转染干扰素-γ的神经前体细胞治疗小鼠脑胶质瘤的实验研究

目的:探讨小鼠干扰素-γ(mIFN-γ)基因修饰胚胎干细胞诱导而来的神经前体细胞(NPC)用于脑胶质瘤基因治疗的可行性。方法:小鼠胶质母细胞瘤G422经NPCs/pTracer/mIFN-γ条件培养液培养后,MTT法体外观测其对瘤细胞的抑制效应,TUNEL法观测凋亡。DAPI标记瘤细胞,建立小鼠脑胶质瘤模型,NPCs/pTrac-er/mIFN-γ经立体定向方法注入小鼠颅内,荧光显微镜下观察肿瘤生长情况。结果:NPCs/pTracer/mIFN-γ条件培养液培养的胶质瘤细胞生长受到抑制,与对照组比较差异有统计学意义,χ2=7.21,P=0.032。以50%条件培养液处理24、48和72 h后每中倍视野凋亡细胞数分别为2.5±0.9、3.4±1.2和6.6±2.0,显著高于对照组,t值分别为2.37、2.56和2.80,P值分别为0.041、0.034和0.022。将基因修饰的NPC移植到小鼠脑肿瘤模型后,该细胞能向肿瘤细胞方向迁移,与肿瘤浸润范围一致并可追踪远地浸润的瘤细胞。第14天瘤体积测量,对照组和治疗组分别为(62.09±0.55)mm3和(27.54±0.86)mm3,治疗组显著小于对照组,t=4.16,P=0.015。NPC/pTracer/mIFN-γ治疗组平均生存时间为(28.5±0.98)d,较对照组延长,t=3.81,P=0.012。结论:IFN-γ基因修饰胚胎干细胞诱导而来的NPC可稳定表达外源基因,是脑胶质瘤基因治疗的良好载体。     

移植神经元与受者神经系统功能整合研究进展

神经干细胞（neural stem cell，NSC）具有自我增殖和分化的生物学特性，为神经损伤和退行性疾病的治疗带来了新的曙光。尽管成年脑内依然存在NSC，但在损伤后完全依靠其自身的增殖分化尚不足以修复损伤的神经系统。通过移植NSC替代因疾病或损伤而丢失的神经细胞，进而修复神经系统的功能引起了神经科学家的极大兴趣。     

增强型绿色荧光蛋白基因转染小鼠胚胎干细胞及其无血清神经细胞诱导

目的构建表达绿色荧光蛋白的小鼠胚胎干细胞(MES)克隆，观察基因转染对MES细胞增殖和无血清诱导为nestin阳性神经前体细胞(NPCs)的影响。方法原代分离小鼠胚胎成纤维细胞并经丝裂霉素-C处理作为饲养层细胞。质粒的转化、抽提、纯化。电穿孔法基因转染，MES细胞克隆的NBT／BCIP染色，NPCs的nestin免疫组织化学染色。结果EGFP基因转染后可得到表达绿色荧光蛋白的MES细胞克隆，采用N2或ITSF无血清条件培养基可将其定向诱导为nestin阳性的并能发绿色荧光的NPCs。基因转染后的MES细胞增殖、神经前体细胞诱导率和未转染组相比均无明显下降，但NPCs绿色荧光的表达较诱导前明显下降。结论基因转染对ES细胞的增殖和神经分化无明显影响。     

神经前体细胞不是胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞分化的必经途径

探讨胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞分化的途径,对胰腺组织工程的临床运用有重要意义。将胚胎干细胞在有小鼠胚胎成纤维细胞饲养层和白血病抑制因子的条件下培养扩增后,再将扩增后的胚胎干细胞不经过神经前体细胞阶段直接诱导为胰岛素分泌细胞,并与传统的多阶段诱导(经过神经前体细胞阶段)进行比较。结果发现,胚胎干细胞脱离饲养层细胞后,经过9~10d的分化诱导,可以分化为具有胰岛β-细胞特征的胰岛素分泌细胞。与传统的多阶段诱导方法相比,诱导过程简化,诱导时间缩短,所得到的胰岛素分泌细胞数量无明显差异。说明胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞分化存在多条途径。神经前体细胞阶段不是胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞分化的必须途径。用传统的多阶段分化诱导法和直接诱导法都可以将胚胎干细胞诱导成胰岛素分泌细胞。     

内源性NSCs在神经损伤中的激活及迁移机制

神经干细胞是一种具有自我更新能力的多潜能分化细胞,在神经损伤后,脑室下区和海马齿回颗粒下层的神经干细胞能够增殖,在细胞因子和其他蛋白质的作用下,增殖的干细胞可能会靶向性迁移到损伤区,分化成神经元或神经胶质细胞修复和替代坏死或凋亡的神经元。在迁移过程中,炎症因子、生长因子、趋化因子等通过一系列信号转导途径引导干细胞的迁移,但迁移的因子之间、因子与细胞之间关系网络复杂,受多种因子综合作用的影响,因此目前对内源性神经干细胞的靶向性迁移机制尚不清楚。     

