腺相关病毒载体介导的人凝血因子Ⅸ基因在CD34+造血干/祖细胞中的表达

目的 研究2型重组腺相关病毒（rAAV-2）介导的人凝血因子Ⅸ（hFⅨ）基因在脐血CD34^＋细胞及其子代细胞巾的表达。方法 采用rAAV-2／hFⅨ转导经预刺激的人脐血CD34^＋细胞，分别向粒单系、巨核系和红系分化培养21d，从转录水平、蛋白质水平和其功能活性检测hFⅨ的表达，同时检测子代细胞的活力、增殖倍数、各系标志分化抗原的表达及集落产率来评估rAAV-2对其增殖分化能力的影响。结果 经测序证实转导组子代细胞的RNA可扩增出hFⅨ cDNA片段，上清液中可检测到hFⅨ抗原的表达，每24h分泌量达14.10ng／10^6细胞．转导组和未转导组细胞培养21d后其活力、增殖倍数、标志性分化抗原的阳性率及集落产率差异均无统计学意义（P值均〉0．05）。结论 rAAV-2／hFⅨ能有效地转导人脐血CD34^＋细胞并在其子代细胞中表达具有凝血活性的hFⅨ，且对其体外培养21d的细胞增殖分化能力无明显影响.     

重组AAV2/hFⅨ病毒制备及其基因治疗血友病B的实验研究

目的　制备携带人凝血因子Ⅸ (hFⅨ )基因的重组AAV2病毒 (rAAV2 /hFⅨ ) ,并对用rAAV2 /hFⅨ肌肉注射治疗血友病B模型小鼠的疗效进行评价。方法　通过“一株载体细胞 /一株辅助病毒”的双因素包装策略制备出rAAV2 /hFⅨ ,体外转导BHK 2 1、C2C12细胞后 ,检测细胞培养上清中hFⅨ的表达量 ;肌肉直接注射血友病B模型小鼠后 ,检测其血浆中hFⅨ的抗原水平和凝血活性等指标。结果　转导 2 4h后在细胞上清中即可检测到hFⅨ ,连续检测 12 0h都有表达 ,BHK 2 1、C2C12细胞 2 4h最高表达量分别达到 (5 1.0± 6 .5 )ng/ 10 5细胞和 (6 8.0± 7.2 )ng/ 10 5细胞。rAAV2 /hFⅨ经肌肉直接注射后 ,高、中、低三个剂量组均能检测到小鼠体内高效表达hFⅨ ,在给药后第 3周达到高峰 ,小鼠血浆中hFⅨ的表达量与对照组比较差异有显著性 (P <0 .0 1) ,之后缓慢下降 ,到第 10周仍可检测到低水平hFⅨ表达 ;取第 3周小鼠血浆样品检测凝血功能 ,高、中、低剂量组FⅨ活性均得到明显改善 ,小鼠的割尾实验出血时间明显缩短 ,5min失血量也相应显著减少 ,其中高剂量组hFⅨ最高表达量达到 (387.0± 12 .5 )ng/ml血浆 ,FⅨ活性达到正常水平的 (30 .0± 5 .5 ) % ;给药后第 10周 ,除在注射点外 ,其它主要脏器均未检测到AAV载体DNA。结论     

H_2O_2下调miR-21对MC3T3-E1细胞成骨分化影响的研究

目的探讨H_2O_2诱导的miR-21下调对MC3T3-E1细胞成骨分化的作用及机制。方法取MC3T3-E1细胞系,培养传至第7代进行实验。取MC3T3-E1细胞,以不同浓度H_2O_2(0、40、80、160、320μmol/L)培养,经实时荧光定量PCR检测miR-21表达、MTS法检测细胞活性,选择H_2O_2最合适实验浓度。取MC3T3-E1细胞分为空白对照组(A组)、H_2O_2组(B组)、成骨诱导组(C组)、H_2O_2+成骨诱导组(D组),对应培养后实时荧光定量PCR检测miR-21表达以及成骨标志基因Runx2、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)及Ⅰ型胶原蛋白(collagen typeⅠalpha 1,Col1a1)表达,Western blot检测磷酸酶与张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homolog,PTEN)蛋白表达,茜素红染色观察细胞外钙基质沉积情况,分析H_2O_2对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响。然后再取MC3T3-E1细胞,分为H_2O_2组(A1组)、H_2O_2+成骨诱导组(B1组)、H_2O_2+ miR-21抑制剂+成骨诱导组(C1组)、H_2O_2+ miR-21抑制剂阴性对照+成骨诱导组(D1组);以及H_2O_2组(A2组)、H_2O_2+成骨诱导组(B2组)、H_2O_2+ siRNA-PTEN阴性对照+成骨诱导组(C2组)、H_2O_2+siRNA-PTEN+成骨诱导组(D2组);对应培养后检测成骨标志基因(Runx2、OPN、Col1a1)表达以及细胞外钙基质沉积情况,分析下调miR-21或沉默PTEN对细胞成骨分化的影响。结果结合实时荧光定量PCR检测以及MTS法结果,选择160μmol/L H_2O_2进行实验。第1、2周B组miR-21相对表达量低于A组(P0.05),D组低于C组(P0.05);第2周C组PTEN蛋白相对表达量均低于A、D组(P0.05);第1、2周D组Runx2、OPN及Col1a1 mRNA相对表达量均低于C组(P0.05),茜素红染色显示D组钙基质沉积少于C组。C1组PTEN蛋白相对表达量高于D1组(P0.05);第1、2周B1、D1组Runx2、OPN mRNA相对表达量均高于C1组(P0.05),第2周B1、D1组Col1a1 mRNA均高于C1组(P0.05);茜素红染色显示C1组钙基质沉积少于B1、D1组。第1周D2组OPN、Col1a1 mRNA相对表达量高于B2、C2组(P0.05),第3周茜素红染色显示D2组钙基质沉积明显多于B2、C2组。结论 H_2O_2抑制MC3T3-E1成骨分化可能与miR-21下调有关。     

