新蛋白C7orf42促进大鼠肝细胞BRL-3A增殖

目的探讨未知功能蛋白C7orf42对体外培养的大鼠肝细胞BRL-3A增殖的影响。方法基因干涉下调C7orf42表达后,用MTT、Ed U掺入法检测C7orf42对BRL-3A细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期进程以及Reat-time PCR和Western blotting检测细胞增殖相关基因表达。结果 MTT法检测表明,转染C7orf42干涉片段后48h,干涉组比阴性对照组细胞活力降低11%(P0.05);Ed U掺入法检测表明,实验组的Ed U阳性细胞比率比对照组降低了13%(P0.05);流式细胞术检测表明,干涉组比阴性对照组S+G2/M期的细胞数降低12%(P0.05);Reat-time PCR检测表明,干涉C7orf42表达后细胞增殖相关基因JUN、CCND1、MYC和CCNA2的表达分别下调26%、31%、37%和14%(P0.05);Western blotting检测表明,干涉C7orf42表达后细胞增殖相关蛋白JUN、CCND1、MYC和CCNA2的表达分别下调59%、54%、18%和27%(P0.05)。结论 C7orf42可能通过上调细胞增殖相关蛋白JUN、CCND1、MYC和CCNA2的表达,促进体外培养的大鼠肝细胞BRL-3A增殖。     

生长停滞和DNA损伤诱导蛋白45α在肝再生及肝病中的研究进展

生长停滞和DNA损伤诱导蛋白45α（GADD45α）是一种应激诱导蛋白,它可诱导Gadd45α基因的表达。GADD45α在再生肝及肝硬化、肝癌、肝衰竭等肝病中表达显著上调,与多种肝病发生发展及预后密切相关。GADD45α蛋白通过与其他蛋白相互作用,在调控细胞周期、维持基因组稳定、诱导细胞凋亡等方面发挥重要作用。以下我们综述了GADD45α与肝再生关系的研究进展,为进一步了解肝再生与肝脏疾病的发生机制以及治疗和预防肝病奠定基础。     

CEBPs及其调节的基因与大鼠肝再生相关性分析

目的:探讨基因转录水平CCAAT增强子结合蛋白(CEBPs)及其调节基因在肝再生(LR)中的作用.方法:将与肝再生相关的CEBPs家族转录因子输入NCBI(www.ncbi.nlm.nih.gov)和RGD(rgd.mcw.edu)等网站查找与其转录功能相关的文献,从中得出大鼠、小鼠和人的CEBPs家族下游基因.然后将人和小鼠基因与大鼠比对,筛选出与大鼠不重复的人和小鼠基因.再将他们与Rat Genome 230 2.0芯片的检测结果进行比对确认,把其中表达上调或下调2倍以上的基因视为有意义变化的大鼠同源基因.用Rat Genome 230 2.0芯片检测他们在大鼠再生肝中的表达情况,用真、假手术比较方法确定肝再生相关基因.结果:27个基因与肝再生相关,其中11个基因表达上调,6个基因表达下调,10个基因在有的时点表达上调,有的时点表达下调(简称上/下调表达).他们的上调范围为对照的2-128倍,下调范围为对照的2-16倍.肝再生启动[部分肝切除(PH)后0.5-4 h]、G_0/G_1过渡(PH后4-6 h)、细胞增殖(PH后6-66 h)、细胞分化和组织结构功能重建(PH后72-168 h)等4个阶段起始表达的基因数分别为18,3,8和1;基因的总表达次数分别为18,11,25和16.表明相关基因主要在肝再生启动阶段起始表达,在不同阶段发挥作用.他们共表达上调126次,下调76次.表明肝再生中表达上调基因多于表达下调基因.结论:CEBPs及其调节的基因与肝再生中细胞增殖、细胞分化、细胞凋亡、炎症反应、应激反应、脂类代谢和细胞外基质变化等密切相关.     

肝细胞癌多基因表达异常的初步研究

在我国,HBV感染是导致HCC的主要原因,其发生涉及到多基因表达的改变,单基因研究很难代表HCC基因变化的全貌,借助于DNA芯片这一高通量基因表达谱分析手段,有可能揭示HCC多基因表达异常的变化状况,探讨其相互关系及作用机制。我们应用含有18993个已知基因的Affymetrix U133plus 2．0芯片研究HCC患者及正常人肝组织基因表达情况，初步分析差异基因表达及其在HCC中的可能作用。[第一段]     

连续部分肝切除对大鼠肝磷酸酶,热休克蛋白和增殖细 …

以连续三次（间隔４ｈ）部分肝切除（ＣＰＨ）大鼠为模型，分析了ＣＰＨ对肝脏酸性磷酸酶（ＡＣＰ）、碱性磷酸酶（ＡＫＰ）活性和对构成性热休克蛋白７０／诱导性热休克蛋白６８（ＨＳＣ７０／ＨＳＰ６８）和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）含量的影响。结果表明：第１次切除肝左叶后４ｈ，ＡＣＰ和ＡＫＰ活性及ＨＳＣ７０／ＨＳＰ６８和ＰＣＮＡ表达量均增加；第２、３次分别切除肝中叶、右叶后，ＡＣＰ活性和ＰＣＮＡ含量与ＡＫＰ活性     

液压转基因技术应用于大鼠再生肝转基因实验

目的 探讨液压转基因技术(HDT)应用于大鼠再生肝转基因的条件和方法 . 方法 以2ml/s的速度将浓度为30mg/L的含目的 基因的质粒注射入大鼠尾静脉,于注射前/后不同时间进行大鼠2/3肝切除(PH),于PH后不同恢复时间称量大鼠体重(g)和再生肝重(g),计算肝系数(Lc),并从Lc±Lc*0%、*5%、*10%、*15%、*20%、*25%、*30%、*35%等15组中找出最佳组,作为计算不同恢复时间再生肝最适注射质粒溶液量的校正系数(Trc);取大鼠肝右叶中部组织制备冷冻切片,在波长488nm的荧光显微镜下观察、计数1万个细胞中的绿色荧光蛋白阳性细胞百分率. 结果 PH后注射生理盐水和注射空质粒对肝再生的影响与对照(只进行PH)相比无显著差异.PH前液压转基因的合适时间是PH前≥12h;PH后所有时间均可进行液压转基因.PH后对肝再生大鼠进行液压转基因的转基因溶液体积为大鼠体重(g)×9%×1/3×相应的校正系数(Trc).转入基因在体内的表达时间和丰度既受载体影响,又受插入的目的 基因影响. 结论 液压转基因技术亦可有效地应用于大鼠再生肝转基因研究.     

整合素α1、层黏连蛋白和IL-1α在大鼠肝再生过程中的表达变化

目的　通过检测整合素α1、层黏连蛋白 (LN)和IL 1α在大鼠肝再生过程中的表达变化 ,探讨肝细胞增殖的机制。　方法　SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组和实验组。切除实验组大鼠 2 3肝 ,分别于术后不同时段取肝 ,以免疫组织化学方法检测肝组织中整合素α1和LN的表达变化 ,以ELISA方法测定肝组织和库普弗细胞内IL 1α的含量变化。　结果　 1 整合素α1定位于肝细胞膜和细胞质 ,术后 4h其免疫反应阳性肝细胞数开始增多 ,2 4～ 36h达高峰 ,1 4 4h后恢复正常 (P <0 0 1 ) ;2 肝内LN免疫反应阳性面积于 1 2h开始增加 ,2 4～ 4 8h达高峰 ,术后 1 2h阳性肝细胞数增多 ,以 2 4～ 36h最多 (P <0 0 1 ) ,96h后恢复正常 ;3 IL 1α在肝组织中的含量于术后 1h开始升高 ,3h达高峰 ,4h后低于正常并持续至 1 4 4h(P <0 0 1 ) ,在库普弗细胞内的含量于术后 0 5h开始升高 ,1 5～ 4h维持在高峰 ,1 2h后低于正常并持续至 96h(P <0 0 1 )。　结论　库普弗细胞分泌的IL 1α可能是肝再生早期刺激肝细胞增殖的信号分子之一 ,肝再生期间肝细胞与细胞外基质之间的黏附过程可能与整合素α1和LN有关。     

麻醉对小鼠热休克反应的影响

目的 通过分析麻醉状态和清醒状态小鼠在相同热休克条件下的热休克反应异同，了解整体调控在生物热休克反应中的意义和作用。方法 经40、42、44和46℃，分别处理清醒状态和麻醉状态小鼠30min，于正常饲养条件下恢复24h后，检测其肝脏热休克蛋白70(HSP70)的表达差异及酸性和中性蛋白水解酶活性变化。结果 当热休克温度为44～46℃时，清醒状态小鼠肝脏的HSP70合成能力下降，而麻醉小鼠肝脏保持较强的HSP70合成能力；两组小鼠肝脏的酸性蛋白水解酶活性基本与HSP70合成正相关，中性蛋白水解酶活性基本与HSP70合成负相关。结论 麻醉状态小鼠肝脏的热休克耐受性大于清醒小鼠；小鼠肝脏的热休克反应受整体和细胞两个水平调控，并涉及除HSP70合成以外的其他生化活动。     

肝干细胞的生长和分化与大鼠肝再生的相关性分析

目的在基因转录水平了解肝干细胞在大鼠肝再生中的作用。方法用搜集网站资料和查阅相关论文等方法获得参与肝干细胞生长和分化的基因,用大鼠基因组230 2.0芯片检测它们在大鼠部分肝切除(PH)后肝再生中的表达情况,用比较真、假手术中基因表达差异性确定上述基因中的肝再生相关基因。结果初步证实上述基因中50个基因与肝再生相关。肝再生启动(PH后0.5~4h)、G0/G1过渡(PH后4~6h)、细胞增殖(PH后6~66h)、细胞分化和组织结构功能重建(PH后72~168h)等4个阶段起始表达的基因数为24、10、21和2;基因总表达次数为242、3、46和26,表明相关基因主要在肝再生启动阶段起始表达,在不同阶段发挥作用。它们共表达上调153次、下调123次,分为6种表达方式,表明肝再生中细胞生理生化活动多样和复杂。结论肝再生中肝脏干细胞的生长和分化活动加强,与某些基因表达状态和方式有关。     

GADD45α对大鼠部分肝切除后肝脏再生的调控作用

目的探讨生长阻滞和DNA损伤诱导基因GADD45α在大鼠部分肝切除(PH)后肝再生中的作用及其调节机制。方法将114只大鼠随机分为19组,2/3肝切除9组,手术对照9组,正常对照1组,制作大鼠部分肝切除模型,然后用大鼠基因组芯片Rat Genome 230 2.0检测部分肝切除后再生肝的基因表达变化,采用实时定量PCR技术验证芯片检测结果。利用谱函数(Ep)分析基因表达变化预示的生理活动改变,进而通过Ingenuity Pathway Analysis(IPA)汇总GADD45α调控肝再生的信号通路并分析其可能的分子机制。结果 GADD45α在PH后2~6h、24h和36~72h均表达上调,GADD45α通过NF-κB、p38PRAK、p53、STAT3-p21、STAT3-Bcl-2、STAT3-c Myc等6条途径参与大鼠部分肝切除后的肝脏再生调控。谱函数分析发现,GADD45α调控的生理活动的变化情况基本与大鼠肝再生进程相符。结论 GADD45α在大鼠肝再生中可能通过上述信号通路调控细胞增殖、细胞周期和细胞存活等生理活动,进而调节肝脏的再生。