入组和材料 骨髓植入组缺损部位未发现成熟的纤维组织,并且观察到有大量新生血管。两个植入组均有成骨区域,材料 骨髓植入组还出现了髓样组织。结论:仿生多层纳米羟基磷灰石/壳聚糖复合支架促进骨修复的进行,自体骨髓的加入更加速修复过程。     

制备细胞外基质材料组织脱细胞方法的研究与热点

文题释义：细胞外基质：是由大分子构成的错综复杂网络,为细胞的生存及活动提供适宜的场所,并通过信号转导系统影响细胞的形状、代谢、功能、迁移、增殖和分化。 组织脱细胞：在组织工程学范畴中,应用物理、化学、生物等方法将同种异体或异种组织中的细胞裂解、洗脱,从而获得无细胞的细胞外基质支架材料的过程。 背景：细胞外基质构成的生物支架材料目前已被广泛应用于临床治疗和体内外基础研究中,该种材料脱细胞技术的质量至关重要,不彻底的脱细胞效果会导致生物支架材料植入体内后,诱发一系列免疫排斥反应,最终导致治疗的失败。 目的：介绍制备细胞外基质材料组织脱细胞方法的研究进展。 方法：以“extracellular matrix,tissue decellularization,decellularized method,tissue engineering”为检索词,应用计算机检索PubMed数据库检索2005年1月至2019年12月的相关文章;以“acellular tissue,enzymatic modification”为检索词,应用计算机检索Google Patent数据库2014年1月至2019年12月的相关专利。纳入与组织细胞外基质材料脱细胞方法密切相关的文献,排除重复性研究。结果与结论：脱细胞基质材料的制备方法纷繁复杂,主要包括物理法、化学法和生物法3大类。根据不同的组织类型而选择恰当的脱细胞方法可以在完全去除细胞的同时,最大限度地保留细胞外基质的结构和成分。如果脱细胞的效果不充分,则会造成严重的免疫炎症反应。脱细胞组织的酶修饰方法可以不同程度改善组织的柔韧性、弹性、耐摩擦性等,并可以进一步去除组织的免疫原性。另外,正确选择恰当的灭菌方法有助于更好地保留细胞外基质材料的超微结构与机械性能。同时,异种来源的脱细胞生物支架作为植入性医疗器械,应严格遵循食品药品监督管理办法的规定,规定中要求对于细胞外基质产品的最终灭菌方法的选择要根据不同细菌接种量的指导方针。ORCID: 0000-0002-1309-1971(敖强) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程     

新型冠状病毒感染危机中的医学教育反思——论高等医学院校基层医疗人才的培养

在新冠病毒疫情防控中,基层医疗队伍发挥了遏制疫情扩散的"健康守门人"作用,但也暴露出人力资源配置不足、队伍学历结构失衡、能力素质薄弱等问题。文章在对高等医学院校基层医疗人才培养存在问题进行剖析的基础上,提出了相应解决对策,以期为基层医疗人才培养提供参考。     

HC可视喉镜配伍硬质支气管镜于困难气管插管的临床应用

目的：观察 HC可视喉镜配伍硬质支气管镜在患者气管插管中的临床应用效果。方法选择我院2011~2012年40例拟行全身麻醉手术的困难气道患者,随机分为HC可视喉镜组（H组）和HC可视喉镜配伍硬质支气管镜组（Y组）,每组20例,术前1 d评估患者的插管条件及气道情况Mallampati分级均为3～4级,患者入室后常规全身麻醉诱导,之后分别使用HC可视喉镜和HC可视喉镜配伍硬质支气管镜完成气管插管。分别记录两组患者的插管时间、插管次数、插管时血流动力学变化、插管后患者气道反应及患者清醒后及术后第二天主诉咽痛、咽部不适的情况。结果两组患者的插管时间、插管次数、插管后患者气道压、患者清醒后及术后第2天主诉咽痛、咽部不适的情况有显著性差异（P＜0.05）,Y组明显优于H组。插管时血流动力学变化无显著性差异。结论与单独使用HC可视喉镜组相比,HC可视喉镜配伍硬质支气管镜组于存在困难气道患者插管时间及一次性成功率明显提高,并明显减轻了患者插管时的气道反应及对咽喉部的损伤。     

