五株钩体外膜蛋白和脂多糖的SDS-PAGE、2D-PAGE图谱的比较研究

作者采用SDS-PAGE、2D-PAGE结合银染色法及免疫印迹技术对五株不同致病力钩体外膜蛋白和脂多糖作比较研兜。SDS-PAGE分析发现三株致病钩体外胰蛋白电泳图谱非常相似,与两株非致病性钩体电泳图谱无相关关系。强毒力017株外膜21.5kd区带的蛋白含量明显高于两株弱毒力钩体。2D-PAGE图谱差异更大,主要表现为pI的分布不同。用抗017株的McAb(LB_1)对五株外膜进行免疫印迹分析。该McAb主要识别三株致病性钩体共有的41kd抗原。三株致病性钩体外膜脂多糖电泳图谱与两株非致病钧体外膜脂多糖电泳图谱迥然不同。     

针对问号钩体赖型外膜的抗原分析

作者采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹技术,对黄疸出血群赖型017株和601株、七日热群七日热型156株、澳洲群澳洲型620株以及塞马伦群帕托克型Patoc Ⅰ株等5株钩体外膜进行分析。检测到具有免疫保护作用和抑制钩体粘附作用的单克隆抗体E_4B_7D_5能特异地识别赖型017株和601株钩体外膜的34.5kd和39.5kd两条蛋白带,而同其余3株钩体外膜蛋白无反应。由此提示该两条蛋白带可能为钩体外膜保护性抗原。     

钩端螺旋体在豚鼠肺弥漫性出血模型肝、肾、心等组织分布的电镜观察

用黄疸出血型O_(17)株钩端螺旋体原培养液,经浓液10倍后,以每支豚鼠静脉注射2毫升,待感染豚鼠引起口鼻涌血而死亡后,立即取肝、肾、心组织固定,以1u厚的薄切片作光学定位观察,超薄切片经染色后电镜观察,其结果显示这些器官和组织之中含有较多的钩端螺旋     

重组钩端螺旋体基因疫苗与不同毒力钩体交叉免疫研究

目的　欲了解赖型钩端螺旋体 (简称钩体 )基因多肽疫苗与我国主要 7群不同毒力致病钩体间的交叉免疫情况。方法　常规制备不同毒力钩体超声变性抗原及钩体基因疫苗兔抗血清和全钩死疫苗 (WCV)兔抗血清。以WCV抗血清与各株钩体反应为阳性对照 ,以非致病钩体、PT7- 7(多肽疫苗保护性抗原基因DNA片段质粒载体 )与WCV抗血清反应为阴性对照 ,进行EIA测定。结果　 (1)多肽基因疫苗抗血清与强毒力钩体 (黄疸出血型、秋季热型、澳洲型、巴叶赞型 )具良好的免疫交叉反应(效价为 1/ 5 2 42 88～ 1/ 12 80 0 ;WCV抗血清效价为 1/ 2 6 2 144～ 1/ 6 40 0 )。 (2 )多肽基因疫苗抗血清与弱毒力钩体 (犬型、流感伤寒型、七日热型、波摩拿型 )也具良好的免疫交叉反应 (效价为 1/ 2 5 6 0 0～ 1/ 12 80 0 ;WCV抗血清效价为 1/ 2 5 6 0 0～ 1/ 6 40 0 )。 (3)多肽基因疫苗抗血清与非致病钩体 (PatocI)、PT7— 7质粒载体阴性对照无明显免疫交叉反应 (效价分别为 1/ 16 0 0 ,1/ 2 5 6 ;WCV抗血清效价分别为 1/ 32 0 0 ,1/ 5 12 )。结论　赖型钩体基因重组疫苗抗血清与不同毒力致病钩体具良好的免疫交叉反应。提示 :该基因重组多肽疫苗有可能对我国主要流行之 7群钩体感染具完全交叉保护 ,从而弥补了全钩死疫苗仅对部分钩体有     

赖型钩体基因重组多肽疫苗动物免疫保护试验

钩端螺旋体病（简称钩体病）为人兽共患病。由强毒力钩体０１７株所致的钩体病肺弥漫出血型（ＰＤＨ）可使病人口鼻涌血,窒息死亡。现所用全钩体死疫苗（ＷＣＶ）或外膜疫苗免疫不完全,故寻找新疫苗已成为当务之急。循此宗旨,作者构建了强毒力钩体０１７株基因库,筛选出重组质粒ＰＤＪｔ（含０１７株钩体１－８１１ｋｂＤＮＡ片段,ＤＮＡ测序推测有２个读码框架,载体是ｐＴ７７）表达蛋白称ｐ６８,相对分子质量为６８×１０３,属钩体外膜蛋白,经免疫学证实具良好免疫原性（豚鼠血清效价１５２４２８８,新西兰白兔血清效价１…     

