牙龈卟啉单胞菌超声提取物对人牙周膜细胞NF-κB受体激活蛋白配体及护骨因子表达的影响

目的 研究牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)超声提取物在人牙周膜细胞NF-κB受体激活蛋白配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)和护骨因子表达中的作用,探讨Pg在牙周炎患者牙槽骨吸收中的作用.方法 用含有不同质量浓度(25、50 mg/L) Pg超声提取物的培养液培养人牙周膜细胞6h(分别为25、50 mg/L实验组),以未做处理的人牙周膜细胞作为空白对照组,运用实时定量聚合酶链反应检测细胞中RANKL及护骨因子mRNA的表达,蛋白质印迹法检测细胞中RANKL及护骨因子的蛋白表达,酶联免疫吸附测定法检测细胞培养液中护骨因子蛋白的表达,应用SPSS 13.0统计软件对各组结果进行单因素方差分析,检验水准为双侧α=0.05.结果 Pg超声提取物干预人牙周膜细胞后,25、50 mg/L实验组细胞中RANKL mRNA(分别为0.253±0.033、0.350±0.075)和蛋白的相对表达量(分别为0.782±0.008、1.281 ±0.072)均显著高于空白对照组(分别为0.126 ±0.035、0.240±0.019)(P ＜0.05);50 mg/L实验组护骨因子mRNA的相对表达量(0.087±0.021)显著低于空白对照组(0.240 ±0.019)(P＜0.01),25、50 mg/L实验组护骨因子蛋白的相对表达量(分别为0.813±0.007、0.398±0.009)与空白对照组(1.131±0.005)相比均显著降低(P＜0.01),培养液中护骨因子蛋白的表达与空白对照组相比差异无统计学意义.结论 Pg超声提取物作用6h后能促进人牙周膜细胞RANKL的表达,抑制护骨因子的表达,从而影响骨代谢.     

抑癌基因P16和P15在口腔黏膜癌前病变中的甲基化改变

目的:探讨口腔黏膜癌前病变组织中抑癌基因P16、P15启动子甲基化与患者病理学及人口学资料的关系.方法:收集2008年以来就诊于首都医科大学附属北京口腔医院黏膜科口腔白斑87例和口腔癌39例,20例正常口腔黏膜为对照,采用内切酶消化法和实时定量PCR的方法对P16和P15甲基化状态进行研究.结果:正常口腔黏膜中,P16、P15启动子区处于未甲基化状态,口腔白斑中P16和P15甲基化阳性率分别为41.38％和44.83％,与正常对照相比显著增高(P＜0.001);口腔鳞癌P16和P15甲基化阳性率分别为20.51％和23.08％,与正常对照相比明显增高(P＜0.05).P16、P15启动子甲基化与患者性别、年龄、病变部位、性质、类型、吸烟等因素无相关性.结论:抑癌基因P16和P15启动子甲基化可能是口腔黏膜白斑和早期癌变的标志物.     

前列腺素E2和白三烯B4对口腔癌促进作用的研究

目的通过在DMBA诱导的金黄地鼠口腔癌颊囊模型上,局部应用白三烯n4（LTB4）或前列腺素E2（PGE2）,探讨LTB4和PGE2在口腔癌形成中的作用,进一步阐明口腔癌的发病机制。方法用DMBA涂抹金黄地鼠左侧颊囊粘膜4周,第五周开始分别局部涂抹LTB4和PGE220周,处死动物,取全部颊囊进行肉眼观察计数和组织学检查,并进行统计学分析。结果LTB4＋DMBA组癌变率为51.4％（18／35）;PGE2＋DMBA组癌变率为45.7％（16／35）,均显著高于DMBA组20.0％（7／35）。另外两组不使用DMBA启动,同时局部分别涂抹LTB4和PGE220周,两组均有异常增生发生,但是没有癌变。结论PGE2和LTB4是口腔癌形成的促进剂,并且有可能成为化学预防作用的重要靶点。     

