赖型钩端螺旋体及澳洲型钩端螺旋体的ompL1和flaB2抗原基因序列分析

目的：构建棘型钩端螺旋体017及澳洲型钩端螺旋体607株外膜蛋白抗原基因ompL1和内鞭毛抗原基因flaB2的重组质粒，并分别对ompL1及flaB2基因进行序列分析。方法：通过聚合酶链反应扩增ompL1及flaB2，并将其分别克隆到pcDNA3.1/Myc-His(＋）载体T7启动子下游，构建抗原基因表达质粒，进行序列测定分析。结果：序列分析显示赖型钩体017株与澳洲型钩体607株的ompL1相同碱基949个（98．85％），碱基变异11个（1．15％）；flaB2的相同碱基823个（96．94％），碱基变异26个（3．06％），呈很高的保守性。结论：赖型钩体017株与澳洲型钩体607株的ompL1及flaB2分别具有高度同源性。     

问号赖型钩端螺旋体23 kDa蛋白的免疫原性研究

钩端螺旋体病（简称钩体病）是分布最广的一种人兽共患病，已有７７个国家和地区有钩体病的流行，给人类和畜牧业造成了严重危害。为了控制钩体病流行，目前多采用全菌死疫苗。但是，全菌死疫苗免疫持久性不强，而且需多次注射，因而有严重的局限性。因此，寻找由钩体基因编码的保护性抗原，使之持久地抵抗侵入机体的钩体，已成为钩体病研究的课题。我们前文已报道问号赖型钩端螺旋体重组质粒ｐＤＬ１２１可表达被全钩抗血清识别的２３ｋＤａ蛋白（刘洪斌等，以Ｌａｍｂｄａｇｔ１１作载体构建赖型钩体基因文库及其重组质粒ｐＤＬ１２１的克…     

钩端螺旋体外膜提取物的理化特性及其免疫源性研究

从黄疸出血群赖型017株钩端螺旋体提取的外膜,电子显微镜下的形态呈圆形或条状化学组成中含蛋白质40％,碳水化合物6％,类脂质52％,并检测到2—酮基—3—脱氧酸(KDO)的存在。外膜提取物免疫家兔产生的抗体,在五个月中仍然保持一定水平。     

致病性钩端螺旋体微量DNA的聚合酶链反应(PCR)

本研究首次通过对黄疸出血群钩端螺旋体 DNA 的分子克隆的反复筛选,获得了两个重组DNA片段,其中一个具有广泛针对各群致病性钩体的特性,另一个仅对黄疸出血群钩体起杂交反应。经 DNA 序列分析,分别合成两对 PCR 寡核苷酸引物——Primer B1.2和 Primer B3.4。本研究证明 PCR 是一种灵敏度极高,针对性很强的 DNA 检测技术,可用于钩体病早期诊断和流行病学分类鉴定。     

问号赖型钩端螺旋体重组质粒pDL121及其表达产物的初步研究

目的:探讨问号赖型钩端螺旋体重组质粒pDL121外源基因及其表达产物23 kDa蛋白的特点。方法:用6种内切酶对pDL121行酶谱分析,用Digoxin标记的pDL121外源基因片段作探针对不同种属的钩体进行杂交,用SDS-PAGE制备23 kDa蛋白,Western blot鉴定其免疫原性。结果:pDL121外源基因没有6种内切酶的酶切位点,重组探针与致病性钩体(serovar lai strain 017,serovar hebdomadis strain56610,serovar pomona strain 56608)有杂交信号,与非致病性钩体(serovar patoc strain Patoc I,serovar illini strain 3055)无杂交信号,亦不识别大肠杆菌。23 kDa兔抗血清可识别pDL121体外表达的23 kDa蛋白带和赖型钩体017株超声抗原成份;其抗体滴度为1/12800;用pDL121细菌裂解液主动免疫豚鼠,可使豚鼠抵抗强毒力株钩体攻击。结论:pDL121外源基因可能是赖型钩体的一个新基因;该重组探针能鉴别致病性钩体和非致病性钩体;23 kDa抗原有良好的免疫原性,可能是赖型钩体017株的保护性抗原。     

钩体内鞭毛蛋白基因重组质粒的构建、表达和免疫保护性研究

对钩端螺旋体病的有效预防亟需广谱、高效、安全、价廉的疫苗。为了获得重组表达的钩体内鞭毛亚单位蛋白抗原,以探讨制备新疫苗的途径,我们设计一对引物（Ｐ１＝５’－ＧＣＣＧＴＣＧＡＣＡＴＧＡＴＴＡＴＣＡＡＴ－３’,Ｐ２＝５’－ＧＧＣＴＡＧＣＴＡＴＴＡＧＡＴＡＴＧＣＴＧＣＡＧ－３’）,以赖型０１７株钩体ＤＮＡ为模板,利用ＰＣＲ扩增其编码基因完整的开放阅读框架,扩增产物经ＳａｌＩ、ＣｌａＩ双酶切消化后定向克隆于ｐＴ７－７载体上,构建原核表达重组质粒ｐＬＦ２。将该质粒转化入大肠杆菌ＪＭ１０９（ＤＥ３）中,经Ｉ…     

致病性与非致病性钩端螺旋体蛋白电泳及单克隆抗体识别抗原的比较

作者用SDS-PAGE和Western印迹分析了三株钩体全细胞蛋白电泳图谱及McAb识别的抗原分子。致病性问号钩端螺旋体017株、606株蛋白电泳图谱平均相似性为90％,与非致病性双曲钩端螺旋体patoc Ⅰ株相比,分别为32％,31％;与McAb LB_1 识别的抗原图谱相比,017株与606株基本一致,与patoc Ⅰ株均完全不同。提示该分析方法在区分致病性与非致病性钩体上具有一定意义。     

钩端螺旋体病豚鼠模型肾小球超微结构的病理改变

作者用扫描电镜、透射电镜和冷冻复型技术观察钩体病豚鼠模型的肾小球超微结构,发现病变集中在滤过膜,主要表现为滤过膜结构破坏导致肾小球出血,足细胞形态异常,表面有大量钩体粘附。     

钩端螺旋体毒力与粘附现象关系的探讨

作者采用扫描和透射电镜观察了三株不同毒力钩端螺旋体对人胚肺成纤维细胞的粘附,发现不同毒力的钩端螺旋体粘附于细胞表面的数量有显著性差异,并且粘附的数量与细胞的超微病变密切相关。     

冰冻复型电镜技术对豚鼠钩端螺旋体病肺弥漫性出血肺微血管的研究

冰冻复型电镜技术用于钩端螺旋体病肺弥漫性出血动物模型的肺微血管研究是一种新尝试。本文结果表明,肺微血管始终无结构上的破损和断裂,却以内皮细胞膜镶嵌蛋白的数量和分布异常、内皮细胞出现大量细胞孔道和内皮连接开启为特征,并与肺弥漫性出血的发展密切相关,结果揭示漏出性出血(Dia-pedesis)与肺微血管内皮细胞的细胞膜超微病变存在着内在联系。