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61.
目的 现场评价自制的恶性疟Dipstick-免疫胶体金检测试纸条和商品疟疾ICT测试卡的敏感性和特异性及稳定性。方法 以常规镜检法作为标准,用Dipstick条和ICT卡对镜检确认的疟疾和非疟发热病人血样平行检验。结果 Dipstick条恶性疟阳性的符合率为95%,特异性为100%,30%以上活性保持时间为45天左右;ICT卡的恶性疟(含混合感染)阳性符合率为100%,单纯间日疟符合率为97%,特异性为100%,不能区分混分感染,稳定性超过Dipstick条。结论 Dipstick条仍需改进完善。ICT卡敏感特异、简便快速,是替代传统镜检较好的一种方法。 相似文献
62.
日本血吸虫(中国大陆株)Sj16基因的体外扩增及克隆 总被引:2,自引:0,他引:2
为了构建日本血吸虫(中国大陆株)Sj16基因原核表达重组质粒pGEX-4T-1-Sj16。根据曼氏血吸虫Sm16基因已知序列设计合成一对引物,用PCR技术从日本血吸虫(中国大陆株)成虫cDNA库中扩增Sj16基因;将Sj16基因定向克隆入pGEX-4T-1;转化感受态BL21/DE3菌;用酶切,PCR扩增鉴定筛选得到的重组阳性克隆。结果表明,从日本血吸虫(中国大陆株)成虫cDNA库中获取Sj16基因,重组质粒中含有Sj16基因。结果提示,成功构建日本血吸虫(中国大陆株)Sj16基因原核表达重组质粒pGEX-4T-1-Sj16,为进一步研究Sj16基因功能打下基础。 相似文献
63.
目的:建立快速、早期、敏感的诊断人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染的DNA检测方法,旨在了解异基因造血干细胞移植受的HCMV的感染情况及指导临床诊治。方法:利用ELISA和巢式PCR方法对30例异基因造血干细胞移植受进行检测。结果:检测异基因造血干细胞移植受30例,PCR和ELISA方法HCMV阳性分别为20例和18例;其阳性率分别为66.7%和60%。作为阴性对照的20名正常同时进行HCMV的检测,其结果均为阴性。结论:PCR具有早期、快速、简便的优点,适用于临床对HCMV的早期快速诊断和作为指导临床用药及愈后判断的主要手段。 相似文献
64.
本文设计并化学合成一条含有恶性疟原虫裂殖子表面抗原(MSA1、MSA2)、环子孢子蛋白(CSP)、环状体感染红细胞表面抗原(RESA)等不同生活史期的4种抗原,共6个表位的复合基因(PfCMR)。该基因含2个粘性未端,共分8个片段,采用“缺口填补法”接成双链DNA,再与噬菌体M13mp18分别经BamHI、EcoRI双酶切后回收、纯化、重组,并转化EcoliJm109,经PCR和酶切鉴定,DNA序列分析测定,证实阳性克隆子M13mp18-A4与预设计基因顺序完全一致。 相似文献
65.
目的制备抗恶性疟原虫单克隆抗体,为疟疾诊断及疟疾疫苗等方面的研究提供良好的材料。方法以恶性疟原虫复合重组融合蛋白为免疫原,经细胞融合及ELISA方法筛选获得阳性杂交瘤细胞。对其中3株2H12、3D5、4E5进行了染色体核型分析,对其分泌的单克隆抗体作SDS-PAGE、Westernblot及Dot-ELISA鉴定,并初步观察了3株单抗对恶性疟原虫(海南分离株)的体外抑制作用。结果两次细胞融合共获得8株阳性克隆,其中3株即2H12、3D5、4E5的OD值超过阳性对照,传至20代以上经ELISA检测仍呈强阳性反应,将其腹腔接种给BALB/c小鼠获得血性腹水,抗体滴度为1∶12800。Westernblot及Dot-ELISA分析显示3株单抗均与相应蛋白发生特异性反应。抑制试验结果表明:3株单抗对恶性疟原虫的体外生长和发育均有一定的抑制作用,抑制率分别为49%±3%、76%±6%、41%±2%。结论已获得稳定分泌抗恶性疟原虫复合重组抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株。 相似文献
66.
