单克隆抗体E4B7D5对钩端螺旋体粘附抑制作用的扫描电镜观察

作者采用黄疸出血群赖型017株钩端螺旋体(钩体)外膜免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合等技术,获得单克隆抗体(McAb)E4B7D5,亚类鉴定为IgG_1,凝集效价为1:25600。经被动免疫保护试验证明,对同型017株钩体具有免疫保护作用。作者采用扫描电镜观察E4B7D5 McAb对钩体粘附于正常人胚肺成纤维细胞的影响,发现不同凝集效价的E4B7D5 McAb组,其钩体粘附明显少于对照组。作者认为,E4B7D5 McAb的免疫保护作用可能与其抑制钩体的粘附有关。     

问号钩体（狭义）种特异探针重组质粒pCX7插入片段核苷酸序 …

为了建立敏感特异的鉴别致病性钩体菌侏的方法，用ＡＢＩ自动测序仪对问号钩体（Ｌ．ｉｎｔｅｒｒｏｇａｎｓｓｅｎｓｕｓｔｒｉｃｔｏ）种异探针ＤＮＡ重组质粒ＰＣＸ７，１．７ｋｂＰｓｔＩ部分插入片段进行了核苷酸序列测定。结果：该部分插入片段ｂｐ总数为１－５０１ｂｐ，其中可读框１个，序列为８７－３９３，共３０６ｂｐ。     

早期钩体病患者血清钩体DNA聚合酶链反应和地高辛—硷性磷酸酶发光体探针杂交分析

作者从已建立的问号钩体基因文库中筛选合成一对引物G_1G_2,中国四川14份早期钩体病患者血清中的DNA经硫酸氰胍、二氧化硅和蛋白酶K纯化后,在G_1G_2引导下行聚合酶链反应(PCB),并以地高辛标记的同源探针行DNA印迹杂交,全部血清样品均获得确切地阳性结果。用地高辛—硷性磷酸酶发光体标记PCR扩增的同源DNA探针,与16株Yasuda基因组钩体作DNA印迹分析,其中8株存在同源单拷贝序列,它们皆为我国常见和流行的优势致病菌株,本研究结果表明:引物G_1G_2可用于四川钩体PCR检测和分析,PCR常规结合同源DNA探针杂交识别,能提高其敏感性和可靠性;地高辛—硷性磷酸酶发光体配合PCR等方法,可使微量DNA的检测和分析更趋完善。同时,本研究还提供了有价值的钩体DNA同源序列资料。     

16S rRNA基因多变区序列对不同种属钩端螺旋体的PCR扩增

从问号状钩体16S rRNA基因多变区V2和V4序列中设计了一对引物:PⅠ 5’GGGAAC CTA ATA CTG GAT GG;PⅡ 5’ACA TAG TTT CAA GTG GAG GC,并对不同种属钩体DNA进行了扩增。在55℃退火条件下,问号状钩体各群型具有相同大小的扩增产物(473bp)和KpnⅠ酶谱,双曲钩体有约280bp的扩增带,但不被KpnⅠ酶消化,而细丝体属钩体和其它对照DNA未见扩增。以~(32)P标记的lai型Lai株(强毒)扩增产物作探针行Southern杂交发现,问号状钩体各株扩增带均可被杂交,而双曲钩体扩增物无杂交。研究表明,该对引物可用于钩体的分类和检测。     

钩端螺旋体糖脂蛋白对培养血管内皮细胞的粘附导致细胞内吞与病损

作者提取不同群、型和毒力的构端螺旋体糖脂蛋白,以Rhodamine B荧光素和胶体金标记制备成探针,与体外培养的牛主动脉内皮细胞作用,以荧光显微镜和扫描电镜观察记录其过程,并以内皮细胞LDH、AcP漏出率和蛋白含量及细胞形态学作为细胞毒指标。结果表明,钧端螺旋体糖脂蛋白通过对培养血管内皮细胞的粘附,导致细胞内吞与病损。该过程可能属于一种特殊的受体介导内吞过程。     

