赖型钩端螺旋体基因文库的构建及重组质粒pDC38的初步研究

应用质粒载体ｐＵＣ１８购建了黄疸出血群赖型钧体的基因文库，重组率８６％，重组子约１２０００个。以ＯｍｐＬ１基因片断作探针从该基因文库中筛出１０个阳性克隆，其中重组质粒ｐＤＣ３８与７型８株致病钩体（黄疸出血群赖型、大型、致热型、秋季型、澳大利亚型、波摩那型、流感伤寒群临海型）ＤＮＡ杂交有杂交信号；与非致病的双曲钩体、细丝体，大肠杆菌和２型问号钩体（爪哇型、拜伦型）ＤＮＡ无杂交信号。     

抗绿脓杆菌Ⅰ群10115株单克隆抗体的调理吞噬活性的检测

作者用人体单层中性粒细胞技术,体外检测了抗绿脓杆菌Ⅰ群10115株单克隆抗体(A_4和D_4)的调理吞噬活性,证明BALB/c小鼠 B细胞杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体可显著增强人体中性粒细胞对同型绿脓杆菌的吞噬。     

赖型钩端螺旋体基因库的构建及致病性钩端螺旋体DNA同源序列的克隆

作者应用质粒载体pUC9构建了肺弥漫性出血型构端螺旋体(钩体)病的主要病原——赖型钩体的基因库,并从中筛选出与致病钩体DNA同源的重组质粒pCX7和pCX9。重组质粒pCX9可识别致病钩体017株DNA1.7kb片段、601株9.0kb片段及610株30.0kb片段,而不与非致病的双曲钩体Patoc I株和illini细螺旋体DNA杂交。本研究结果进一步表明:致病钩体与非致病钩体DNA的同源性很低;致病钩体间DNA同源性较高。     

赖型钩体重组质粒pDJH_2亚克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

为了探讨ｐＤＪＨ２的１．９ｋｂ０１７株钩体ＤＮＡ片段可否作为钩体重组疫苗广谱保护性抗原的候选，采用重组ＤＮＡ技术，将ｐＤＪＨ２的１．９ｋｂＤＮＡ片段分别与ｐＴ７－７，ｐＲＳＥＴ系列重组，转化入大肠杆菌进行亚克隆，ＩＰＴＧ诱导表达。结果显示：阳性亚克隆ｐＤＪｔ．ｐＤＪｒＢ１能在大肠杆菌中高效表达；对其进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，可见６８ｋｄ和２３ｋｄ处出现新带，与钩体０１７株外膜同分子量蛋白带位置一致，免疫印迹（特异性抗０１７株外膜抗血清）在６８ｋｄ和２３ｋｄ处分别有印迹；用ｐＤＪｔ亚克隆重组质粒主动免疫豚鼠，可抵抗强毒力株攻击，表现出免疫保护作用。本实验结果提示：（１）ｐＤＪＨ２１．９ｋｂ重组ＤＮＡ片段能以不同质粒为载体，在不同大肠杆菌株中高效表达；（２）该重组ＤＮＡ片段表达产物——６８ｋｄ和２３ｋｄ蛋白，可能是赖型钩体０１７株外膜的保护性抗原。     

应用分子杂交对钩端螺旋体DNA同源性的研究

作者以~(32)P标记的黄疸出血群赖型017株钩体DNA为探针,分别与2个属5个血清群的6株钩体DNA进行分子杂交。结果表明,黄疸出血群赖型017株与同群、型的56601株同源性较高,与秋季群(56606株)、七日热群(56610株)次之,与双曲钩体patoc型Patoc Ⅰ株、细螺旋体属illini细螺旋体同源性很低;~(32)P标记的钩体DNA探针能检测四川地区流行的致病性钩体。     

问号状钩端螺旋体外膜单克隆抗体凝集反应特性的研究

作者用黄疸出血群赖型钩体外膜免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP 2/0骨髓癌细胞融合,筛选出三株抗问号状钩体外膜 McAb。显凝试验(MAT)表明 McAb的E4B11C9株与选用的黄疸出血群的13型钩体(占选用的100％)均发生凝集反应,而选用的其他18群钩体(占选用的100％)和非致病性Patoc Ⅰ株钩体,伊利尼细螺旋体均为MAT阴性,MAT效价低于1:25。从而证明 E4B11C9 McAb具有黄疸出血群钩体的群特异性。     

钩端螺旋体七日热群部分群特异McAb的建立与鉴定

经脾内注射七日热群七日热型钩体外膜抗原免疫BALB/c小鼠,取脾内细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,筛选出两株抗七日热群钩体的McAb.显凝试验(MAT)表明,Af_2和Bb_2两株McAb均能与选用的七日热群9型钩体中的8型钩体发生凝集反应,但不与卡布那型钩体凝集,而选用的其他20群33型问号钩体,双曲钩体Patoc Ⅰ株和细螺旋体伊尼利型3055株均为MAT阴性,从而证明Af_2和Bb_2两株McAb具有七日热群部分群特异性.     

问号赖型钩体重组质粒rpDJt表达蛋白P68免疫原性的研究

为构建一种新型钩体重组亚单位疫苗，采用问号钩体ｒｐＤＪｔ基因的蛋白表达物Ｐ６８免疫动物，对其免疫原性进行研究。结果显示：在体外，Ｐ６８能与其特异性抗血清及赖型钩体死菌苗抗血清呈明显高效价Ａｇ－Ａｂ反应；在体内，Ｐ６８能激起明显的Ｔ淋巴细胞转化，ＴＨ细胞活化，ＩＬ－２，ＩＬ－６活性增加。提示：ｒｐＤＪｔ表达蛋白Ｐ６８能激起机体强有力的Ｔ－Ｂ细胞协同性特异性体液免疫反应，是致病性强毒力钩体重组亚单位疫苗好的候选抗原之一。     

~(125)碘标记单克隆抗体检测钩端螺旋体抗原在豚鼠体内的分布

作者用~(125)碘标记抗黄疸出血群赖型017株钩体的McAb(LB_1株IgG_2b)静脉注入钩体病肺弥漫性出血型豚鼠,证实钩体抗原主要分布在肝、肾、肺及脾器官内。以往抗血清抗体放射自显影实验在肺内钩体抗原很少,本结果表明肺内有不少钩体抗原(平均为82.2 16×10~3cpm/200mg),揭示了用单克隆抗体结合~(125)碘探讨钩体特异性抗原在肺组织分布,具有高特异性和敏感性。     

Sequence analysis of small subunit ribosomal DNA of cutaneous leishmaniasis pathogen from Xinjiang,China

ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｃｈｏｏｓｅｔｈｅｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆｖａｒｉａｂｌｅｒｅｇｉｏｎｏｆｔｈｅｓｍａｌｓｕｂｕｎｉｔｒｉｂｏｓｏｍａｌＤＮＡ（ＳＳＵｒＤＮＡ）ａｓｔａｒｇｅｔｇｅｎｅｔｏｃｏｍｐａｒｅｗｉｔｈｔｈｅｓｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆｃｕｔａｎ...