不同抗原修复方法对KLF4在小鼠舌黏膜上皮中表达的比较

KLF4（ Kruppel-like factor 4）是新发现的真核锌指蛋白转录因子,在细胞增殖和分化中发挥重要的生物学效应,其通过多种途径调节细胞的生长、分化、凋亡、增殖,被认为与肿瘤的发生、发展和转移密切相关。 KLF4主要在消化道和上皮细胞中表达,在口腔、食管、皮肤、睾丸、胸腺、角膜、淋巴细胞等处也有表达。 KLF4蛋白表达主要定位在细胞核。在检测过程中,按实验室常规免疫组化染色条件, KLF4不表达或多定位于细胞质,核表达率较低。本实验采用不同抗原修复方法比较KLF4在小鼠舌黏膜上皮的表达情况,以确定其免疫组化染色的最佳抗原修复条件,为进一步利用C57 BL/6 J小鼠口腔癌模型研究KLF4与口腔癌发生发展的关系提供技术帮助。     

三氧化二砷结合低剂量照射对口腔癌细胞抑制作用的研究

目的探讨三氧化二砷（AS2O3）和低剂量照射（750cGY）结合对口腔鳞癌细胞和人血管内皮细胞的体外抑制作用。方法采用MTT法检测不同浓度AS2O3单独作用或与低剂量照射结合对口腔鳞癌细胞系Tca8113细胞和KB细胞以及人血管内皮细胞系（HUVEC）增殖的影响;通过克隆形成试验、流式细胞技术检测不同浓度AS2O3单独作用或与低剂量照射结合对Tca8113和KB细胞的克隆形成抑制和诱导凋亡作用;采用体外血管形成试验验证AS2O3单独作用或与低剂量照射结合对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）血管形成的作用。结果 AS2O3结合低剂量照射对Tca8113细胞、KB细胞和人血管内皮细胞都有明显的生长抑制作用,还可以诱导Tca8113细胞和KB细胞凋亡并显著抑制两种细胞的体外克隆形成率。AS2O3和低剂量照射结合使人血管内皮细胞体外血管的形成明显减少。结论 AS2O3结合低剂量照射对口腔鳞癌细胞具有显著的体外生长抑制及凋亡诱导作用,还可以明显抑制体外血管形成。     

mRNA差异显示方法筛选卵巢癌相关基因

人和动物肿瘤的发生发展就细胞而言,是由于原癌基因的激活和抑癌基因的失活而造成的,所以癌基因与抑癌基因的研究对探索肿瘤发病机理,寻找预防和治疗肿瘤的新措施都具有重要意义.卵巢癌在妇科恶性肿瘤中以难治著称,不易早期发现,且存活率低.目前人类对卵巢癌的遗传基础认识仍然不很清楚,许多研究表明卵巢癌的发生涉及一系列基因的变化,包括显性癌基因、错配修复基因和众多的肿瘤抑制基因.mRNA差异显示方法因其简单、敏感、高效、快速等     

人垂体肿瘤转化基因1在卵巢癌中表达的研究

目的　检测卵巢癌组织中人垂体肿瘤转化基因 1(hPTTG1)的表达。方法　将 4例卵巢癌组织用含 5 12条人类基因的基因表达谱芯片筛查卵巢癌相关基因。对上调基因hPTTG1在 39例卵巢癌组织及 18例正常卵巢组织中的表达情况用免疫组化方法进行检测。结果　hPTTG1在所有卵巢癌标本中均呈阳性表达 ,而在正常卵巢中无表达。免疫反应性的强弱与卵巢癌的病理类型、临床分期及组织学分级无显著相关性。结论　hPT TG1表达增高可能是卵巢癌的一个分子标志 ,有可能作为一个治疗靶点。     

HOXC9对人口腔鳞状细胞癌细胞生物学行为的影响

目的 研究HOXC9基因对口腔鳞癌细胞系CAL-27生物学行为的影响。方法 构建HOXC9过表达质粒载体,HOXC9过表达质粒转染CAL-27细胞,实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测转染后细胞中HOXC9 mRNA表达水平,Western blotting检测转染后HOXC9蛋白表达水平,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测过表达HOXC9对细胞增殖能力的影响,克隆形成实验检测过表达HOXC9对细胞克隆形成能力的影响,划痕实验检测过表达HOXC9对细胞迁移能力的影响,Transwell实验检测过表达HOXC9对细胞侵袭能力的影响。结果与空载对照组相比,转染HOXC9过表达质粒后,细胞中HOXC9 mRNA表达水平明显升高（P<0.001）。实验组细胞中HOXC9蛋白表达明显升高,过表达HOXC9对CAL-27细胞的增殖能力无明显影响（P>0.05）,过表达HOXC9可以促进CAL-27细胞的克隆形成能力（P<0.05）,过表达HOXC9可以促进CAL-27细胞的迁移能力（P<0.05）,过表达HOXC9可以促进CAL-27细胞的侵袭能力（P<0.001...     