问号钩体(狭义)种特异探针重组质粒pCX7插入片段核苷酸序列分析

为了建立敏感和特异的鉴别致病性钩体菌株的方法，用ＡＢＩ自动测序仪对问号钩体（Ｌ．ｉｎｔｅｒｒｏｇａｎｓｓｅｎｓｕｓｔｒｉｃｔｏ）种特异探针ＤＮＡ重组质粒ｐＣＸ７，１．７ｋｂＰｓｔⅠ部分插入片段进行了核苷酸序列测定。结果：该部分插入片段ｂｐ总数为１～５０１ｂｐ，其中可读框（ＯＲＦ）１个，序列为８７～３９３，共３０６ｂｐ。ＯＲＦ除去一些核苷酸不能确定外（图中以Ｎ表示），绝大多数在一个ＯＲＦ。计算机检索有关同源序列１８个，较高序列类似性５个，均在４１％以下。经查ＥＭＢＬＤＮＡ序列数据库未见类似序列。由此提示，以ｐＣＸ７作为探针可用于钩体菌株鉴定。     

以λgt11作载体构建赖型钩体基因文库及其重组质粒pDL121的克隆和在E.coli表达的研究

为探讨赖型钩体抗原基因特点及其表达产物作为疫苗的可行性，采用问号赖型０１７株钩体经ＨｈａⅠ和ＡｌｕⅠ限制性内切核酸酶部分消化，行ＥｃｏＲⅠ限制酶切位点甲基化，加上ＥｃｏＲⅠ接头与去磷酸化的λｇｔ１１ＤＮＡ－ＥｃｏＲⅠ臂连接，体外包装后转染Ｅ．ｃｏｌｉＹ１０９０，建成含２．１×１０６重组子的问号赖型０１７株钩体基因文库。用抗赖型钩体兔血清从上述基因文库中筛选出一个强阳性克隆，λＤＬ１２，亚克隆入ｐＵＣ１８质粒，获重组质粒，ｐＤＬ１２１。ＥｃｏＲⅠ酶切证实该重组质粒含有１ｋｂ的外源插入片段。ｐＤＬ１２１经ＩＰＴＧ诱导后，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上出现２３ｋｄ特异条带。免疫印迹表明该蛋白带可被抗赖型钩体兔血清识别。     

Ⅱ.链脲佐菌素所致胰岛β细胞超微结构的变化

作者报告链脲佐菌素引起大鼠实验性糖尿病过程中,胰岛β细胞超微结构的动态变化。观察结果发现,β细胞的数量减少,分泌颗粒减少,核心丧失,部分大鼠胰岛内出现再生的β细胞,这些改变是血糖升高的形态学基础。     

钩端螺旋体菌苗注射后发生的系统性变应性脉管炎(一例临床病理报告)

本文报告一例由钩端螺旋体菌苗注射引起的系统性变应性脉管炎。患者于1977年4月发病,次年3月20日入院治疗,1979年1月19日死亡,全病程642天。病理解剖发现血管炎累及皮肤、骨骼肌、肝、肺、脾、肠道等脏器。本例钩端螺旋体抗原成分可能是发病的始动因索,患者的过敏性体质是发病基础。本病早期如用大剂量皮质激素,可能治愈。     

钩体017株基因库pDJH2与L.alstoni重组DNA探针同源性及pDJH…

用地高辛标记含完整ＯｍｐＬ１结构基因之Ｌ．ａｌｓｔｏｎｉ２．５ｋｂＥｃｏＲ１重组ＤＮＡ探针与我们构建的赖型钩体０１７株基因库重组质粒ｐＤＪＨ２进行ＤＮＡ－ＤＮＡ杂交。此赖型０１７株钩体重ＤＮＡ经ＩＰＴＧ诱导后能在大肠菌中表达，以及其表达产物的保护性动物试验结果，在所查国内外文献中尚属首次报道。