钩端螺旋体冷冻蚀刻复型的超微结构研究

作者应用冷冻蚀刻复型技术研究3株钩用螺旋体的超微结构,发现:①钩体在冷冻蚀刻复型下的形态与超薄切片及负染的观察结果基本一致,不同种属与毒力的钩体其冷冻蚀刻复型的超微结构无明显差异;②钩体外膜蛋白颗粒呈球形,其分布明显不对称。在外膜的EF面,蛋白颗粒密集分布,其密度为776～2303个/μm~2,直径为14.25±2.25nm,而PF面则甚少,呈平滑状;③轴丝位于圆柱形菌体与外膜之间,直径20nm,外周有一7nm鞘状结构包绕;④钩体细胞质中有核糖体、核质及包涵体等亚细胞结构存在。本研究结果表明:冷冻蚀刻复型技术较其他方法能更清晰地显示接近生活状态的钩体的超微结构。     

非放射性探针杂交检测早期钩端螺旋体病患者血清钩体DNA的研究

作者首次应用非放射性地高辛配基、光敏生物素探针并以~(32)P探针作对照,斑点杂交检测33创早期钩体病人血清。结果,三种探针杂交的阳性率分别为69.70％(23/33)、27.27％(9/33)、57.58％(19/33)。地高辛配基探针的杂交阳性率高于血培养(20/33),明显优于光敏生物素探针(p<0.01),稍高于~(32)P探针。阴性对照标本中,光敏生物素探针杂交1例出现阳性,地高辛配基,~(32)P探针无阳性结果出现。     

应用ELISA检测SLE病人血清抗双链DNA抗体

作者用ELISA间接法检测SLE、非SLE病人及正常人血清抗双链DNA抗体。结果显示:活动期SLE病人19例中18例阳性;非活动期SLE病人32例、非SLE病人11例及正常人48例均为阴性。本法用于鉴别活动期SLE具有高度特异性和敏感性,操作简便,结果可靠,重复性好。     

钩端螺旋体病肺弥漫性出血实验模型肺微血管结构和机能变化的探讨

作者用六种现代实验技术对钩体病PDH动物模型的肺微血管结构和机能进行了动态研究,证实肺微血管内皮出现多量巨大空泡、融合通道、细胞连接开放和膜蛋白微粒异常等;注入示踪的胶体炭、铁蛋白和荧光蛋白通过这些间隙漏出血管腔,可见钩体与病变局部的微血管内皮紧密粘附。此结果表明,钩体病PDH的发生是红细胞通过肺微血管内皮开放的连接等多条途径的外溢过程。     

赖型017株钩体疏水外膜蛋白及其免疫特征的研究

采用低浓度非离子型去污剂ＴｒｉｔｏｎＸ－１１４（ＴＸ－１１４）抽提和分离问号状钩端螺旋体（钩体）黄疸出血群赖型０１７株（０１７），选择性地将钩体外膜蛋白分离为ＴＸ－１１４疏水相和亲水相两个部分。疏水相外膜蛋白含５条主要蛋白区带，其分子量分别为６６ｋｄ、３９ｋｄ、３５ｋｄ、２７ｋｄ和１６ｋｄ，其中仅３９ｋｄ外膜蛋白区带可特异地分别被抗全０１７血清、抗０１７外膜血清和抗０１７保护性单克隆抗体Ｅ４Ｂ７Ｇ５所识别。本研究结果表明经ＴＸ－１１４抽提分离的３９ｋｄ疏水外膜蛋白为０１７钩体稳定的免疫原，在研究钩体保护性抗原和构建基因工程疫苗中有十分重要的研究价值。     

