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液压转基因技术应用于大鼠肝脏转基因实验 总被引:2,自引:2,他引:0
目的 探讨液压转基因技术(HDT)应用于大鼠肝脏转基因的条件、方法. 方法 以不同速度从大鼠尾静脉注射不同体积、浓度的含绿色荧光蛋白基因质粒pEGFP-C1,于注射后不同时间取大鼠(各4只)各肝叶制备冷冻切片,在波长488nm的荧光显微镜下观察、计数各肝叶的绿色荧光蛋白表达情况. 结果 在一次性注射浓度为30mg/L质粒、注射速度为2ml/s、注射体积为大鼠体重9%的条件下,注射pEGFP-C1质粒后6h,绿色荧光蛋白阳性细胞比例最高,占肝脏总细胞的20%以上,从24h起绿色荧光蛋白的表达量逐渐减少,至72h时各肝叶均基本难以检出绿色荧光蛋白阳性细胞.在上述最佳条件下,绿色荧光蛋白在各肝叶的表达情况是:蒂状叶的绿色荧光蛋白阳性细胞约为30%,左叶、中叶、右叶约为20%,尾状叶约为10%. 结论 液压转基因技术可应用于大鼠肝脏转基因,其适宜条件是:质粒溶液的浓度为30mg/L,注射量为大鼠体重的9%,注射速度为2ml/s,观察转染率的适宜时间是转基因后6~24h. 相似文献
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目的 探讨5-羟色胺4(5-HT4)受体调节剂(激动剂和抑制剂)对肝部分切除(PH)后大鼠胃肠道5-羟色胺(5-HT)和肝再生的影响. 方法 60只成年SD大鼠PH后分为对照组、西沙必利(激动剂)组和GR113808(抑制剂)组3组;西沙必利组PH后每12 h按10mg/kg体重的西沙必利灌胃,GR113808组PH后每12 h按3mg/kg体重的GR113808腹腔注射;分别于PH后0 h、24 h、48 h、72 h计算肝/体重比,并取血液、胃、小肠和肝组织;用免疫组织化学技术显示胃肠中5-HT免疫阳性(5-HTIR)细胞,用图像分析系统测定胃肠5-HTIR细胞平均灰度,用酶联免疫吸附法(ELESA)检测血液中的5-HT,用银染技术显示肝细胞核仁组织区相关嗜银蛋白(AgNORs). 结果 与对照组比,1. 西沙必利组胃肠中5-HTIR细胞数于PH后48~72 h显著下降(P<0.05)、细胞的灰度于PH后24~72 h显著上升(P<0.05),血中5-HT的含量于PH后24~72 h显著上升(P<0.05),肝/体重比和肝组织AgNORs颗粒数在PH后48~72 h显著增加(P<0.05);2. GR113808组在PH后24~72 h期间,5-HTIR细胞数较对照组无显著性差异,但细胞的灰度显著下降(P<0.05或P<0.01),血中5-HT的含量显著下降(P<0.05或P<0.01),肝/体重比于48~72 h显著下降(P<0.05或P<0.01),肝中AgNORs颗粒数于24~72 h显著减少(P<0.05或P<0.01). 结论 用5-HT4受体调节剂改变胃肠道5-HT的分泌量,可导致肝/体重比和肝细胞的转录活性发生相应的改变;胃肠道分泌的5-HT具有促进肝细胞增殖的作用. 相似文献
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目的 了解大鼠肝再生启动阶段CCAAT增强子结合蛋白δ(CEBPδ) mRNA、miR-3553和rno-Acad8_0002调节肝细胞处于G0期还是G1期的途径和方法.方法 按Higgins等方法制备大鼠2/3肝切除(PH)模型,按Smedsrod等方法分离肝细胞,用大规模定量分析技术检测大鼠肝再生中肝细胞竞争性内源RNA (ceRNA)表达的变化,用Cytoscape 3.2软件构建ceRNA的相互作用网络,用ceRNA综合分析等方法解析它们表达和作用的相关性.结果 PH后0h和6h时,CEBPδ mRNA的比值为0.40±0.08和2.15±0.24,miR-3553为2.53±0.47和1.17±0.31,rno-Acad8_0002为1.24±0.04和2.66±0.54.CEBPδ抑制的G0期相关基因转化生长因子β受体2(TGFBR2)为2.77±0.20和0.79±0.13,磷脂酶A2-IVA(PLA2G4A)为2.56±0.76和0.42±0.13.CEBPδ促进的G1期相关基因纤溶酶原激活剂尿激酶受体(PLAUR)为0.27±0.08和2.62±0.31,丝裂原活化蛋白激酶14(MAPK14)为1.01±0.15和2.01±0.32,ETS变异转录因子6(ETV6)为0.77±0.05和2.22±0.68,血红蛋白加氧酶1(HMOXl)为1.05±0.21和4.57±0.88.结论 PH后0h时,CEBPδmRNA下调,有利于CEBPδ抑制的G0期相关基因表达和肝细胞处于G0期.相反,PH后6h时,rno-Acad8_0002和miR-3553的相互作用解除了后者对CEBPδ mRNA的抑制,有利于CEBPδ形成,有利于CEBPδ促进的G,期相关基因表达和肝细胞处于G1期. 相似文献
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液压转基因技术应用于大鼠再生肝转基因实验 总被引:1,自引:1,他引:0
目的 探讨液压转基因技术(HDT)应用于大鼠再生肝转基因的条件和方法 . 方法 以2ml/s的速度将浓度为30mg/L的含目的 基因的质粒注射入大鼠尾静脉,于注射前/后不同时间进行大鼠2/3肝切除(PH),于PH后不同恢复时间称量大鼠体重(g)和再生肝重(g),计算肝系数(Lc),并从Lc±Lc*0%、*5%、*10%、*15%、*20%、*25%、*30%、*35%等15组中找出最佳组,作为计算不同恢复时间再生肝最适注射质粒溶液量的校正系数(Trc);取大鼠肝右叶中部组织制备冷冻切片,在波长488nm的荧光显微镜下观察、计数1万个细胞中的绿色荧光蛋白阳性细胞百分率. 结果 PH后注射生理盐水和注射空质粒对肝再生的影响与对照(只进行PH)相比无显著差异.PH前液压转基因的合适时间是PH前≥12h;PH后所有时间均可进行液压转基因.PH后对肝再生大鼠进行液压转基因的转基因溶液体积为大鼠体重(g)×9%×1/3×相应的校正系数(Trc).转入基因在体内的表达时间和丰度既受载体影响,又受插入的目的 基因影响. 结论 液压转基因技术亦可有效地应用于大鼠再生肝转基因研究. 相似文献
68.
目的探讨未知功能蛋白C7orf42对体外培养的大鼠肝细胞BRL-3A增殖的影响。方法基因干涉下调C7orf42表达后,用MTT、Ed U掺入法检测C7orf42对BRL-3A细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期进程以及Reat-time PCR和Western blotting检测细胞增殖相关基因表达。结果 MTT法检测表明,转染C7orf42干涉片段后48h,干涉组比阴性对照组细胞活力降低11%(P0.05);Ed U掺入法检测表明,实验组的Ed U阳性细胞比率比对照组降低了13%(P0.05);流式细胞术检测表明,干涉组比阴性对照组S+G2/M期的细胞数降低12%(P0.05);Reat-time PCR检测表明,干涉C7orf42表达后细胞增殖相关基因JUN、CCND1、MYC和CCNA2的表达分别下调26%、31%、37%和14%(P0.05);Western blotting检测表明,干涉C7orf42表达后细胞增殖相关蛋白JUN、CCND1、MYC和CCNA2的表达分别下调59%、54%、18%和27%(P0.05)。结论 C7orf42可能通过上调细胞增殖相关蛋白JUN、CCND1、MYC和CCNA2的表达,促进体外培养的大鼠肝细胞BRL-3A增殖。 相似文献
69.
CEBPs及其调节的基因与大鼠肝再生相关性分析 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:探讨基因转录水平CCAAT增强子结合蛋白(CEBPs)及其调节基因在肝再生(LR)中的作用.方法:将与肝再生相关的CEBPs家族转录因子输入NCBI(www.ncbi.nlm.nih.gov)和RGD(rgd.mcw.edu)等网站查找与其转录功能相关的文献,从中得出大鼠、小鼠和人的CEBPs家族下游基因.然后将人和小鼠基因与大鼠比对,筛选出与大鼠不重复的人和小鼠基因.再将他们与Rat Genome 230 2.0芯片的检测结果进行比对确认,把其中表达上调或下调2倍以上的基因视为有意义变化的大鼠同源基因.用Rat Genome 230 2.0芯片检测他们在大鼠再生肝中的表达情况,用真、假手术比较方法确定肝再生相关基因.结果:27个基因与肝再生相关,其中11个基因表达上调,6个基因表达下调,10个基因在有的时点表达上调,有的时点表达下调(简称上/下调表达).他们的上调范围为对照的2-128倍,下调范围为对照的2-16倍.肝再生启动[部分肝切除(PH)后0.5-4 h]、G_0/G_1过渡(PH后4-6 h)、细胞增殖(PH后6-66 h)、细胞分化和组织结构功能重建(PH后72-168 h)等4个阶段起始表达的基因数分别为18,3,8和1;基因的总表达次数分别为18,11,25和16.表明相关基因主要在肝再生启动阶段起始表达,在不同阶段发挥作用.他们共表达上调126次,下调76次.表明肝再生中表达上调基因多于表达下调基因.结论:CEBPs及其调节的基因与肝再生中细胞增殖、细胞分化、细胞凋亡、炎症反应、应激反应、脂类代谢和细胞外基质变化等密切相关. 相似文献
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