荧光原位杂交技术在判断异基因造血干细胞移植预后中的应用

目的研究荧光原位杂交(FISH)技术在判断异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)预后中的意义。方法收集异基因外周血干细胞移植、骨髓移植、脐血移植及多种干细胞联合移植标本63例,收集条件为融合基因(BCR/ABL、AML1/ETO)阳性表达,供受者性别不同或同时满足以上2项条件者,分为同性别间干细胞移植和不同性别间干细胞移植两组:同性别间干细胞移植者20例,应用相应的基因探针进行检测;不同性别间干细胞移植者应用相应的基因探针及XY染色体探针联合检测。结果 43例异性allo-HSCT的受者中,25例供、受者骨髓嵌合率在99%以上;13例早期嵌合率偏低(82%~98%),在随访过程中逐渐上升至99%以上,微量残留病灶(MRD)阴性,移植后原病均未复发;3例嵌合率由99%~100%逐渐下降,MRD比例上升,出现血液学复发。20例供、受者性别相同的allo-HSCT受者中,15例移植后未检测到原来的异常基因;2例检测到微量残留病灶,经免疫抑制剂减量、供者淋巴细胞输注等治疗后降为1%,目前仍在完全缓解中;3例在移植后1~4个月时出现原来的基因异常,复查骨髓为原病复发。结论 FISH技术简便、快速、准确性高、特异性强,对异基因干细胞移植预后判断具有重要意义。     

伊曲康唑治疗造血干细胞移植患者真菌感染的临床观察

目的观察造血干细胞移植(HSCT)患者出现真菌感染的临床特点,并探讨伊曲康唑抗真菌感染的疗效。方法对该院2008年1月至2010年10月334例接受HSCT术治疗的病例真菌感染的临床治疗情况进行回顾性分析。90例HSCT患者术后被诊断为真菌感染,全部病例均予静脉注射伊曲康唑治疗,125~250毫克/次,第1、2天给予2次/天,第3天后给予1次/天,病情稳定后改为伊曲康唑口服液治疗。结果 HSCT患者术后真菌感染的发生率为27%,接受伊曲康唑治疗的患者有效率75.6%。确诊患者中10例(76.9%)有效,临床诊断病例58例(75.3%)有效。结论 HSCT患者术后真菌感染发病率高;伊曲康唑疗效明确,可用于HSCT患者术后患者抗真菌感染的治疗。     

联合骨髓涂片和骨髓活检诊断非霍奇金淋巴瘤骨髓侵犯

目的探讨骨髓涂片和骨髓活检在非霍奇金淋巴瘤(NHL)骨髓浸润诊断中的价值。方法 NHL患者同时做骨髓涂片和骨髓活检。骨髓涂片经瑞氏染色,分类计数肿瘤细胞;骨髓切片采用塑料包埋法,制作组织切片,常规HGF染色。结果 62例NHL患者经骨髓涂片和骨髓活检联合检测,确诊为NHL细胞骨髓侵犯,其中49例(79.0%)骨髓涂片检出NHL细胞,59例(95.2%)骨髓活检检出肿瘤细胞浸润灶,骨髓活检阳性率略高于骨髓涂片,但差异无统计学意义(P>0.05)。NHL细胞形态分为4种类型:小细胞成熟型、大细胞幼稚型、大细胞原始型和组织细胞型。13例骨髓涂片检查阴性而骨髓活检阳性的病例中,10例是小细胞成熟型(76.9%);9例为骨髓淋巴瘤细胞轻度侵犯(69.2%),3例为重度侵犯合并骨髓纤维化(23.1%)。结论骨髓涂片和骨髓活检都是诊断NHL骨髓侵犯的重要手段,两者各有优势,联合应用可以提高诊断阳性率。骨髓活检在淋巴瘤细胞轻度骨髓侵犯或合并骨髓纤维化,以及浸润瘤细胞为小细胞成熟型时,更能准确地提供诊断依据。     

