SDF-1-pIRES2-EGFP真核表达载体的构建

目的 从ATCC提供的、携带有基质细胞衍生因子-1(stromal cell derived factor-1,SDF-1)cDNA的质粒pCMV-SPORT6中获取SDF-1的cDNA全长,并构建SDF-1-pIRES2-EGFP真核表达载体.方法 采用双酶切、回收SDF-1cDNA片段,克隆至pIRES2-EGFP真核表达载体,得到SDF-1-pIRES2-EGFP真核表达载体.结果 酶切及测序结果表明SDF-1-pIRES2-EGFP真核表达载体构建成功.结论 获得SDF-1基因,构建SDF-1-pIRES2-EGFP真核表达载体,为探索SDF-1修饰人骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs) 促进人CD34 细胞归巢及增殖方面的作用奠定基础.     

胰、肾联合移植后并发纯红细胞再生障碍性贫血一例

我院于 1998年 12月成功地为 1例胰岛素依赖型糖尿病合并尿毒症患者施行了胰、肾联合移植术 ,但患者术后发生纯红细胞再生障碍性贫血 (ＰＲＣＡ) ,后治愈。现将病例报告如下。一、临床资料患者为女性 ,49岁。因口渴、多饮18年 ,恶心、乏力 2年 ,腹膜透析 1年余 ,于 1998年 11月 10日入我院。查尿糖 ,尿蛋白 ;血糖 12 .9ｍｍｏｌ/Ｌ ,血红蛋白 (Ｈｂ) 5 4ｇ/Ｌ ,血尿素氮 (ＢＵＮ ) 33.6 7ｍｍｏｌ/Ｌ ,血肌酐 (Ｃｒ)949.3μｍｏｌ/Ｌ ,诊断为胰岛素依赖型糖尿病、糖尿病性肾病、尿毒症。于 1998年 12月 15日在持续硬膜外麻醉 …     

自体外周血造血干细胞移植治疗恶性淋巴瘤

目的 :报告 7例恶性淋巴瘤在自体外周血造血干细胞移植 (APBSCT)支持下接受超大剂量放、化疗的治疗经验 ,评价所用外周血造血干细胞 (PBSC)动员方案的动员效果 ,预处理方案的疗效和耐受性 ,以及移植后造血重建情况。方法 :7例淋巴瘤患者中 ,1例霍奇金病 ,6例非霍奇金淋巴瘤。动员方案为MOEP/CMOP化疗联合rhG -CSF ,预处理采用经典的超大剂量环磷酰胺 (CTX)化疗联合全身放疗 (TBI)。结果 :APBSCT动员后获得到单个核细胞 4.2 (2 .7～ 6 .1)× 10 8/kg,回输单个核细胞 3.7(2 .5～ 5 .3)× 10 8/kg ,中性粒细胞计数恢复到 >0 .5× 10 9/L的时间和血小板 >5 0× 10 9/L的时间分别平均为第 11.6天和第 14.6天。毒副作用主要为消化道反应。结论 :APBSCT治疗恶性淋巴瘤效果肯定 ,采用MOEP/CMOP联合rhG -CSF动员以及经典CTX加TBI方案预处理 ,安全可靠 ,治疗效果良好。     

自体外周血造血干细胞移植术后并发毛细胆管炎性病毒性肝炎1例

近期 ,我科 1例非霍奇金淋巴瘤患者行自体外周血造血干细胞移植术后并发毛细胆管性病毒性肝炎。国内鲜见报道此种病例。现将其报告如下。患者 ,女 ,年龄 48岁。因“确诊非霍奇金淋巴瘤 5个月 ,拟行自体外周血造血干细胞移植”于2 0 0 1年 5月 2 1日再次入院。患者于 2 0 0 0年 7月无明显诱因发现左侧腹股沟有一蚕豆大小肿块 ,无压痛、红肿 ,与皮肤无粘连 ,未予重视。之后包块逐渐长大。至 2 0 0 1年 1月 ,患者又出现潮热、盗汗、纳差 ,头昏、乏力、活动后心悸 ,并伴有咳嗽、咯痰 ,抗感染治疗后 ,上述症状无缓解。 2月 2 1日在我院行腹股沟淋…     

VCAM-1和EGFP双基因共表达重组腺病毒的构建

目的 构建VCAM-1和EGFP双基因共表达重组腺病毒载体.方法 采用DNA重组技术,将目的 基因VCAM-1克隆至含有报告基因EGFP的穿梭质粒;在BJ5183细胞中与pAdeasy-l质粒进行同源重组,产生重组腺病毒载体.结果 (1)VCAM-1基因与pAdTrack-CMV载体成功连接,经NotⅠ/XhoⅠ双酶切后电泳可见2个大小约为9kb和2kb左右条带,经PCR法扩增后电泳可见一个600bp左右条带,证明pAdTrack-CMV-VCAM-1重组质粒构建成功;(2)pAdTrack-CMV-VCAM-1质粒与pAdeasy-l质粒同源重组后,产物经PacⅠ酶切后电泳可观察到2个大小约为31kb和4kb左右条带,与预期结果相符.结论 Ad-VCAM-1-EGFP重组腺病毒载体构建成功.     

