大鼠肝再生中8种肝脏细胞的凝血反应相关基因转录谱预示的生理活动

目的 了解大鼠肝再生中8种肝脏细胞的凝血反应相关基因转录谱及其预示的生理活动。 方法 大鼠再生肝8种细胞的分离,基因表达变化检测,预示的生理活动分析用Cluster等软件及生物信息学和系统生物等方法进行,用Microsoft Excel等软件分析基因的表达模式。 结果 40个参与凝血反应的基因与肝再生相关,肝细胞、胆管上皮细胞、卵圆细胞、星形细胞、窦内皮细胞、库普弗细胞、陷窝细胞、树突状细胞的相应基因数为13、31、12、33、32、9、34、33。serpine1、a2m 在上述8种细胞,vwf、klkb1 在除库普弗细胞之外的7种细胞,其他基因在两种或两种以上细胞中发生有意义表达变化。上述基因转录谱预示,肝再生启动和进展阶段激肽释放酶和凝血酶原合成,凝血酶形成等活动增强。终止阶段纤维蛋白单体形成纤维蛋白聚合体等活动增强。 结论 大鼠肝再生与凝血反应密切相关。     

大鼠肝再生中肝脏细胞的基因转录谱预示EM>AI408225/EM>促进抗原肽与TCR结合

目的 了解新基因AI408225与大鼠肝再生涉及的体液免疫相关性。 方法 大鼠再生肝8种细胞的分离,采用Percoll密度梯度离心结合免疫磁珠分选方法进行,用Microsoft Excel、BLAST等软件分析基因的序列同源性及共表达关系,用生物信息学和系统生物学等方法分析新基因参与的生理活动。 结果 93个参与体液免疫的已知基因与肝再生相关,肝细胞、胆管上皮细胞、卵圆细胞、肝星形细胞、窦内皮细胞、库普弗细胞、陷窝细胞、树突状细胞的体液免疫相关基因数为33、46、17、59、48、35、53、68。其中,cd4与AI408225同源和共表达。 结论 大鼠肝再生与体液免疫相关,AI408225参与MHC II-抗原肽-CD4-TCR复合物形成。     

液压转基因技术用于脂肪肝大鼠的肝脏转基因实验

目的 探讨液压转基因技术（HDT）应用于大鼠脂肪肝转基因的条件、方法。 方法 以不同速度将不同体积、浓度的绿色荧光蛋白基因质粒pEGFP-C1一次性注射到脂肪肝大鼠尾静脉,于注射后不同时间取大鼠（各4只）各肝叶制备冷冻切片,在波长488nm的荧光显微镜下观察、计数各肝叶绿色荧光蛋白阳性细胞。 结果 在pEGFP-C1浓度为33mg/L、注射速度为2ml/s、注射液体积为大鼠体重的8.5%条件下,注射质粒后6h,各肝叶绿色荧光蛋白阳性细胞比例最高,其中,蒂状叶的绿色荧光蛋白阳性细胞约占18%,左叶约占14%、中叶约占12.5%、右叶约占10%,尾状叶约占8%。转基因后24h绿色荧光蛋白的表达量逐渐减少,至72h时各肝叶均难以检出绿色荧光蛋白阳性细胞。 结论 大鼠尾静脉液压转基因技术可用于脂肪肝大鼠的肝脏转基因研究,转基因的适宜条件为：质粒溶液浓度33mg/L,注射量占大鼠体重的8.5%,注射速度为2ml/s,观察转基因效果的适宜时间是转基因后6～24h。     

MiR-429生物学功能的研究进展

微小RNA(miRNA)是一类长度在22个核苷酸左右的内源性非编码单链RNA.这类RNA在细胞中发挥着重要的生物学功能,其中miR-429经大量研究证实,可以通过对不同靶基因的表达进行调控从而发挥抑制肿瘤发生和进展的重要作用,同时也能够在细胞分化和神经性疾病中发挥作用.我们对miR-429及其下游靶基因在细胞增殖、凋亡...     

microRNA与肝癌

肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,其发病率和病死率极高。microRNA(miRNA)是一类单链的非编码RNA,通常在转录后水平调控基因的表达。最近多项研究表明miRNA在肝癌中发挥着重要作用,已经成为肝癌诊断、治疗中的一个靶标。     

大鼠短间隔连续部分肝切除后ADAMs mRNA表达分析

目的说明ADAMs(a disintegrin and metalloproteinase)在肝再生的不同阶段表达不同.方法用RT-PCR方法和ADAMs通用引物对本实验建立的大鼠短间隔连续部分肝切除(short interval successive partial hepatectomy,SISPH)模型0、4、8、12hr,0、36、72、108、144hr及0、4、40、76、112hr肝再生过程中的mRNA进行分析.结果正常大鼠和SISPH后大鼠肝脏均存在ADAMs的表达、但表达强度不同.结论本组资料显示ADAMs可能对肝再生过程具有调控作用     

大鼠肝再生中环状RNA的表达变化及其对细胞增殖的调节作用

目的 探讨环状RNA(circRNA)在大鼠肝再生中的表达变化及其对细胞增殖的调节作用.方法 用生物高通量检测方法分析114只2/3肝切除大鼠诱导的大鼠肝再生中circRNA的表达变化,用miRanda和TargetScan网站分析大鼠肝再生的靶微小RNA(miRNA)及其mRNA,用基因本体论(GO)和IPA软件分析...     