目的原核表达华支睾吸虫鳞状上皮癌相关肿瘤基因(SCCRO)全长编码区序列,获得纯化的重组蛋白,为进一步功能研究做好准备。方法用生物信息学方法从华支睾吸虫成虫全长cDNA文库中识别出与人鳞状上皮癌相关基因的同源序列及其全长编码区,将其编码区序列克隆到原核表达载体PET-30a(+),测序鉴定重组质粒,在大肠杆菌BL-21/DE3中用IPTG诱导表达,重组产物用His-镍蛋白纯化柱纯化。结果华支睾吸虫鳞状上皮癌相关基因长度为1 218bp,其全长编码序列长度为780bp,编码259个氨基酸,1-22位为分泌信号肽,在羧基端有一个高度保守的区域。该基因在大肠杆菌中得到了高效的可溶性表达,重组蛋白达总蛋白的39%,纯化后的重组蛋白纯度可达98%。结论鳞状上皮癌相关基因的PET-30a(+)原核重组质粒在大肠杆菌BL-21/DE3中可以稳定高效地表达可溶性蛋白。 相似文献
67.
恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1(MSA1)是抗疟疫苗的候选抗原之一。据已知的MSAl基因序列,自行设计合成了四对引物。应用PCR技术,分四段从恶性疟原虫FCC1/HN株基因组DNA中扩增出垒基因编码区序列。扩增产物经1.2%琼脂塘凝腔电泳鉴定.表明获得了正确的MSA1基因扩增片段。 相似文献
68.
69.
目的克隆并表达恶性疟原虫重组复合抗原,为疟疾疫苗研究奠定基础。方法将恶性疟原虫MSP1中类表皮生长因子1(EGF—1)基因与人工化学合成的抗原复合基因PfCMR串接,插入高效非融合型蛋白表达载体PBV220,转化大肠杆菌DH5a.转化菌经42℃热诱导表达,表达产物用Westernblot和Dot—ELISA分析。结果构建成功重组质粒PBV220/PfCMR—EGF─1,经热诱导后表达出合外源基因产物的非融合蛋白质,分子量为16.5kDa,表达产物与恶性疟原虫抗原免疫鼠血清产生特异免疫反应。工程菌连续传代,未见重组质粒丢失,表达效率无明显改变。结论用表达载体pBV220表达出的恶性疟原虫重组复合抗原具有一定的免疫活性。该重组质粒可在宿主菌DH5a内长期稳定存在。 相似文献
70.
目的利用生物信息学方法分析日本血吸虫SjWD101的结构和功能特征,并利用基因工程技术进行克隆和表达,获得相应的重组蛋白。方法从日本血吸虫GenBank数据库中筛选WD家族蛋白中全长基因,用相关软件进行生物信息学预测。通过RT-PCR扩增出全长编码区序列,克隆到表达载体pET-28a(+)中,在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导表达,表达产物用镍离子金属螯合剂亲和层析柱纯化并经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白印迹(Western blotting)鉴定。结果SjWD101是一个全长1085bp的基因,编码区为66~950,编码294个氨基酸,软件分析表明其理论分子量和等电点分别是31819.7Da和6.44.亚细胞定位分析表明该蛋白是胞浆蛋白,理化性质较稳定。二级结构以反向平行的β折叠为主。含有6个WD40结构域,属于WD蛋白家族中的一员,具有GTP结合蛋白的结构特征。经PCR、双酶切和测序证实pET-28a(+)-SjWD101构建成功。SDS-PAGE和Western blotting证实重组菌成功表达出融合蛋白,经His亲和层析柱获得了纯化的重组蛋白,Western blotting证实WD101重组蛋白能被感染日本血吸虫的兔血清识别。结论日本血吸虫WD101经生物信息学预测为WD家族蛋白,可能在血吸虫信号转导通路方面有其一定作用,本研究获得了纯化的重组蛋白,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。 相似文献