卵巢癌相关基因的克隆

目的：筛选和克隆卵巢上皮癌相关基因。方法：用3种锚定引种和8种随机引物,共24种组合进行PCR扩增,通过DD－RTPCR分析正常卵巢上皮和卵巢上皮癌mRNA的基因表达差异,将差异片段分离出来,并回收,克隆和进行斑点杂交鉴定、DNA序列测定,并通过国际互联网张检索GenBank进行同源性分析。结果：获得30个差异表达的片段,经斑点杂交初步筛选,克隆11个差显示的阳性片段。选取其中的5个进行序列分析。结论计算机同源性分析表明,5个均为新基因片段,已收录GenBank。     

口腔癌和癌前病变细胞中氧化应激相关基因差异表达

目的 筛选口腔鳞状细胞癌和癌前病变细胞中与氧化应激相关的差异表达基因,探讨氧化应激损伤与口腔癌发生的相关性及其作用机理.方法 采用核酸微阵列技术,对口腔鳞状细胞癌细胞株Tca8113、KB及口腔癌前病变细胞株DOK细胞的基因表达谱进行比较研究,检测、筛选口腔鳞状细胞癌中与氧化应激相关的差异表达基因.结果 与氧化应激相关的差异表达基因有28条.与氧化应激关系较密切的差异表达基因有9条,如过氧化物酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽合成酶、谷胱甘肽S-转移酶、硫氧还原酶及硒蛋白等.另外,细胞角蛋白17、细胞角蛋白10及细胞角蛋白7在Tea8113和KB细胞中表达明显增高.结论 氧化应激损伤可能通过某种信号通路引起细胞角蛋白发生变化,从而导致口腔鳞状细胞癌的发生.氧化应激损伤可能与口腔鳞状细胞癌的发生密切相关.     

抗体-白细胞介素2融合蛋白183B2scFv-Interleukin 2的表达及活性检测

目的在哺乳动物细胞内表达抗体细胞因子融合蛋白183B2scFv Interleukin2,为卵巢癌提供一种新的治疗方法。方法通过基因工程的方法将两段基因IL2和183B2scFv开放读框的编码序列克隆在一起,在CHO K1细胞内人巨细胞病毒启动子的作用下表达可溶性融合蛋白,并检测其对肿瘤细胞的靶向性。结果采用哺乳动物细胞表达,系统表达的这种小分子融合蛋白,既保留了与卵巢癌OC183B2抗原结合的特性,又保持了IL2的生物学活性。融合蛋白在细胞培养上清中保持稳定,更重要的是融合蛋白将IL2靶向表达OC183B2抗原的卵巢癌细胞表面化的同时,又能刺激IL2依赖细胞株的增殖,从而诱发局部有效的抗肿瘤反应。既提高了融合蛋白的穿透组织能力和肿瘤组织部位的浓聚,又避免了大剂量全身应用细胞因子引起的副作用。结论真核表达系统表达的融合蛋白具有很好的生物学活性。     

KLF4对口腔鳞癌细胞增殖的抑制作用

目的 探讨KLF4对人口腔鳞癌细胞CAL27的增殖抑制作用.方法 构建KLF4慢病毒表达载体,并转染人口腔鳞癌细胞系CAL27,转染不含KLF4开放读码框的慢病毒载体LV105作为对照.采用RT-PCR、免疫细胞化学法对KLF4表达进行鉴定.MTT实验、流式细胞术检测KLF4对口腔鳞癌细胞系CAL27的增殖抑制作用.结果 RT-PCR、免疫细胞化学实验均表明实验组细胞KLF4的表达明显高于对照组(P＜0.01).MTT实验结果表明与对照组CAL27/LV105组相比,CAL27/KLF4能够抑制细胞的增殖能力(P＜0.01).CAL27/KLF4主要通过使细胞周期中的G2/M期阻滞来抑制CAL27细胞的增殖(P＜0.01).结论 KLF4转染能够抑制口腔鳞癌细胞系CAL27的增殖能力,可能在口腔鳞状细胞癌中作为抑癌基因发挥作用.