人脐血基质细胞深低温保存的实验研究

目的　探讨一种简便可行的人脐血基质细胞冻存方法。方法　采用 5 %二甲基亚砜 (DMSO) ,3%羟乙基淀粉 (HES)和 4 %人血白蛋白 (HAS)作冷冻保护剂 - 80℃冻存人脐血基质细胞 ,观察不同时相点的基质细胞活性、细胞计数 ,回收率 ,基质细胞集落形成单位 (CFU F)及其支持集落生长的作用 (CFU S ,CFU GM ,CFU E)。结果　保存 6个月后人脐血基质细胞的细胞活性仍保持在 (90 .6± 2 .8) % ,CFU F产率也达到 (83.6± 1 .8) % ,其支持集落生长的作用与保存前无统计学差异。结论　本方法是一种简便易行的人脐血基质细胞保存法     

外周血造血干细胞移植治疗儿童血液肿瘤的初期疗效观察

目的　观察外周血造血干细胞移植 (PBSCT)治疗儿童血液肿瘤的初期疗效。方法　 2 0 0 1年 5月至 2 0 0 2年 3月 ,以PB SCT治疗儿童血液肿瘤患者共 10例 ,其中 :ALL 5例 ;ANLL 1例 ;NHL3例 ;HD1例。除 1例同基因移植患儿采用G CSF(10 μg/kg ,1/d ,皮下注射 ,共 4d后开始采集 )对正常供体进行动员外 ,其他患儿均为自体外周血干细胞移植 ,动员方案为 :MOEP +G CSF。经 2～ 3次采集 ,获得MNC中位数为 5 4× 10 8/kg ,CD3 4+ 细胞为 6 1× 10 6/kg ,CFU M为 3 3× 10 5/kg。预处理方案 :Cy/TBI(8例 )或CEAC(2例 )。结果　所有患者移植后均重建造血。WBC >1 0× 10 9/L、中性粒细胞 >0 5× 10 9/L、PLT >2 0× 10 9/L ,分别为 (10± 3 )d、(11± 3 )d、(14± 5 )d。 1例患儿于移植后 3个月随访行常规化疗 ,因骨髓重度抑制继发感染死亡 ,1例患儿于移植后 4个月病情复发死亡。其余患者均无病存活 2～ 9个月 ,疗效仍在近一步随访中。结论　初期疗效显示 ,PBSCT是儿童血液肿瘤安全有效的治疗方法     

抗CXCR4单克隆抗体对与正常骨髓基质细胞共培养的HL-60细胞Bcl-2、PCNA、Fas蛋白表达的影响

目的　目前研究发现 ,骨髓基质细胞分泌的基质衍生因子 1(stromalcellderivedfactor 1,SDF 1)及其受体CXCR4可能参与髓内残留病变的形成。因此 ,本研究着重探讨了阻抑SDF 1活性对与正常骨髓基质细胞共培养的HL 60细胞增殖、生存的影响。方法　培养并共培养HL 60细胞。实验分为两组 ,实验组采用抗CXCR4单克隆抗体 12G5( 2 0ug/ml)阻断SDF 1生物作用 ,孵育 2 4小时后采用免疫组化染色检测HL 60细胞Bcl 2、PCNA、Fas蛋白表达。 结果　免疫组化染色显示 ,实验组中Bcl 2、PCNA及Fas阳性率分别为 ( 15 .7± 4.9) %、( 4 2 .1± 3 .9) %及 ( 3 9.7± 7 5 ) % ,而对照组分别为 ( 3 1.6± 5 .2 ) %、( 67.4± 8.5 ) %和 ( 2 4.1± 6.7) % ,t检验显示 12G5下调HL 60细胞Bcl 2及PCNA蛋白表达 ,上调Fas蛋白表达。结论　 12G5可在一定程度抑制HL 60细胞增殖 ,促进凋亡 ,影响其生存。     

VCAM-1修饰人脐血基质细胞扩增移植重建造血微环境功能的研究

本课题利用人脐带血丰富的细胞资源从一全新的角度探讨重建造血微环境功能的措施和机理 ,为造血损伤的救治寻求更有效的辅助治疗途径。实验采用吸附单克隆抗体 磁珠分离系统 (ＭＡＣＳ)分离人脐血ＣＤ34+ 细胞行基质细胞体外液体培养扩增 ,构建ＶＣＡＭ 1ｃＤＮＡ重组逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮ并成功转染扩增后的脐血基质细胞 ,在检测转染后ＶＡＣＭ 1基因表达水平达到要求后移植 1× 10 7个给我们事先建立的放、化疗诱导的骨髓造血微环境损伤的动物模型 (ＢＡＬＢ/ｃ -ｎｕ/ｎｕ裸鼠 ) ,观察其重建造血微环境促进造血功能重建的效应和机理…     