SV40 T基因诱导的人卵巢癌细胞永生化

目的 建立人卵巢癌永生化细胞系，为卵巢癌体外研究提供实验模型。方法 利用基因重组技术构建猴肾病毒40（SV40）T抗原基因的高效真核表达载体pcD2-SV40。将其转染10例原代培养的早期传代细胞，经G418筛选，抗性克隆扩大培养，建立永生化细胞系。免疫组化检测细胞的上皮起源，用PCR、RT－PCR和Southern Blot方法鉴定SV40 T基因在转染细胞中的表达。观察所建立的永生化细胞系的染色体核型。结果 10例转染细胞中，6例筛选出抗性克隆。角蛋白免疫组化证实3例为上皮起源。其中2例上皮起源细胞得以扩大培养成系，长期稳定传代，分别命名为BUPH：OVSC－2和BUPH：OVCA－3。经鉴定两种细胞系中存在SV40 T在基因水平及转录水平的表达。其染色体核型均符合人体恶性细胞特征。结论 利用SV40T抗原基因进行人卵巢癌原代细胞的 生化是一种可行的、可重复的建系方法，可提高卵巢癌细胞成系机率。     

Krüppel-like factor 4在小鼠舌黏膜癌变过程中的表达

目的 检测Krüppel-like factor4 (KLF4)在小鼠舌黏膜癌变模型中的表达,探讨KLF4与口腔黏膜癌变的关系.方法 选用C57BL/6J小鼠75只,其中阴性对照组15只,饮用纯净水;实验组小鼠60只,饮用4-硝基喹啉-1-氧化物(4NQO)水溶液(50μg/ml).实验组分别在第8、12、16、24周末各处死15只小鼠,取舌组织,观察并记录标本的大体损害,将其固定在10％中性福尔马林溶液中,用于HE染色及KLF4免疫组织化学染色.结果 在4NQO的诱导下,成功构建了小鼠舌黏膜癌变模型.HE染色结果显示,随着4NQO处理时间的延长,小鼠舌黏膜病变逐步加重,呈现出从单纯增生、异常增生到癌的变化.免疫组化结果显示,KLF4在口腔癌变过程中呈现动态变化,与正常口腔黏膜上皮相比,KLF4在单纯增生、异常增生上皮中的表达没有明显变化,但在鳞癌中,KLF4的表达量明显下降,具有显著性差异(P＜0.01).结论 KLF4可能在口腔黏膜上皮癌变过程中发挥抑癌基因的作用.     

DNA甲基化和组蛋白乙酰化对人口腔鳞癌细胞中KLF4基因的调控研究

目的：探讨人口腔鳞癌中DNA甲基化和组蛋白乙酰化对KLF4基因的调控作用。方法体外培养人口腔鳞癌细胞系SCC-6,分别用DNA甲基化抑制剂5-氮-2’-脱氧胞苷(DAC)、组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A( TSA)处理SCC-6细胞,并据此将SCC-6分为4组,阴性对照组(不做处理)、DAC处理组、TSA处理组、DAC+TSA联合处理组,采用荧光定量PCR方法检测SCC-6细胞经DAC或/和TSA处理前后KLF4 RNA水平的变化;用免疫细胞化学方法检测SCC-6细胞经DAC或/和TSA处理前后KLF4蛋白的变化。结果 SCC-6细胞DAC处理组、TSA处理组、DAC+TSA 组的KLF4 RNA水平与阴性对照组相比均有显著升高(P<0.01)。另外,DAC处理组KLF4 RNA水平均高于其他3组(P<0.01)。 SCC-6细胞DAC处理组中KLF4蛋白表达明显升高,均高于其他3组(P<0.01)。 TSA处理组与DAC+TSA联合组KLF4蛋白表达也都高于阴性对照组(P<0.01);TSA处理组与DAC+TSA处理组间无显著差异(P>0.05)。结论在口腔鳞状细胞癌SCC-6细胞中导致KLF4基因沉默的主要原因可能为DNA甲基化,此外组蛋白乙酰化可能也参与了KLF4表达的调控,但组蛋白乙酰化在提高KLF4表达方面与去甲基化无明显协同作用。     

莱菔硫烷对RhoC敲低的口腔鳞癌细胞的调控作用

目的 观察莱菔硫烷（sulforaphane,SFN）对RhoC稳定敲低的口腔鳞癌细胞系CAL27 RhoC/shRNA的影响。方法 选取口腔鳞癌细胞系CAL27 RhoC/shRNA进行培养,用不同浓度的SFN处理对数期CAL27RhoC/shRNA细胞,通过RT-PCR和western blot检测SFN对细胞中Nrf2 RNA和蛋白水平的影响。分别通过MTT实验、克隆形成实验和侵袭实验检测SFN对口腔鳞癌细胞增殖能力、克隆形成能力和侵袭能力的影响;PHOD染色检测SFN对口腔鳞癌细胞F-actin聚合能力的影响。结果 应用SFN能有效抑制口腔鳞癌细胞CAL27 RhoC/shRNA的增殖能力、克隆形成能力、侵袭能力和F-actin蛋白聚合能力。结论 SFN可减弱RhoC敲低的口腔鳞癌细胞的恶性能力。