丙型肝炎病毒基因变异与免疫

有关丙型肝炎病毒(HCV)持续性感染和发生免疫逃逸的机制至今尚不清楚,但病毒基因组的高度变异性可能是重要原因。本文就HCV基因变异、基因型、准种特性及变异与宿主免疫之间的关系作一综述。     

120例神经官能症的活血化瘀治疗及甲皱微循环变化(摘要)

本文观察了120例神经官能症的中、西医症侯和甲皱微循环,并与100例正常人作甲皱微循环的对照比较,讨论了神经官能症的病因,分析了活血化瘀治则和疗效。经实验结果发现:神经官能症的甲皱微循环异常率为6.3%,其毛细血管袢数目,长度、管径的三个指标较正常值低,而以管袢少、短、细、扭曲为特征,同时血流缓慢者为多见,与正常人甲皱微循环(异常率<30%)比较有显著性差异(cP<0.017)。同时还发现有62%的舌苔与25%的脉象,皆具有瘀血的特征。     

用直接法原位聚合酶链反应检测肝组织中HCV RNA

用直接法原位聚合酶链反应检测肝组织中ＨＣＶＲＮＡ杨志国许家璋徐俊杰乐美兆苏长青一、材料与方法１材料：取血清ＨＣＶＲＮＡ及／或抗ＨＣＶＩｇＧ阳性的丙型肝炎肝脏活检标本，经１０％福马林固定，石蜡包埋。２试剂：ＨＣＶＲＮＡ引物选自５′端非编码区，限定...     

LFn-PSCA融合蛋白的表达和生物活性研究

目的 研究大肠杆菌中表达的炭疽毒素致死因子氨基端与前列腺干细胞抗原（PSCA）融合蛋白的生物活性.方法 分别扩增炭疽毒素致死因子LF（lethal factor）N端254个氨基酸（LFn）的基因片段和PSCA氨基酸29～100的基因片段,将两片段先后克隆进分泌型载体pAS22中,构建成表达质粒pAS-LFn-PSCA,在大肠杆菌中表达,并对融合蛋白进行纯化和活性检测.结果 实现了融合蛋白LFn-PSCA的分泌型表达.纯化后纯度可达90%以上.体外试验显示LFn-PSCA对小鼠巨噬细胞无毒性,并保留了LFn与保护性抗原结合的活性.结论 在大肠杆菌中实现了LFn-PSCA的分泌型表达,为继续进行以炭疽毒素为载体增强机体免疫应答的研究打下基础.     

杀菌蛋白DNA改组的初步研究

目的：运用DNA家族改组方法提高杀菌蛋白（BPI23）的杀菌活性。方法：首先将人、猴、兔BPI23基因的PCR产物等量混合，用DNAase I消化，回收50bp左右的片段，再经无引物和有引物2步PCR反应获得与原基因大小相同的改组分子，将其与载体连接获得改组文库。应用Flp-In^TM定点整合表达系统，将BPI23改组文库插入CHO细胞基因组中1个单拷贝位点，分别检测各个细胞克隆的杀菌活性，从中筛选高活性的BPI23改组分子。结果：经过2轮改组和筛选，共获得4个活性高于人BPI23约4倍的克隆，它们与人BPI23基因有7－13个氨基酸的变化。结论：探索了CHO系统中进行DNA改组和筛选的方法与技术路线，成功进行了杀菌蛋白的改组，并为其它分子的改组提供了借鉴。     

中国南京庚型肝炎病毒部分基因的克隆及cDNA序列分析

采用反转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）从南京地区某输血后丙型肝炎患者血清中克隆出庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）非结构区部分基因。序列分析结果表明：该序列与国外发表的庚型肝炎病毒ＨＧＵ４４４０２，ＨＧＵ４５９６６，ＨＧＵ３６３８０（ＧＢＶＣ）对应位置核苷酸序列同源性分别为８９０９％，９２１２％，８７２７％，与已报道的ＨＧＶ河北株序列同源性为９３９４％。对４０份输血后丙型肝炎血清和３０份非甲非乙非丙非丁非戊型肝炎血清进行了检测，ＨＧＶＲＮＡ阳性率分别为１０００％和６６７％。     