妊娠晚期非糖尿病孕妇血脂水平对巨大儿的预测价值

目的探讨妊娠晚期非糖尿病孕妇血脂水平与巨大儿的关系。方法回顾性分析2016年2月至2019年3月在宜宾市第一人民医院屏山院区产科住院分娩的1200例妊娠孕妇的病历资料。根据新生儿出生体重将受试者分为巨大儿组(126例)和对照组(1074例)。比较两组临床资料,采用Logistic回归模型分析妊娠晚期血脂水平对巨大儿发生的相关性及其风险;绘制受试者工作特征(ROC)曲线评估妊娠晚期非糖尿病孕妇血脂水平对巨大儿发生的预测效能。结果两组孕妇血清总胆固醇水平组间比较差异无统计学意义(P>0.05);巨大儿组孕妇血清甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇水平高于对照组(P<0.05);巨大儿组孕妇血清高密度脂蛋白胆固醇(high density liptein cholesterol,HDL-C)水平低于对照组(P<0.05);Logistic回归分析显示,妊娠晚期非糖尿病孕妇血清TG、HDL-C水平是巨大儿发生的独立危险因素(P<0.05);ROC曲线分析显示,妊娠晚期非糖尿病孕妇血清TG、HDL-C水平对巨大儿发生具有预测价值(P<0.05),曲线下面积为0.878,敏感度为95.4%,特异度为68.4%。结论妊娠晚期非糖尿病孕妇血清TG、HDL-C水平与巨大儿发生密切相关,对巨大儿发生具有良好预测价值。     

微课在口腔颌面外科学继续医学教育中的应用

继续医学教育是指临床医师完成医学基础教育后进行的在职进修学习,是提高临床与科研能力,保障医疗水平的必要手段。传统继续医学教育的方式以课堂授课和实习操作为主,在教学的开展实施和学习效果等方面具有局限性。微课教学是一种新型的小而精的线上教学模式,依托于现今发达的网络和科技,使教学活动不再局限于固定的时间和地点,使身处世界各地的学员有机会随时参与学习和讨论。本研究概述了微课的特点,发展现状及其在口腔颌面外科继续教育中的优势和挑战。     

慢性脑缺血导致tau蛋白发生超磷酸化及可能的机制

目的 研究大鼠慢性脑缺血过程中tau蛋白的磷酸化以及糖原合酶激酶-3β（GSK-3β）和蛋白磷酸酶2A（PP2A）的活性的变化.方法 构建了大鼠三动脉结扎慢性脑缺血模型,通过免疫印迹的手段观察tau蛋白的磷酸化、GSK-3β和PP2A的活性,利用Morris水迷宫实验检测动物的学习与记忆能力,用组织学手段观察了大鼠海马神经元存活状况,同时研究了GSK-3β的抑制剂氯化锂对上述指标的影响.结果 慢性脑缺血过程中,tau蛋白发生超磷酸化,GSK-3β的活性稍微降低,PP2A的活性大幅降低,动物学习与记忆能力显著下降,存活的海马神经元的数量大量减少.氯化锂能进一步抑制慢性脑缺血过程中GSK-3β的活性,增强PP2A的活性,降低tau蛋白的磷酸化,改善动物的学习与记忆能力,使海马神经元的数量显著增加.结论 慢性脑缺血导致tau蛋白发生超磷酸化,GSK-3β和PP2A可能在其中起重要作用.超磷酸化的tau蛋白是慢性脑缺血导致脑损伤的一个重要因素.     

小鼠海马神经元细胞系HT22微环境诱导BMSCs神经分化

目的探讨小鼠海马神经元细胞系HT22的微环境对骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化的定向诱导作用。方法分别培养HT22细胞和GFP转基因荧光小鼠的BMSCs;直接接触法和间接接触法共培养,荧光显微比较GFP标记的干细胞形态变化;收集间接接触共培养的BMSCs行Western blot检测神经相关的蛋白(GFAP,NSE)的表达和变化;利用免疫荧光法检查GFAP和NSE抗原在细胞内的表达。结果培养的骨髓贴壁细胞为CD11b、CD45阴性,CD90阳性。与HT22细胞直接接触共培养及间接接触共培养的BMSCs细胞长轴增长,轴突样突起明显;经HT22细胞培养液诱导的BMSCs内GFAP、NSE表达水平随时间增加而增强;与HT22细胞直接接触共培养诱导的BMSCs表达GFAP和NSE。结论小鼠海马神经元细胞系HT22的微环境可诱导BMSCs向神经元样细胞分化。     

硬脑膜修复材料的研究及应用进展

硬脑膜缺损是临床较常见的问题。目前针对硬脑膜缺损所使用的自体组织、同种异体材料、异种材料和人工合成材料等硬脑膜修补材料分别存在各自的优点与缺点;而各自的特性将影响最终的疗效。本文将综述各类硬脑膜修复材料的研究及应用进展,为优化、筛选理想的硬脑膜修复产品提供依据。