环孢菌素A联合长春新碱治疗难治性ITP的临床观察

我院自 1996年 8月～ 2 0 0 0年 3月采用环孢菌素Ａ联合长春新碱治疗难治性血小板减少性紫癜 (ＲＩＴＰ) 2 6例 ,取得较好疗效 ,现报道如下。1　资料与方法1 1　病例选择　 2 6例ＲＩＴＰ住院病人 ,均符合国内诊断标准[1] ,其中男 8例 ,女 18例 ,年龄 16～ 5 3岁 (平均 30 5岁 ) ,病程5～ 2 3月 (平均 11 6月 ) ;治疗前血小板计数 (5～ 32 )× 10 9/Ｌ(平均 15 5× 10 9/Ｌ) ;每例病人既往均接受过正规激素治疗 ,其中 4例使用过环磷酰胺 ,2例使用过硫唑嘌呤 ;2例行脾切除治疗后病情反复。 2 6例患者均有不同程度的皮肤瘀点、瘀斑 ;鼻及牙…     

外周血干细胞移植治疗恶性血液病及实体瘤的临床观察

目的　观察外周血干细胞移植 (PBSCT)治疗恶性血液病及实体瘤的初期疗效。方法　自 2 0 0 1年 3月至 2 0 0 2年 3月 ,用PBSCT治疗恶性血液病及实体瘤患者共 2 1例 (含儿童患者 10例 ) ,其中 :急性淋巴细胞白血病 (ALL) 8例 ;急性非淋巴细胞白血病 (ANLL) 1例 ;非霍奇金淋巴病 (NHL) 8例 ;霍奇金淋巴瘤 (HD) 2例 ;多发性骨髓瘤 (MM ) 1例 ;小细胞肿癌 (SCLC) 1例。除 1例异基因和 1例同基因移植患者采用G CSF对供者进行动员外 ,其他病例均为自体外周血干细胞移植 ,动员方案为化疗 +G CSF。经 2～ 4次采集 ,获得MNC中位数为 5 2× 10 8 kg ,CD3 4+ 细胞为 6 4× 10 6 kg ,CFU GM为 3 6× 10 5 kg。预处理方案 :17例患者采用Cy TBI,4例患者采用高剂量化疗方案。结果　所有患者移植后均重建造血。外周血WBC于移植后 4 4± 2 5d降至 0。PLT于 7 6±2 2d降至 10× 10 9 L以下。WBC >1 0× 10 9 L、中性粒细胞 >0 5× 10 9 L、PLT >2 0× 10 9 L ,分别为 10± 3d、11± 3d、15± 7d。 5例患者于移植后 1～ 6个月死于感染或病情复发 ,其余患者均无病存活 2～ 11个月 ,疗效仍在近一步随访中。结论　PBSCT对儿童及成人恶性血液病、实体肿瘤都是一种安全有效的治疗方法。     

5．0 Gy放射损伤对小鼠早期骨髓造血基质细胞周期及其DNA含量的影响

取５．０Ｇｙγ射线照射后３ｄ和７ｄ的小鼠骨髓体外液体培养１４ｄ和２１ｄ，显示骨髓基质细胞仍能贴壁生长，但骨髓基质细胞集落（ＣＦＵ－Ｆ）数量显著低于正常，照后７ｄ的ＣＦＵ－Ｆ数量虽比照后３ｄ的ＣＦＵ－Ｆ数量有所增加，但恢复缓慢；延长培养时间，显示照射鼠的骨髓基质细胞增殖受抑。流式细胞仪检测结果表明Ｇ２＋Ｍ期细胞和ＤＮＡ含量显著低于正常对照组；随着照后时间的延长，Ｓ、Ｇ２＋Ｍ期含量有所恢复，但仍显著低于正常对照组。说明骨髓造血基质细胞具有较高的辐射敏感性且对辐射损伤持续较久。     

人脐带血基质细胞体外扩增体系建立的临床前研究

人脐血中存在基质细胞 ,但由于其数量少 ,扩增能力弱而限制了在临床上的使用。本课题通过研究不同细胞因子 :成纤维细胞生长因子 (ＢＦＧＦ)、干细胞生长因子 (ＳＣＦ)、白细胞介素 3(ＩＬ 3)、肿瘤坏死因子 (ＴＮＦ)及其组合对人脐血基质细胞集落形成作用的比较 ,筛选出能高效稳定扩增人脐血基质细胞的体外培养体系并观察扩增后基质细胞的生物学性状。实验结果表明 :(1)ＢＦＧＦ、ＩＬ 3+ＢＦＧＦ、ＳＣＦ +ＢＦＧＦ、ＩＬ 3+ＳＣＦ +ＢＦＧＦ对脐带血基质细胞的增殖具有明显的促进作用。ＣＦＵ Ｆ计数与对照组、ＳＣＦ、ＩＬ 3、ＩＬ 3+Ｓ…