抗CXCR4单克隆抗体12G5对阿糖胞苷杀伤 HL-60细胞效应的影响

本研究通过观察抗CXCR4单克隆抗体12G5对AraC杀伤HL-60细胞效应的影响，评价其在白血病骨髓残留病变中的治疗价值。培养并共培养HL-60细胞，在共培养体系中采用12G5(10μg／ml)阻抑基质细胞SDF-1的生物作用后，通过MTT法及细胞形态学观察检测不同浓度AraC对HL-60细胞杀伤作用的变化。药物杀伤效应曲线显示，在20μg／ml Ara C组，对照组中前2天A540值明显下降，但从3—4天开始出现上升，而加12G5实验组中A540值虽然下降平缓，但持续下降，并于观察第5天后低于对照组，整个观察期中未出现反弹。在40μg／ml Ara C组，对照组A540在0—3天明显下降，从第4天开始回升，于第5—6天与实验组曲线交叉，从7—12天对照组A540值总体呈上升趋势，并明显高于实验组，而加12G5实验组曲线在整个观察期间虽然在7—9天有小幅度攀升，但总的趋势是下降。细胞形态学观察显示，在两个浓度组，对照组HL-60细胞数量最初明显减少，随着培养时间延长，细胞数量逐渐增多，实验组结果正相反。结论：12G5减弱Ara C对HL-60细胞的早期杀伤作用，但12G5增强Ara C总体杀伤作用，同时，延缓HL-60细胞对Ara C的耐药性，因此12G5有助于白血病骨髓残留病变的治疗.     

急性髓系白血病双乳髓外复发一例

患，女，14岁。因低热、问断鼻衄1周于2003年12月15日第1次入院。患有慢性扁桃体炎病史5年，查体：体温37．8℃，轻度贫血貌，皮肤可见少量散在瘀点、瘀斑，右颌下、右颈部各可触及1枚直径约0．5cm的淋巴结，质中，无触痛。双侧鼻腔无出血，双侧下磨牙齿龈肿胀，未见出血、     

钠氢交换蛋白-1特异性抑制剂二甲基氨氯吡咪对HL-60/ADM细胞pHi变化及细胞增殖、凋亡的影响

为了探讨钠氢交换蛋白-1（NHE-1）抑制剂二甲基氨氯吡咪（DMA）对HL-60/ADM细胞pHi变化及细胞增殖、凋亡的影响,以敏感HL-60细胞为对照,用不同浓度的DMA干预后,荧光指示剂（BCECF/AM）检测法检测细胞内pHi,微量噻唑蓝法（MTT）检测细胞生长的抑制率,流式细胞术检测细胞周期变化,TUNEL法检测原位细胞凋亡,对比HL-60/ADM细胞与HL-60细胞之间的差异.结果显示：HL-60/ADM细胞内pHi较HL-60细胞显著升高;DMA作用下,HL-60/ADM细胞的pHi降低幅度、生长抑制率、细胞凋亡率均显著高于HL-60细胞;当DMA浓度100-150 μmol/L时,HL-60/ADM细胞的G0/G1期细胞比率增加幅度、S期及G2/M期细胞比率降低幅度均高于HL-60细胞.结论：NHE-1特异性抑制剂DMA引起HL-60/ADM的pHi降低,可抑制细胞生长并诱导细胞凋亡;且DMA对HL-60/ADM细胞的生长抑制作用显著高于HL-60细胞.     

自体纯化CD34~+细胞移植治疗难治性Crohn病伴坏疽性脓皮病1例并文献复习

目的 探讨自体纯化CD34+细胞移植治疗难治性Crohn病的可行性及疗效.方法 报道自体纯化CD34+细胞移植治疗难治性Crohn病伴坏疽性脓皮病,结合相关文献讨论分析.结果 通过自体纯化CD34+细胞移植治疗难治性Crohn病伴坏疽性脓皮病,移植后患者大便恢复正常,未再出现便血,左侧腹股沟窦道较前缩小,脓液明显减少,患者正在进一步恢复中.结论 自体纯化CD34+细胞移植是一种治疗Crohn病的可行、有效的方法,适用于其他治疗无效或不能耐受的难治性Crohn病患者.     

无血缘关系供者异基因外周血干细胞移植治疗急、慢性白血病49例

目的 观察无血缘关系供者外周血干细胞移植治疗急、慢性白血病的疗效.方法 自2005年1月至2009年10月本科行无血缘关系供者造血干细胞移植治疗急、慢性白血病患者49例,供、受者之间人类白细胞抗原(HLA)配型全相合43例,HLA 1个位点不合6例(其中,A位点不合2例,B位点不合1例,CW位点不合2例,DQ位点不合1例).预处理方案环磷酰胺(CY)+全身放疗(TBI)方案28例、BU/CY方案21例.采用环孢菌素A(CSA)+骁悉+甲氨喋呤(MTX)+抗胸腺细胞球蛋白(ATG)预防性控制移植物抗宿主病.结果 移植后10～23 d(中位时间14.8 d)中性粒细胞大于0.5×109/L;移植后13～27 d(中位时间18.6 d),血小板大于20×109/L.14例(HLA 1个位点不合者2例)发生Ⅱ度急性移植物抗宿主病(aGVHD),予甲强龙治疗后控制,28例发生慢性移植物抗宿主病(cGVHD),局限型14例,广泛型14例;无1例发生肝静脉闭塞病(VOD)及巨细胞病毒感染;移植相关毒副作用方面CY+TBI方案与BU/CY方案差异无统计学意义;随访5～63个月,41例患者无病生存,8例死于本病复发和移植并发症;21例慢性粒细胞白血病bcr/abl融合基因检测转阴.结论 无血缘关系供者外周血干细胞移植是一种有效的血液肿瘤治疗方法.