慈菇抑制剂的制备、固定化及其应用

本文介绍一种制备慈菇抑制剂的简便方法。用ABSE—交联琼脂固定慈菇抑制剂,并研究此固定化抑制剂对某些蛋白酶抑制活力的变化。此外,探讨了在某些蛋白酶分离、纯化中应用的可能性。自从牛胰Kumitz抑制剂[商品名:抑肽酶,Trasylol]应用于临床,治疗急性胰腺炎、烧伤等疾病取得明显疗效以来,蛋白酶抑制剂的研究进一步受到各方面的重视。至今发现的蛋白酶抑制剂已有几十种之多。其中丝氨酸蛋白酶抑制剂多数只能抑制胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的活力。有的还能抑制血清激肽释放酶。但能抑制组织激肽释放酶的却很少。张先扬、戚正武从慈菇中分离、纯化、结晶了慈菇抑制剂。它不但能抑制胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶,还能抑制组织激肽释放酶。因此与其他来源的丝氨酸蛋白酶抑制剂相比较,有其更多的应用价值。本文在前文工作的基础上,比较简便的方法纯化、结晶,并制备了固定化慈菇抑制剂。研究了此固定化慈菇抑制剂对某些蛋白酶抑制活力的变化。并进一步应用于某些蛋白酶制剂的提取、纯化。有关这方面的研究,在国内尚未见有报道。     

蛋白酶的生物调控作用(二)

3.凝血体系在蛋白酶生物调控中血液凝固可认为是最典型最完臻的体系,它能极其微妙地自我调节,并有各种放大及正负反馈效应,整个体系有10余因子参与,其中大多是蛋白酶。整个凝血过程大致上可分为两个阶段:即机体接受凝血信号后,动员一切凝血因子使凝血酶原迅速激活,接着凝血酶选择性地裂解纤维蛋白原使其转变为纤维蛋白,从而产生止     

尸体标本中皮肤色变的研究

浸泡于甲醛中的尸体皮肤日久后颜色变深,以往倾向于认为此系血红蛋白中辅基铁卟啉的氧化所致。本实验利用血红蛋白的特征性吸收光谱、还原后的光谱改变及血红素-氯化物结晶的方法证明在皮肤表皮中不存在血红蛋白或血红素。将尸体表皮经酸水解后可分成三个色素部分,即脂溶性色素、水溶性色素及酸不溶的黑色沉淀,此黑色沉淀经红外光谱及碱熔融后层析鉴定证明与头发中的黑色素相同,故而推测尸体皮肤的色变很可能与黑色素有关,并探讨了黑色素形成的机制。     

凝血因子Ⅷ(FⅧ)在哺乳动物细胞中的表达研究

对FⅧ cDNA进行分子改建，并分别克隆到表达载体中，在多种哺乳动物细胞表达体系（CHO、BHK等）成功地获得了表达。结果证实：基因的改建可以有效的提高FⅧ在细胞中的表达。FⅧ B结构域的缺失比全长FⅧ的表达量提高了3倍左右，而重链和轻链的共表达及vWF与FⅧ的共同转染使得其表达量进一步提高。与CHO表达系统相比较，FⅧ在BHK表达系统中的表达量提高了近10倍。     

绿豆胰蛋白酶抑制剂两活性区域的拆分

绿豆胰蛋白酶抑制剂是一小分子蛋白质,具有两个活性区域,可以同时抑制两分子胰蛋白酶。用苯乙二醛及顺丁烯二酸酐分别进行化学修饰,都可使其活力降至原有的50％左右,表明此两活性中心分别应为精氨酸残基及赖氨酸残基。绿豆抑制剂经胃蛋白酶酶解后,活力不丧失,在凝胶过滤中出现分子量为原抑制剂一半的新活力峰,经证实为两个不同活性中心的活力碎片。利用两活     

蛋白酶的生物调控作用(一)

在蛋白质化学的发展史中,蛋白酶的研究占极重要的地位,由于它来源丰富,容易提纯,分子量小,功能较简单,因而对其蛋白质的一级结构至高级结构以及酶的作用机制的研究一直处于领先地位,这是其它酶类无法比拟的,进入70年代以后从对个别蛋白酶的研究逐渐转到某一蛋白酶体系的研     

干细胞的研究进展

在美国《Ｓｃｉｅｎｃｅ》杂志评选出的１９９９年度１０大科学进展中,干细胞（ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ, ＳＣ）的研究工作格外令人瞩目。这不仅因为在过去短短的一年里,科学家们在干细胞的功能研究方面发表了１０余篇具有里程碑意义的论文,更重要的是,这些突破性进展使得生物学家和医学家们更进一步地认识到：ＳＣ作为一类既有自我更新能力、又有多分化潜能的细胞,具有非常重要的理论研究意义和临床应用价值［１］。这些成果一方面揭示了许多有关细胞生长和发育的基础理论难题;另一方面,可望将其用于创伤修复、神经再生和抗衰老等临床医…     

逆转录病毒载体介导人凝血因子Ⅷ在哺乳细胞中的高效表达

目的　建立逆转录病毒载体介导的人凝血因子Ⅷ (FⅧ )体外高效表达体系。方法　将一B区缺失 (76 0aa～ 16 39aa)的人FⅧcDNA(FⅧcDNABD)克隆至逆转录病毒载体pLNCX ,构建了重组表达载体LNC ⅧBD。经PA317细胞包装后 ,感染多种靶细胞。分别采用一期法、ELISA法和RT PCR检测细胞培养上清中人FⅧ的凝血活性 (FⅧ∶C)和抗原含量 (FⅧ∶Ag)以及细胞中FⅧcDNABD的转录。结果　重组逆转录病毒载体LNC ⅧBD在四种靶细胞中有不同程度的表达。其中以NIH3T3细胞的表达最高 ,FⅧ∶C为 1.6U/ 10 6细胞·2 4hrs 1,FⅧ∶Ag为 5 0 0ng/ 10 6细胞·2 4hrs 1。CHO细胞表达的FⅧ∶C活性为 0 12U/ 10 6细胞·2 4hrs 1,FⅧ∶Ag为 6 2 4ng/10 6细胞·2 4hrs 1。FⅧ在Cos 7和一正常成人肝细胞系L 0 2中表达较低。RT PCR可检测到靶细胞中人FⅧcDNABD的转录的mRNA。结论　逆转录病毒载体能够介导人FⅧ的体外高效表达 ,为血友病A的基因治疗奠定了基础     

人脑源性神经营养因子cDNA克隆及在酵母中的表达

目的：克隆和表达人脑源性神经营养因子（ｈＢＤＮＦ）。方法和结果：从原代培养人雪旺细胞中提取总ＲＮＡ，用ＲＴ－ＰＣＲ法获取了编码带前导肽的和成熟的ｈＢＤＮＦ２个ｃＤＮＡ片段，经ＤＮＡ测序表明其顺序与文献报道一致。将这２个ｃＤＮＡ片段分别插入到大肠－酵母穿梭质粒ｐＶＴ１０２Ｕ／α上。用酵母整体细胞法将重组质粒转化酵母宿主细胞，经筛选后，获得分泌性表达。表达产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳鉴定，大小都在１５０     

鸡胚背根神经节感觉神经元体外培养的聚集作用

体外培养鸡胚背根神经节感觉神经元时观察到，分散的神经元细胞具有显著的重新聚集倾向，１０％血清或０．５％牛血清白蛋可以防止细胞的重新聚集。背根神经节感觉神经元聚集倾向的机制尚不清楚，可能与神经元细胞上Ｔｒｋ受体的Ｉｇ样结构域有关