赖型钩体pDC38核酸序列测定及其与流感伤寒型钩体外膜蛋？…

为了探讨赖型钩体ｐＤＣ３８插入片段基因组ＤＮＡ编码、位置与ｏｍｐＬ１基因的关系,作者采用在流感伤寒型钩体外膜蛋白基因ｏｍｐＬ１首尾区段设计一对引物,以ｐＤＣ３８插一段作模板进行ＰＣＲ扩增、玫类似性匹配（ａｌｉｇｎｍｅｎｔ）。结果发现,ｐＤＣ３８含有２．７ｋｂ和３．０ｋｂ两个插入片段,３．０ｋｂ片段含有１个ｏｍ;Ｌ１基因全拷贝。结论：类似性匹配表明,ｐＤＣ３８和ｏｍｐＬ１相同碱基８６４个（９０％）,     

问号赖型钩体与七日热型钩体内鞭毛蛋白基因的克隆及序列分析

目的　筛选钩体核酸疫苗的候选株 ,并从基因水平解释钩体血清型的特异性。方法　通过 PCR方法扩增赖型 0 17株及七日热型 5 6 6 10株钩体的内鞭毛蛋白 (fla B)基因 ;经 T/A快速克隆法将 PCR产物连接于PGEM- T Easy Vector载体。用 α-互补法、PCR法及酶切分析鉴定重组质粒 ,获得了重组质粒 p DHTF0 17和p DHTF6 10 ;双脱氧终止法对两个重组质粒中的克隆化 fla B基因进行测序。结果　两型 fla B基因长 85 2 bp,编码2 83个氨基酸。两个基因的限制性内切酶位点相似 ,含多个常见酶切位点。基因编码的蛋白质预测相对分子质量为31.3× 10 3。结论　几个血清型的 fla B基因同源性达 90 %～ 99%。     

四川省夹江县钩端螺旋体病流行病学调查

夹江县位于四川盆地的西南 ,青衣江下游 ,岷江中游流域的丘陵地带 ,境内沟渠纵横 ,气候温和 ,雨量充沛 ,湿度较大 ,5～ 10月降雨量约为 12 0 0mm ,7～ 9月降雨量占全年的76 %以上。境内总面积约 74 6km2 ,2 2个乡镇 ,人口 348835。境内适宜于各种农作物的生长 ,以中稻为主。植被丰富 ,有利于啮齿动物 (鼠类 )的繁殖。鼠带钩体率达 2 0 %～ 30 %。早在 195 7年已证明夹江县有钩体病的病原体〔1〕。 1971年夹江县发生一次罕见的稻田型钩体病暴发流行 ,患者死亡原因均为肺大出血引起的窒息 (后来命名为肺弥漫性出血 ,简称PDH)。 1971年首次在…     

赖型钩体pCX7探针Southern杂交分析不同血清群型钩体DNA

用赖型０１７株钩体ＤＮＡ基因库中筛选出的重组克隆ｐＣＸ７制备重组质粒，再以￣（３２）Ｐ标记为探针，对１１个血清群的１８株问号钩体、双曲钩体ＰａｔｏｃＩ株和细螺旋体ｉｌｌｉｎｉ３０５５株ＤＮＡＳｏｕｔｈ－ｅｒｎ杂交。放射自显影结果显示：双曲钩体ＰａｔｏｃＩ株和细螺旋体ｉｌｌｉｎｉ３０５５株ＤＮＡ未获杂交阳性区带；ｊａｖａｎｉｃａ（爪哇）、ｍａｎｈａｏ２（曼耗２）和ｒａｎａｒｕｍ（蛙）三个低毒力血清型的问号状钩体ＤＮＡ亦为阴性；１５株问号状钩体ＤＮＡ均出现了杂交信号，而且不同群型钩体ＤＮＡ杂交带型明显不同，赖型钩体０１７株（强毒株）与６０１株（弱毒株）杂交带型也有细微差别。作者认为，以ｐＣＸ７探针进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交可望作为钩体分类和鉴定的工具或参考。