中国病理生理学会第四届炎症发热感染学术讨论会议召开

中国病理生理学会第四届炎症发热感染低温学术讨论会议于1991年7月24～27日在成都华西医科大学药事管理培训中心举行。会议共收到研究论文(包括     

问号赖型钩体017株与七日热型钩体56610株内鞭毛蛋白基因的克隆及序列分析

目的通过不同型钩体DNA序列分析筛选钩体基因疫苗的候选株,并从基因水平解释钩体血清型的特异性.方法(1)酚、氯仿抽提法提取017株与56610株钩体基因组DNA.(2)分别以017株与56610株钩体基因组DNA为模板,PCR法扩增内鞭毛蛋白(flaB)基因.(3)T/A快速克隆法将两个flaB基因的PCR产物连接与Teasy-vector载体.(4)α-互补、PCR法初步筛选重组质粒.(5)碱裂解法小量提取质粒、酚切分析进一步鉴定重组质粒,确定外源基因插入方向.(6)双脱氧终止法对重组质粒的克隆化flaB基因进行测序.(7)应用软件对所测序列进行酶切位分析及编码蛋白的预测.(8)与已发表的钩体内鞭毛基因进行比较.结果经鉴定获得了两个重组质粒pDHTF017与pDHTF610.pDHTF017中flaB基因为反向插入,pDHTF610中的flaB基因为正向插入.两个重组外源flaB基因长度均为852bp,编码蛋白含283个氨基酸,预测分子量为31.5kD左右.两个基因的限制性内切酶位点相似,含多个常见酶切位点.几个血清型钩体的flaB基因比较发现型间同源性很高(90%-99%),变异通常发生在固定位点,各型选择不同的固定位点.结论(1)重组质粒pDHTF017与pDHTF610中的外源基因均为钩体的一种flaB基因;(2)flaB基因保守性强,可作为基因疫苗的靶基因;(3)七日热型钩体56610株的flaB基因有望成为核心抗原基因,可进行钩体疫苗的研究开发.     

问号澳洲型钩端螺旋体复合抗原基因ompL_1/flaB_2表达质粒的构建

目的　为增强澳洲型钩端螺旋体 (简称澳洲型钩体 ) 6 0 7株抗原的免疫原性 ,而构建其外膜蛋白抗原基因ompL1和内鞭毛抗原基因flaB2 的复合抗原基因重组质粒。方法　通过聚合酶链反应扩增ompL1及flaB2 ,将其分别克隆到pcD NA3 1/Myc-His(+)载体T7启动子下游 ,进行序列测定分析 ,在此基础上将ompL1及flaB2 同时克隆至表达载体 pcD NA3 1/Myc -His(+) ,构建成A - pcLMF1复合抗原基因表达质粒。结果　澳洲型钩体 6 0 7株的ompL1及flaB2 与报道的其它株钩体的序列呈很高的同源性。澳洲型钩体重组质粒A -pcLMF1经酶切鉴定证实 :有一 1 8kb片段插入。结论　澳洲型钩体复合抗原基因ompL1/flaB2 融合表达质粒构建成功     

四株钩端螺旋体外膜单克隆抗体的建立、鉴定及对外膜蛋白抗原的分析

作者应用杂交瘤技术获得了四株抗黄疸出血群赖型017株钩体外膜的单克隆抗体。经免疫扩散法鉴定表明,其抗体1A7E7为IgG_2,2F9D4、1A7H12和2G3H5为IgG_1。用免疫印迹分析发现,1A7E7特异地识别017株钩体外膜42kd蛋白区带,2F9D4识别三株致病性钩体外膜42kd的蛋白区带,而2G3H5和1A7H12特异地识别三株致病性钩体外膜的31kd蛋白区带。进一步研究致病性钩体所具有的蛋白质抗原分子的性质,对于寻找特异性诊断和保护性抗原会提供一定的线索。     

单克隆抗体E4B7D5对钩端螺旋体粘附抑制作用的扫描电镜观察

作者采用黄疸出血群赖型017株钩端螺旋体(钩体)外膜免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合等技术,获得单克隆抗体(McAb)E4B7D5,亚类鉴定为IgG_1,凝集效价为1:25600。经被动免疫保护试验证明,对同型017株钩体具有免疫保护作用。作者采用扫描电镜观察E4B7D5 McAb对钩体粘附于正常人胚肺成纤维细胞的影响,发现不同凝集效价的E4B7D5 McAb组,其钩体粘附明显少于对照组。作者认为,E4B7D5 McAb的免疫保护作用可能与其抑制钩体的粘附有关。