赖型钩体内鞭毛基因的扩增、克隆、核苷酸序列测定及其在大肠杆菌中的表达

根据钩体内鞭毛蛋白（Ｅｎｄｏｆｌａｇｅｌｌｉｎ）ｆｌａＢ基因核苷酸序列自行设计一对引物，以赖型钩体ＤＮＡ为模板，用ＰＣＲ扩增到约８４０ｂｐ的片段。扩增片段经酶切（ＢａｍＨＩ、ＰｓｔＩ）定向克隆入ｐＵＣ８。重组质粒ｐＬＦ１插入片段与哈勒焦型钩体ｆｌａβ基因相比，核苷酸序列和推测的氨基酸序列同源性很高。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明有一约３３ｋｄ的特异蛋白带，表达量占菌体蛋白１１％。免疫印迹试验表明此区带能被抗赖型钧体内鞭毛（轴丝）抗血清识别。首次以ＢＡＬＢ／ｃ小鼠钧体病模型为基础，用含重组质粒ｐＬＦ１的大肠杆菌作免疫原进行免疫保护试验，实验组存活率高子对照组，表现了一定程度的保护作用。本研究结果在所查国内外文献中尚属首次报道。     

四川省钩端螺旋体病肺弥漫性出血抢救及其主要病原体赖型钩端螺旋体的独特性

钩端螺旋体病(以下简称钩体病)是四川省常见病之一,发病时间集中在秋收季节,农民因下田劳动受染,1980～1989年呈现暴发流行达94县次。肺弥漫性出血(以下简称PDH)是导致四川省钩体病患者死亡的主要原因,占该病死因的98％。经过多年现场观察发现PDH的发生发展有严格规律性,独特的临床征象和病理变化,是一种国内外文献未系统报道过的一种临床病理实体(Special clinico-pathological entity)。通过乐山市几个县长期现场研究,及实验室研究,发现PDH是由数量多、毒力强、致病力大的钩体引起的,在四川、贵州、湖南、湖北     

赖型钩体DNA重组质粒rpDJt及其表达蛋白P68对豚鼠的免疫保护研究

为了进一步鉴定赖型钩体ＤＮＡ重组质粒ｒｐＤＪｔ及其纯化表达蛋白质Ｐ６８的免疫保护作用，采用随机、双盲和对照法对５０只豚鼠进行了３次和６个部位主动免疫接种，并于接种后３０天以强毒力、大剂量活钩体攻击。结果：Ｐ６８组存活率１００％（７／７）；ｒｐＤＪｔ组存活率７７％（１０／１３）；ｐＴ７－７组（无重组质粒）存活率２５％（３／１０）；全钩灭活疫苗组存活率９３％（１３／１４）。作者认为该质粒的表达蛋白质Ｐ６８可作为钩体基因工程亚单位疫苗的候选抗原。     

Ⅲ.链脲佐菌素所致大鼠胰岛组织病理及酶组织化学改变

大鼠腹腔内注人链脲佐菌素后,发现胰岛β-细胞有变性(1～3小时)、坏死(6～12小时)、溶解吸收(1～4天)和增生(6～27天)改变。溶酶体酶(AcP、β-GA)于变性期活性升高,以后下降;所观察的其他8种酶,在整个实验期活性均下降。据此认为,链脲佐菌素损伤β-细胞的机制在于损伤细胞质膜及细胞器的膜结构。对胰岛的形态、酶活性改变与血糖变化间的关系作了简要讨论。     

钩端螺旋体病患者早期血标本的PCR检测

以问号钩体１６ＳｒＲＮＡ基因多变区序列作引物，用ＳｉＯ＿２高盐吸附法处理，对５５例钩体病患者早期血标本进行了扩增。结果表明，问号钩体１６ＳｒＲＮＡ基因引物可用于钧体病的临床检测和流行病学调查，其检测效果明显优于血培养和显微镜凝集试验（Ｐ＜０．０１）等方法。     

地高辛配基标记DNA打点杂交和原位杂交检测钩端螺旋体

应用一种新的非放射标记物地高辛配基(DIG)制备黄疸出血群赖型017株钩端螺旋体DNA(017DNA)探针,与~(32)P和光敏生物素标记017DNA探针对照打点杂交检测钩端螺旋体DNA。结果,上述三种探针均能检测到不同群型的问号状钩体,DIG探针的敏感性为0.1pg,~(32)P和光敏生物素探针的敏感性分别为1 pg和10pg。以上探针均不能检测双曲钩体patoc型Patocl株、细螺旋体illini型3065株,与其它致病菌及人白细胞DNA也无明显杂交信号。DIG标记017DNA探针原位杂交检测感染017株钩体的豚鼠系列组织切片和血浆涂片,以对比度极大的着色反应,清晰地显示各组织和血浆中的钩体形态。细螺旋体illini型3055探针和HBV-DNA探针不能检测到上述标本中的钩体.     

问号赖型钩端螺旋体内鞭毛蛋白与外膜蛋白基因融合DNA疫苗载体的构建

目的　为增强问号赖型钩端螺旋体 (钩体 0 17株 ) DNA疫苗内鞭毛蛋白基因 (fla B2 )与外膜抗原基因 (omp L1 )的免疫保护作用 ,构建一种能表达 fla B2 与 om p L1 蛋白融合蛋白的 DNA疫苗载体。方法　通过聚合酶链反应分别扩增 0 17钩体 fla B2 与 omp L1 片段并进行融合 ,获得的嵌合基因 om p L1 - fla B2 中含有 10个氨其酸的中间接头序列 ,以维持其空间构象。结果　经酶切鉴定 ,证实有一 1.8kb片段插入载体 ,其 fla B2 及 om p L1 DNA测序结果与文献报道的一致。结论　表达 0 17株钩体 fla B2 与 om p L1 抗原融合蛋白的 DNA疫苗载体构建成功     

用限制性核酸内切酶分析钩端螺旋体DNA的研究

作者选取钩端螺旋体(简称钩体)赖型017株、赖型56601株、秋季型56606株、曼耗2型67020株;1987年分离的87112株和87369株按本窒方法提取DNA,用BgIⅡ、EcoRI;Hha Ⅰ和Hind Ⅲ20u37C°消化2ug钩体DNA2小时,予0.8％琼脂糖凝胶上100V电泳4小时后照象记录。结果显示:不同内切酶对同一钩体DNA酶切显示不同图谱,EcoRI酶切图谱上,赖型、秋季型和曼耗2型明显不同,主要差别在高分子区带,赖型参考菌株56601与同型强     

心肌挫抑发生机制的实验探讨及高镁的保护作用

心肌挫抑(myocardial stunning)的发生机制迄今尚未阐明。本实验以Langendorff灌流模型,研究了短暂低流缺血(0.2ml/min)15min及再灌10min后心肌形态学、心肌含水量、心肌钙、心肌高能化合物(ATP和磷酸肌酸CP)及心肌血管线密度(Lv)的变化,以及高镁(2.4mM)对心肌挫抑的影响。实验发现:(1)虽然缺血组心肌无任何坏死,但其心率一左室发展压乘积(RPP)仅恢复达缺血前的77％。且与对     

用分子杂交技术分析不同毒力钩端螺旋体基因组DAN同源性

用~(32)P标记钩端螺旋体(钩体)基因组DNA,以Dot-blot和Southern-blot杂交法分析5株钩体DNA同源性。结果表明:问号钩体黄疸出血群赖型017株和601株及七日热群七日热型245株与双曲钩体patoc型Patoc I株、细螺旋体illini型3055株同源程度极低;3株问号钩体有不同程度同源;illini型3055株与各株同源性均低。