深圳市活禽市场活禽经营人员H7N9禽流感病毒抗体水平及感染危险因素调查

目的调查深圳市活禽市场活禽经营人员H7N9禽流感病毒抗体水平,探讨感染危险因素。方法在对活禽市场活禽经营人员问卷调查的基础上,采集血样,用血凝抑制试验检测H7N9禽流感病毒抗体,采用单因素分析和多因素logistic回归对H7N9病毒感染的危险因素进行分析。结果250名活禽市场活禽经营中,男性141人,女性109人,年龄中位数为41岁, 38人（15.2%）H7N9病毒抗体阳性（滴度≥1：160）,男、女各19人。问卷调查发现,236人（94.4%）主要接触鸡,169人（67.6%）接触过鸭,120人（48.0%）接触过鹅,105人（34.1%）接触过鸽子,单因素分析显示接触鸭子、鹅和鸽子为H7N9病毒感染的高危因素,进一步多因素logistic回归分析结果显示,接触鸭子为H7N9病毒感染的高危因素（OR=3.85,95%CI：1.44-10.35,P=0.007）,活禽暴露时间,暴露方式和流感疫苗接种等因素对H7N9病毒感染的影响没有显著性(P>0.05)。结论活禽市场活禽经营人员中存在这一定数量的隐性感染者,接触鸭子为H7N9病毒感染的危险因素 。     

带TAP标签的流感病毒8质粒反向遗传包装系统的初步构建

目的构建带TAP标签流感病毒8质粒反向遗传包装系统，以期应用于流感病毒感染宿主细胞的蛋白分子机理的研究。方法两步RT—PCR方法扩增流感病毒8基因，人工合成TAP基因序列，并采用3次PCR的方法融合TAP基因和NP基因。将流感病毒8基因和NP—TAP基因克隆于反向遗传载体PIVVⅡ-1，阳性克隆用PCR和序列测定进行鉴定。结果经PCR和序列分析鉴定，筛选到了带TAP标签的流感病毒8质粒反向遗传阳性克隆。结论成功构建了带TAP标签的流感病毒8质粒反向遗传包装系统，为进一步研究流感病毒感染宿主细胞的蛋白分子机理奠定了基础。     

深圳市0～5岁儿童流感样病例3种呼吸道病毒的感染情况

目的了解深圳地区0~5岁儿童流感样病例患者中3种呼吸道病毒的感染状况。方法 2016年1-12月,在深圳市2家哨点医院每周采集0~5岁流感样病例患儿的咽拭标本送深圳市疾控中心,对腺病毒(ADV)、呼吸道合胞病毒(RSV)和人偏肺病毒(hMPV)进行荧光定量PCR核酸检测。结果共采集样本2 118份,检出阳性77份,无混合感染病例,其中ADV阳性率为1.13%(24例),hMPV和RSV阳性率分别为1.75%和0.76%(37和16例)。ADV的检出主要集中在12-2月间,RSV 3-5月检出率较高,呈春季流行趋势,hMPV在1月和8月检出率较高。结论 2016年这三种呼吸道病毒在深圳呈较低检出率,但季节性高发需引起临床关注并针对性预防。     

双碱基延伸法结合荧光偏振法快速检测新甲型HINl耐药位点方法的建立

目的建立一种利用双碱基延伸法与荧光偏振技术（Fluorescence polarization,FP）快速检测甲型H1N1流感病毒NA基因耐药突变位点的新方法。方法从GenBank随机下载30条甲型HINl的NA（neuraminidase）基因序列,通过MEGA分析,利用Primer Premier软件设计3条特异引物,其中一对引物通过RT—PCR用于扩增含有耐药位点H275Y的NA基因,第3条引物是应用双碱基延伸终止法与荧光偏振技术检测NA基因对达菲类药物耐药位点H275Y的突变情况,再随机选取50株甲型HINl流感病毒进行检测,与测序结果进行比对,验证检测结果的准确性。结果50株甲型H1N1流感病毒的NA蛋白第275位氨基酸均为组氨酸,未发生HY的替换,在灵敏度与特异性方面,与传统的基因测序结果一致性均达100％。结论本方法操作简便、敏感性及特异性高、判读结果直观明确、检测费用低,能实现对耐药位点突变的快速、准确检测,可应用于与SNP相关疾病的快速分型和突变位点的实时监测和临床检测。     

一株从死亡黑天鹅中分离出HSN1亚型流感病毒株血凝素基因特性的研究

目的了解从黑天鹅分离H5N1亚型流感病毒株血凝素基因特性。方法用RT-PCR扩增目的基因，用PGBM-TVecTor（美国Promeqa公司）412过夜连接重组质检转入dH5α细菌，筛选阳性菌落，酶切鉴定。送六合通公司自动测序，然后进行进化树分析，并推导出基因树序列。结果从黑天鹅分离出H5N1毒株血凝素的重链区与轻链区连接肽的序列为R—E—R—R—R—K—R，即含一串碱性氨基酸，共有8个潜在的糖基化位点，其中6个位于重链区的第9、10、23、165、193和296位点上；其余2个位于轻链区的第154和213位点上。其HA基因进化树与无论从家禽还是从人中分离的均有差异。结论从黑天鹅中分离的H5N1亚型流感病毒为对禽是高致病性的，他的HA基因不同于从人和家禽中分离出的H5N1毒株。     