PGC-1α与心脏生理和疾病关系的研究进展

心脏持续性工作需要高能力的线粒体系统与ATP的生成相匹配。心脏的能量储备相对有限,因此其能量代谢必须经过严格的调控。线粒体是能量合成的主要场所,能够迅速把储存在脂肪酸、糖和乳     

急性ST段上抬型心肌梗死合并1型心肾综合征的危险因素

目的:探讨急性ST段上抬型心肌梗死(ST-segment elevation myocardial infarction,STEMI)患者发生1型心肾综合征(cardio-renal syndrome Type 1,CRS1)的危险因素。方法:STEMI患者378例分为CRS1组(n=98)和非CRS1组(n=280)。比较两组患者的临床资料,分析STEMI患者发生CRS1的独立危险因素,观察急诊冠脉介入治疗(percutaneous coronary intervention,PCI)对STEMI患者发生CRS1的影响。结果:378例STEMI患者中发生CRS1共98例(25.9%),两组间年龄、糖尿病史、入院平均动脉压、入院收缩压、入院心率、Killip分级、左室射血分数、血清肌酐基值、基础预估肾小球滤过率(evaluated glomerular filtration rate,eGFR)、急诊PCI、β-受体阻滞剂和血管紧张素转化酶抑制剂/血管紧张素II受体拮抗剂(angiotensin converting enzyme inhibitors/angiotensin II receptor antagonist,ACEI/ARB)应用在内的十二项指标差异具有统计学意义(均P<0.05),多因素logistic分析显示年龄、糖尿病史、入院收缩压降低、心功能Killip分级、左室射血分数降低、基础eGFR降低、未急诊PCI、未使用ACEI/ARB药物是STEMI患者发生CRS1的独立危险因素。256例患者接受急诊PCI,50例(19.5%)出现CRS1。CRS1组门-球时间及对比剂用量明显高于无CRS1患者(均P<0.05),但术后"罪犯血管"血流恢复情况两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CRS1是STEMI常见的并发症,其发生与多种因素有关,及时的血运重建能降低STEMI患者的CRS1发生率。     

膝关节盘状半月板损伤的关节镜治疗

目的分析关节镜下盘状半月板损伤的治疗方法与近期临床效果。方法回顾分析自2005年1月至2009年6月45例膝关节盘状半月板损伤患者,采用膝关节镜下半月板部分切除成形术24例。大部分切除15例,全切术6例;同时行镜下内侧皱襞切除术5例,软骨面修整2例．术后根据具体手术方式进行个体化的康复治疗。结果所有患者术后未见明显关节肿胀,关节积液在5一加ml,无一例发生关节感染,关节活动无受限,43例患者后术后获得复查,追踪时间6—23个月．平均14个月,平均Lysholm评分由术前61．8±3．2提高为93．5±2．8分（t=49．609,P〈0．01）。结论关节镜下诊疗盘状半月板损伤可根据具体损伤部位采取相应治疗方法,具有准确性高、创伤小、术后关节功能恢复快、并发症少等特点,同时术中可处理其他病变和避免漏诊,获得了良好的近期手术效果。     

早期减压闭合复位中空拉力螺钉内固定治疗青壮年股骨颈骨折

目的 分析青壮年股骨颈骨折早期减压闭合复位中空拉力螺钉固定的临床效果.方法 对68例中青年股骨颈骨折采用早期减压闭合复位中空拉力螺钉内固定治疗.结果 患者平均手术时间48min,平均术中出血量85ml,骨折不愈合者4例,9例发生不同程度股骨头缺血性坏死.按Harris评分标准评价:优良率83.8%.结论 早期减压闭合复位中空拉力螺钉内固定治疗青壮年股骨颈骨折,效果良好,是治疗的有效手段.     

带血供胫骨骨膜移位术的临床应用

目的：解决胫骨中、下段骨不连、骨缺损和陈旧性骨折等治疗难题。方法：应用胫骨筋膜骨膜瓣、带胫前血管的骨膜瓣和节段血供胫骨骨膜瓣移位术三种手术方法，治疗胫骨骨不连接４例，陈旧性胫骨骨折３例，新鲜骨折３例，左胫骨上段骨纤维异样增殖症切除后骨缺损１例。结果：９例病人于１２～１６周骨愈合，２例骨不连接病人于术后２１周骨愈合。结论：带血供胫骨骨膜瓣移位术操作简单，不需吻合血管，可在一个切口中完成，病人痛苦小，骨愈合快。节段血供胫骨骨膜瓣移位术不牺牲小腿主要血管。     

膝降血管为蒂股骨内侧髁瓣移位修复股骨中下段的应用解剖

在３０侧经动脉红色乳胶灌注过的下肢标本上，解剖观测了膝降血管的起始、走行位置、分支和分布。膝降动脉于股骨内侧髁下缘上方１１．５±１．６ｃｍ处起于股动脉，外经２．３±０．４ｍｍ。膝降动脉关节支或直接发自股动脉的关节支是股骨内侧髁前内侧面３ｃｍ×６ｃｍ区域的主要供血动脉。根据解剖结果，设计了带膝降血管蒂股骨内侧髁骨（膜）瓣，用以移位修复股骨中下段骨不连或骨缺损。