以自体造血干细胞移植为中心的序贯疗法在恶性淋巴瘤治疗中的应用

目的观察以自体外周血干细胞移植(APBSCT)为中心的序贯疗法治疗淋巴瘤的临床疗效。方法自2001年3月~2008年12月对121名淋巴瘤患者施行以APBSCT为中心的序贯疗法(移植前大剂量化疗-APBSCT-生物治疗-移植后巩固化疗),其中,非何杰金淋巴瘤(NHL)患者95名,何杰金淋巴瘤(HD)患者26名,观察临床疗效和并发症。结果 121名患者移植后造血功能均快速重建:非何杰金淋巴瘤首次缓解(NHL-CR1)57例(无病存活42例,带病存活6例,死亡9例);非何杰金淋巴瘤再次缓解(NHL-CR2)28例(无病存活18例,带病存活4例,死亡6例);非何杰金淋巴瘤未缓解(NHL-NR)10例(无病存活2例,带病存活3例,死亡5例);何杰金淋巴瘤首次缓解(HD-CR1)8例,其中无病存活8例;何杰金淋巴瘤部分缓解(HD-PR)13例(无病存活11例,带病存活2例);RE5例(无病存活3例,带病存活1例,死亡1例)。结论以APBSCT为中心的序贯疗法是治疗血液肿瘤安全有效的方法。     

CM-DiI示踪人脐血源基质细胞体内迁移定位的研究

目的:课题组前期实验发现人脐血源基质细胞(hUCBDSC)体外具有促进造血细胞集落扩增的能力,文中拟采用CM-DiI荧光标记技术,观察hUCBDSC移植后的归巢、定位和增殖情况. 方法:传代培养hUCBDSC,CM-DiI荧光染料预染后经尾静脉输入BALB/c-nu/nu裸鼠体内,分别于移植后1、7、14、21 d取裸鼠骨髓、脾脏、肝脏、肺脏组织,激光共聚焦显微镜观察CM-DiI标记hUCBDSC体内分布情况. 结果:传代培养hUCBDSC呈成纤维样,CM-DiI染色后胞膜呈红色.经尾静脉移植至裸鼠体内,移植后1 d,hUCBDSC广泛分布在骨髓、脾脏、肝脏、肺脏等组织中,移植7 d以后,hUCBDSC主要分布在骨髓,在骨髓中增殖、分化;脾脏、肝脏、肺脏等组织中的hUCBDSC明显减少. 结论:人脐血源基质细胞经尾静脉输注可"归巢"至骨髓,并在骨髓中增殖、分化,重建受损造血微环境.     

急性髓细胞白血病患者DC-CIK治疗后T细胞亚群动态变化的临床观察

目的观察急性髓细胞白血病患者经自体外周血移植联合自身白血病细胞冻融抗原负载的DC-CIK输注治疗后体内的T细胞亚群动态变化。方法选择50名初发急性髓细胞白血病患者,抽取其未缓解的骨髓制备自身白血病细胞冻融抗原,在自体外周血干细胞采集时分离部分单个核细胞培养DC-CIK,以自身白血病冻融抗原共培养激活扩增DC-CIK。患者自体外周血造血干细胞移植30～60 d输注自身白血病细胞冻融抗原负载的DC-CIK,每例每疗程回输细胞总数>7×109,同时给予IL-2(20 WU皮下注射,1次/d,连续10 d)皮下注射。动态观察患者接受DC-CIK细胞输注治疗后不同时间点体内T细胞亚群动态变化,并与既往接受自体外周血移植但未输注DC-CIK细胞治疗的52名急性髓细胞白血病患者进行比较分析。结果 50名患者DC-CIK输注后患者体内CD8+、CD16+、CD56+淋巴细胞均显著高于输注治疗前水平(P<0.01),治疗组同一随访时间段CD3+、CD4+、CD8+、CD16+、CD56+淋巴细胞均显著高于未采用DC-CIK治疗组(P<0.01)。结论对急性髓细胞白血病患者采用自体外周血移植联合自身白血病细胞冻融抗原负载的DC-CIK输注治疗,能显著提高患者肿瘤杀伤性T细胞水平,有助于清除移植后微小残留病,改善患者无病生存率(PFS)。     