组织型纤溶酶原激活物基因的DNA改组

目的：探索利用DNA改组（DNAshuffling)技术，获得更高活性tPA的可能性。方法：以人，恒河猴及大白鼠tPAcDNA为一组基因，进行tPA的DNA改组（DNAfamily shuffling)。以改组后构建的tPA多样性文库转染CHO细胞并进行克隆和筛选。结果：得到了两株有意义的克隆；t9和t17，其中t9克隆表达的tPA活性略高于人tPA，初步的比活性测定结果表明，活性约提高4倍。t17克隆表达的tPA虽然有88个氨基酸的缺失，但仍表现出与人tPA相同的活性，两株克隆经测序证明，为改组后的基因，其序列以人和恒河猴的tPAcDNA序列为主，少数序列来源于大白鼠tPAcDNA。结论：这一探索性结果将为后续几轮的tPADNA改组探明道路，为最终从改组后tPA多样性基因库中筛选到比较理想的重组体打下基础。     

鹿茸多肽-胶原蛋白/壳聚糖复合材料对家兔下颌骨缺损愈合的促进作用及其机制

目的：制备鹿茸多肽-胶原蛋白/壳聚糖复合材料,探讨其对家兔下颌骨缺损愈合的促进作用及其可能机制。方法：将胶原溶液和壳聚糖溶液充分混匀,采用戊二醛交联法制备复合材料,扫描电子显微镜（SEM）下观察复合材料的微观结构。选择36只家兔建立兔下颌骨单侧缺损模型,分为实验组和对照组,每组又设4、8和12周亚组,每亚组各6只家兔。实验组家兔植入鹿茸多肽-胶原蛋白/壳聚糖复合材料,对照组家兔不植入任何材料。分别于术后4、8和12周采用CT观察家兔造模部位的组织学及周围神经重建情况,免疫组织化学法检测家兔骨组织中血管内皮生长因子（VEGF）表达量,SEM下观察骨缺损处的超微结构。结果：复合材料呈现规则的层状皱褶结构,支架内部孔径变大且以片状结构为主,是生物材料理想的结构。术后4周,实验组家兔有新骨生成,新生骨样组织致密材料大部分降解,VEGF呈高表达;术后8周,实验组家兔中的骨缺损部位骨小梁明显增多,VEGF表达呈下降趋势;术后12周,实验组家兔新骨形成且密度基本与正常组织一致,VEGF表达恢复正常。术后各时间点实验组家兔骨缺损愈合程度和成骨速度明显优于对照组。结论：鹿茸多肽-胶原蛋白/壳聚糖复合材料对家兔下颌骨缺损愈合具有明显的促进作用,其机制可能与促进VEGF表达有关。     

HIV感染者急性期血浆CCL2水平与病毒载量关系分析

目的探究HIV感染者急性期血浆CCL2水平与病毒载量相关性以及动态变化关系。方法选取中国医科大学附属第一医院红丝带门诊HIV感染者54例,对样本的CCL2水平、病毒载量进行分析。结果急性期CCL2表达水平与病毒载量呈正相关(r=0.2920,P=0.0464);急性期CCL2水平与病毒载量存在一致的动态变化关系,在ART中断后,CCL2表达水平随着病毒载量增高而增高。急性期CCL2水平与HIV感染1年时间点的病毒载呈正相关,ROC曲线分析显示急性期血浆CCL2水平对HIV感染1年后病毒载量高低分组(高组≥4.5 Lg copies/mL,低组≤3.5 Lg copies/mL)的预测价值为80.30%(AUC=0.8030,P=0.0444),Kaplan-Meier生存分析显示急性期CCL2 high组(≥12.30pg/mL)的HIV感染者,其发生高水平病毒载量(≥4.5 Lg copies/mL)结局事件所需时间更短(P=0.0339)。结论HIV感染者急性期血浆CCL2水平与病毒载量水平呈正相关,急性期血浆CCL2高表达预示HIV感染者体内更快的疾病进展。CCL2有希望作为一个阻断靶点,限制HIV的侵袭能力。