孕哺期补硒对仔鼠大脑海马突触形成的影响

目的研究孕哺期补硒对子代小鼠大脑海马发育的影响。方法从母鼠受孕第1天起通过在饮水中补充亚硒酸钠(低、高剂量组分别为400、1 600μg/L),同时设立对照组。至仔鼠出生21 d后,取仔鼠大脑海马,运用高尔基染色观察仔鼠海马树突棘密度的变化,采用RT-PCR检测突触可塑性相关基因PSD95、Drebrin和SYN的mRNA的表达,Western-blot检测Drebrin蛋白的表达。结果对照组、补硒组母鼠及仔鼠饮食正常,毛发发育正常、有光泽,精神状态良好,对声、光等一般刺激反应灵敏,各组间未表现出明显差异;各组均未发生流产、死胎、死产以及仔鼠夭折等现象。各组间仔鼠数和仔鼠体重均无统计学差异(均P0.05)。对照组、补硒组仔鼠海马区树突棘形态规则,排列整齐且密集。孕哺期补硒后,低硒组和高硒组DG区和CA1区高尔基染色树突棘计数、Drebrin基因mRNA表达均高于对照组(均P0.05),低硒组和高硒组间差异均无统计学意义(均P0.05)。3组间Drebrin蛋白表达差异无统计学意义(P0.05)。结论孕哺期母鼠补硒能够促进仔鼠海马突触的形成,具体机制有待进一步研究。     

转基因食品致敏性检验和评价技术

转基因食品的致敏性是转基因食品安全性评价中受到普遍关注的问题．与其特有的生产工艺、原料来源及产品成分有着密切的关系．与现有的食品品种比较有着显著的特征。转基因食品致敏性的检验和评价尚无统一的模式和方法。本文通过危险性评价、实质等同性分析、个案处理的原则和遗传稳定性分析、表达忠实性分析、致敏原特性及含量测定、血清学试验、动物试验等技术和方法．对转基因食品致敏性及其危害性的评价进行综述。     

荧光定量RT-PCR快速检测A型流感病毒

目的利用荧光定量RT-PCR技术建立一种快速检测A型流感病毒的方法。方法根据A型流感M2基因的相对保守序列分别设计一对引物及其相应的Taqman探针,建立、优化反应体系后,利用十倍稀释法检验方法的灵敏度并建立相对定量标准曲线并与普通RT-PCR法进行比较;特异性检验后进行临床标本的检验。结果A型流感病毒检测反应的灵敏度为2·56×10-6TCID50,标准曲线相关系数为0·999,扩增效率为108·5%,5种非A型流感病毒病原体检测均为阴性,说明此方法具有很好的稳定性、重现性和特异性。结论本研究建立荧光定量RT-PCR技术可以准确检测A型流感病毒,不仅灵敏度高、稳定性好,而且可以对病毒滴度进行定量检测。     

2017年深圳地区A/H3N2亚型流感病毒HA和NA基因的分子进化特征

目的  了解深圳市2017年上半年流行的甲型H3N2亚型流感病毒HA和NA基因的分子进化特征,为预测流感病毒流行和变异提供科学依据。 方法  利用DNAStar、MEGA 7.0等生物信息学软件对研究分离的40株H3N2流感病毒的HA和NA基因及其编码的氨基酸序列进行比对,构建分子进化树,分析基因特征和变异情况。 结果  深圳分离株的同源性均达到97.8%~100.0%,位于亚洲北美人源分支。与世界卫生组织（World Health Organization,WHO）推荐的疫苗株A/Switzerland/9715293/2013（H3N2）和A/Hong Kong/4801/2014（H3N2）相比,有较高的序列相似性;与当年疫苗株对比发现,HA发生6个抗原位点和2个受体结合位点的改变,NA出现第151位酶活性位点的改变;HA和NA的潜在N-糖基化位点在数量和位置上也发生变化。 结论  深圳市2017年上半年甲型H3N2亚型流感病毒在流行过程中尚未发生明显变异,目前推荐的疫苗株仍对深圳地区人群有一定保护作用,HA和NA多个氨基酸位点的变异提示仍需加强H3N2亚型流感病毒分子水平的动态监测。     

2010年深圳市流感流行病学分析

目的 对2010年深圳市流感监测结果进行分析,了解流感的流行趋势,为流感防治提供科学依据.方法 收集全市31家监测单位的流感样病例数据、病原学检测结果和暴发疫情资料进行分析.结果 2010年深圳市的流感样病例百分比(ILI％)为5.43％.2010年全市共采集日常监测ILI咽拭标本4 031份,分离出445株流感病毒,阳性率为11.0％,其中14株季节性H1N1亚型(3.1％),42株季节性H3N2亚型(9.4％),171株甲型H1N1亚型(38.4％),213株B(Victoria,47.9％)亚型,5株B(Yamagata,1.1％)亚型.2010年全市报告了89起ILI暴发疫情,发病总人数741人,流感PCR检测阳性79起,其中季节性甲型6起(6.8％),乙型67起(75.3％),甲型H1N1流感6起(6.8％).结论 2010年深圳市流感活动较低,未出现明显的高峰.