自体外周血干细胞移植、生物治疗、长间歇维持化疗序贯治疗恶性血液病的临床研究

目的评价自体外周血干细胞移植治疗高龄恶性血液病的疗效。方法将60例老年患者分为移植组与非移植组,其中移植组的34例高龄恶性血液病患者首次缓解并经3~4个周期强化治疗后,行自体外周血干细胞移植,预处理方案采用MAC、M及CY TBI,造血重建后予以大剂量IL-2行生物治疗4个疗程,之后每3~4个月予以长间歇维持化疗1次,常用方案包括TA、MA、MP、CTOD等;非移植组的26例患者采用常规的化疗治疗。结果34例患者移植后均成功重建造血,无一例移植相关死亡。移植后维持化疗满2年的患者有20例,有10例复发(50%),其中6例死亡。34例患者中16例复发(47.1%),其中死亡8例。3年无病生存率为(43.0±7.1)%。26例常规化疗的患者中20例复发(76.9%),其中有12例死亡,3年无病生存率为(19.2±6.2)%。结论自体外周血干细胞移植、生物治疗、长间歇维持化疗序贯治疗高龄恶性血液病,治疗相关死亡率低,无病生存率较高,可作为改善高龄恶性血液病治疗效果的重要措施。     

急性白血病骨髓基质细胞对HL-60细胞增殖、分化的影响

目的 为探讨急性白血病骨髓基质对HL-60细胞的影响。方法 骨髓基质与白血病细胞共培养，采用MTT检测基质对白血病细胞的粘附，流式细胞仪检测粘附的HL-60细胞周期，非特异性酯酶及过氧化物酶染色观察白血病细胞分化及绘制白血病细胞生长曲线。结果 白血病骨髓基质对HL-60细胞的粘附率及粘附的白血病细胞处于G0／G1期比例均明显高于正常骨髓基质；正常骨髓基质对HL-60细胞的生长抑制作用及诱导分化作用均明显强于白血病基质。结论 急性白血病骨髓基质对HL-60细胞的增殖、分化作用均存在异常。     

自体外周血干细胞支持下CEAC方案治疗非霍杰金淋巴瘤的临床研究

目的　观察CEAC预处理方案的自体外周血干细胞移植治疗非霍杰金淋巴瘤病人的临床疗效。方法　对 1 0例中、高度恶性非霍杰金淋巴瘤病人进行自体外周血干细胞移植 (APBSCT) ,其中 5例 (5 0 % )病人为Ⅳ期 ,2例病人诊断为中线T细胞淋巴瘤 ,1 0例病人从确诊到移植的中位时间是 4 .5个月 ,以CEAC为预处理方案 :CCNU 0 .2m2 × 1d,Cy 1 .5g/m2 × 4d ,Vp 1 61 0 0mg/m2 × 4d ,Acr C 1 0 0mg/m2 1 2q× 4d。结果　预处理中 1 0例病人均出现Ⅰ～Ⅲ度的消化道反应 ,1例出现Ⅰ度心脏毒性 ,出现Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ度肝功能损害各 1例 ,1 0例病人均有Ⅲ度脱发。所有患者移植后造血功能均快速重建 :中性粒细胞计数≥ 0 .5× 1 0 9/L中位时间 1 1 .5d ,血小板计数≥ 2 0× 1 0 9/L的中位时间 1 3d。中位随访时间 1 0 .5个月 (8～ 2 3个月 ) ,8例患者无病存活 ,2例死于疾病复发。结论　CEAC预处理方案的自体外周血干细胞移植治疗非霍杰金氏淋巴瘤病人的耐受性较好 ,毒副作用较轻 ,造血重建快 ,目前短期随访治疗效果较好