细胞表面受体介导的信号通路相关基因对大鼠肝再生的调控作用分析

目的在基因转录水平了解12条细胞表面受体介导的信号通路相关基因对大鼠肝再生的调控作用。方法用搜集网站资料和查阅相关论文等方法获得上述基因,用大鼠基因组230 2.0芯片检测它们在大鼠再生肝中的表达情况,用比较手术和假手术中基因的表达差异性确定肝再生相关基因。结果初步证实上述基因中491个与肝再生相关,其中226个基因之间有742种直接作用关系。细胞因子和趋化因子介导的酶联受体、G蛋白耦联受体、谷氨酸;抗原受体介导的,整合素介导的,脂多糖介导的,Notch、Osmosensory、Smoothened、Toll、Wnt等12条信号通路中与肝再生相关的上调基因数和下调基因数,分别为26和23、164和54、59和51、5和1、22和14、21和10、1和1、4和11、23和11、32和17。肝再生中基因上调表达次数和下调表达次数分别为188和128、464和190、308和207、13和5、88和46、123和50、2和1、20和43、148和30、174和62。结论除Osmosensory和脂多糖介导的信号通路在肝再生中作用较小,Smoothened信号通路作用减弱外,其他9条信号通路在肝再生中作用增强。     

大鼠肝再生启动阶段肝细胞CCAAT增强子结合蛋白ζmRNA、微小RNA-136-3p和4种环状RNA的表达和作用

目的 了解大鼠肝再生启动阶段CCAAT增强子结合蛋白ζ(CEBPζ) mRNA、miR-136-3p、rno-Got1_0001、rno-Crebrf_0009、rno-Slc38a9_0001和rno-LOC 100362999_0001调节肝细胞处于G0期还是G1期的途径和方法.方法 按Higgins等方法制备大鼠2/3肝切除(PH)模型,按Smedsrod等方法分离肝细胞,用大规模定量分析技术检测大鼠肝再生中肝细胞的ceRNA表达变化,用Cytoscape 3.2软件构建竞争性内源RNA(ceRNA)的相互作用网络,用ceRNA综合分析等方法解析它们表达的相关性和作用相关性.结果 PH后0h和6h时,CEBPζ mRNA的比值为0.97±0.15和2.56±0.12,miR-136-3p为1.05±0.32和0.38±0.04,mo-Got1_0001为0.33±0.03和4.35±0.78,rno-Crebrf_0009为1.17±0.32和2.99±0.28,rno-Slc38a9_0001为0.67±0.08和2.64±0.29,mo-LOC 100362999_0001为0.25±0.02和0.92±0.22.CEBPζ抑制的G0期相关基因细胞周期蛋白依赖性激酶2相关蛋白2(CDK2AP2)为2.55±0.42和0.74±0.11,myb1膜运输蛋白的靶标(TOM1)为2.80±0.91和1.40±0.36,含缬草肽蛋白质(VCP)为2.63±0.17和1.10±0.10.CEBPζ促进的G1期相关基因cAMP响应元件结合蛋白3样4(CREB3L4)为1.13±0.63和2.00±0.81,硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)为1.03±0.07和2.50±0.19.结论 PH后0h时,CEBPζ mRNA未上调,有利于CEBPζ抑制G0期相关基因的表达和肝细胞处于G0期.相反,PH后6h时,rno-Got1_0001、rno-Crebrf_0009、rno-Slc38a9_0001、rno-LOC100362999_0001和miR-136-3p的相互作用解除了后者对CEBPζ mRNA的抑制,有利于CEBPζ的形成,有利于CEBPζ促进G1期相关基因的表达和肝细胞处于G1期.     

大鼠脂肪肝成模过程中肝组织结构变化

目的:系统了解大鼠脂肪肝成模过程中肝组织结构变化。方法:用四氯化碳皮下注射法构建大鼠脂肪肝模型,按常规方法制备肝组织石蜡切片并镜检肝组织结构。结果:建模第1周大鼠肝脏中央静脉周围细胞内出现密集小脂滴,细胞有聚集和坏死现象。从第4周开始中央静脉周围脂变细胞越来越多,细胞内脂滴越来越大,细胞亦变大,同时出现炎症细胞浸润和纤维性增生。第8周时肝窦狭窄,肝叶的大部分细胞发生脂变,大脂滴居多,脂肪性肝炎和肝纤维化加重。第10周时脂变细胞达90%以上,其所含的绝大部分脂滴为大脂滴,将细胞核挤向一边。第12周时肝小叶结构完全消失,伴有假小叶形成和肝硬化早期症状。第15周时肝脏明显皱缩且与周围组织粘连严重,假小叶内出现纤维再分隔和肝细胞再生小结节,肝硬化加剧。脂变细胞内近80%的脂滴为大脂滴。第20周时肝脏颜色暗灰,肝叶完全粘连,结节明显,假小叶内的肝细胞干酪样坏死严重。结论:用四氯化碳皮下注射法构建大鼠脂肪肝模型方便有效,肝组织结构和肝脏病理变化有规律,易于观察分析,值得推广应用。