Noggin在大鼠中枢神经系统发育过程中的表达

目的 研究Noggin基因在大鼠中枢神经系统(CNS)发育过程中的表达。方法 地高辛标记的cRNA探针原位杂交组织化学技术。结果 ISHH结果显示，在胚胎期(E16)大鼠，noggin mRNA阳性细胞主要位于大脑皮质、海马、丘脑与下丘脑的部分核团。新生期(P1-P2)大鼠，noggin在大脑皮质与海马的表达均降低，而在丘脑与延脑的表达增强；生后1周(P1W)noggin在脑内的表达明显降低，生后2周noggin在脑内的表达开始升高，在大脑皮质与海马升高尤为明显。生后1个月，noggin表达继续升高，在额叶皮质、顶叶皮质、扣带皮质、梨状皮质及海马的齿状回可检测到强阳性信号；而在丘脑的侧核、网状核、腹内侧核与腹外侧核可见中等强度的阳性信号。此外，在下丘脑的室旁核和视上核亦可见密集深染的阳性神经元。生后3个月，noggin阳性细胞在脑内的表达开始降低；生后18个月，noggin表达降至最低，仅见散在的阳性神经元。此外，在不同发育期大鼠的脊髓亦未观察到noggin mRNA阳性细胞。结论 提示noggin基因参与大鼠生后CNS的发育。     

一种国产胃泌素释放肽前体化学发光免疫试剂的性能验证

目的 胃泌素释放肽前体(progastrin- releasing peptide,proGRP)是鉴别小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)与非小细胞肺癌(non- small cell lung cancer,NSCLC)及其他良性肺部疾病的重要标志物。长光华医研发生产了proGRP化学发光免疫分析试剂(chemiluminesent immunoassay,CLIA),厂家声明,该试剂精密性<10%,检出限为5pg/mL,回收率在±10%之间,参考区间为<65pg/mL,线性范围为15~3000pg/mL,血清与血浆相关性良好,血清稳定性可达96 h,与Roche电化学发光法proGRP试剂相关性良好。在此对该试剂进行了性能验证。方法 采取美国临床实验室标准化协会(CLSI)文件推荐的方法及美国病理家协会CAP要求,对该国产proGRP检测试剂盒及配套仪器AE- 180检测系统进行精密度、分析灵敏度、回收率、线性范围、参考区间、血清血浆一致性及血清稳定性进行性能验证,并跟罗氏e601系统平行检测199例包括健康体检样本、小细胞肺癌、非小细胞肺癌及良性肺部疾病样本,比较2种检测系统结果的一致性。结果 该国产化学发光proGRP精密性良好,批内变异系数在2.8%~3.2%,总变异系数为4.3%~5.2%;检出限为5pg/mL;回收率在90.6%~105.2%;参考区间为<65 pg/mL;线性范围为15~3000 pg/mL;血清与EDTA血浆相关性良好;血清稳定性可达96 h;与Roche电化学发光法检测结果相关系数为0.99,斜率和截距分别为0.9889和1.28 pg/mL,相关性良好。结论该国产CLIA 法检测proGRP 性能参数和厂商声明一致,其性能可以满足临床要求。     

Mel-la,Mel-1b褪黑素受体在大鼠海马分布的原位杂交研究

Mel-la,Mel-1b为分别从人大脑和视网膜克隆的两种褪黑素膜受体.随着褪黑素的各种重要生理作用的不断发现,对其受体的研究也日益广泛和深入.本文采用原位杂交技术研究了Mel-1a,Mel-1b两种褪黑素膜受体mRNA在海马中的表达和分布,结果表明此两种受体mRNA在成年大鼠海马各区神经元中均有表达.由于褪黑素是通过细胞膜上与G蛋白耦联的Mel-1a,Mel-1b受体而发挥作用的,而海马又是与老化密切相关的脑区,提示褪黑素对海马的老化有调节作用.     

AP-V和荷包牡丹碱对急性低压性低氧大鼠下丘脑内生长抑素阳性神经元的影响(英文)

目的:研究2-Amino-5-phosphonovalerate-pharmacology(AP-V)和荷包牡丹碱对急性低压性低氧大鼠下丘脑内生长抑素(SST)阳性神经元的影响。方法:用免疫组织化学和原位杂交技术检测大鼠下丘脑内SST-IR和SS mRNA阳性神经元数。结果:急性低氧引起下丘脑室周核(PeV)、室旁核(PVN)、弓状核(ARC)SST-IR和SS mRNA阳性神经元数明显增多,该效应可被NMDA受体拮抗剂AP-V(10μg,icv)明显抑制;而GABA_A受体拮抗剂荷包牡丹碱(1.5mg·kg~(-1),ip)则使其增强。结论:这些结果表明下丘脑内的生长抑素参与了急性低压低氧反应,且谷氨酸和GABA分别通过NMDA受体与GABA_A受体影响下丘脑内生长抑素的释放与合成。     

关节炎大鼠脊髓背角内脑源性神经营养因子和促肾上腺皮质激素释放因子表达增加(英文)

研究表明 ,外周感染可导致脑源性神经营养因子 (BDNF)的过度表达 ,BDNF可影响其他神经递质的合成。采用免疫组化和原位杂交的方法观察了完全福氏佐剂所致的关节炎大鼠脊髓内 BDNF及其功能性受体酪氨酸蛋白激酶 B(trk B)的表达和促肾上腺皮质激素释放因子 (CRF) m RNA的水平。实验发现 ,在皮下注射完全福氏佐剂后 4h,脊髓腰膨大同侧背角中的 BDNF免疫活性神经元和 CRF m RNA阳性神经元数升高 ,在 2 4 h时达到峰值 ,在 7d时仍维持在较高水平。实验提示 ,关节炎大鼠脊髓内的 BDNF和 CRF可能参与了慢性痛反应。