FTY720介导的淋巴细胞归巢作用对外周淋巴细胞的影响

FTY720是由ISP-I衍生而来的一类新型免疫抑制剂。近年来的研究显示，FTY720在器官移植排斥以及自身免疫性疾病的一系列模型中显示出良好的治疗效果。研究表明，FTY720主要通过减少外周淋巴细胞数目发挥免疫抑制作用，但其具体作用机制仍存在争议。一部分观点认为FTY720是通过诱导外周淋巴细胞发生凋亡而引起白细胞数急剧下降；另一部分观点则认为FTY720是通过阻断淋巴细胞外流，即将淋巴细胞阻断在次级淋巴组织中，从而阻止活化的淋巴细胞迁移至移植器官或炎症组织部位，达到免疫抑制作用。本研究通过流式细胞技术以及荧光染料标记细胞跟踪技术证实：FTY720主要是通过促进外周循环中的淋巴细胞归巢而发挥其免疫抑制作用。     

利用噬菌体库筛选IL-6拮抗剂及功能研究

目的 以人sIL-6R为靶分子，利用噬菌体随机15肽库筛选其亲和短肽，结合计算机模拟分析，获得具有抑制IL-6／IL-6R结合作用的短肽序列，作为IL-6拮抗剂。方法 通过亲和筛选，获得一组sIL-6R特异亲和序列。测定序列，结合计算机模拟，选取具有潜在拮抗功能的2条肽(命名为pTl、pT2)。合成短肽，进行ELISA竞争抑制实验和细胞增殖抑制实验。结果 pTl、pT2均可抑制IL-6，sIL-6R的结合。pTl、pT2可抑制XG-7细胞的增殖，并且这种抑制作用随着合成肽浓度的增高而增强，pTl、pT2不影响。7TD1细胞的增殖。结论 利用亲和筛选并结合计算机模拟从随机15肽库中获得可抑制IL-6／sIL-6R结合的短肽，并可抑制IL-6依赖细胞XG-7的增殖。     

用抗人T淋巴细胞单克隆抗体去除骨髓中成熟T细胞的影响因素

将骨髓细胞预先用抗人全部T细胞的单克隆抗体P81(MeAb P81)处理,再将这种处理过的骨髓细胞悬液通过兔抗小鼠IgG—Sepharose 6MB亲和层析柱。由于兔抗小鼠IgG抗体与MeAb P81包被细胞的特异性结合,将P81包被细胞滞留在柱内,使骨髓细胞中免疫活性细胞被清除。本文比较了三种不同温度对亲和层析柱分离效率的影响;观察了上柱的骨髓细胞数;同时摸索了P81的用量。清除率用间接免疫荧光法检测。实验表明,用亲和层析柱去除骨髓中成熟T细胞的最佳条件为:10~7个骨髓细胞,经20ml 1:500倍稀释的MeAb P81孵育,在4℃条件下,可使骨髓中免疫活性细胞的清除率达82±3.2％。用CFU—e测定表明细胞通过柱体后对骨髓粒系母细胞并无损伤。此法操作简便,省时,不需要昂贵的设备,重复性好,柱体亦可反复使用,可能有临床应用的潜力。     

免疫毒素清除人骨髓中克隆化白血病细胞的研究

识别普通型急性淋巴细胞白血病抗原(CALLA)的单克隆抗体共价连接到完整的蓖麻毒素上,间接免疫荧光显示此免疫毒素(79:Ricin)能与Nalm-1靶细胞结合。克隆化试验表明:半乳糖存在时,10~(-9)～10~(-3)M 79:Ricin能杀死99.9％ Nalm-1细胞。正常骨髓细胞的存在并不影响它清除靶细胞的效果。79:Ricin免疫毒素对骨髓造血干细胞毒性不很大。     

抗人淋巴细胞E受体单克隆抗体的研究

用杂交瘤技术制备了一识别E受体单克隆抗体Tlla(JN20-5),间接免疫荧光分析表明Tlla(JN 20-5)与多种T细胞反应,并识别人外周血全部T细胞。此抗体对E玫瑰花生成有明显阻断作用,其相应抗原又与E受体一样对胰酶消化敏感。外周血单个核细胞经PHA刺激不同时间后与Tlla(JN 20-5)及另一CD_2抗体的反应百分率无明显增加,但反应强度增加。标准CD_2抗体Leu 5b、Anti-CCT_3都有阻断FITC标记Tlla(JN 20-5)的作用,说明Tlla(JN 20-5)为一识别E玫瑰花受体的单克隆抗体。     

人组合抗体库(HuCAL)的构建及其优化

基于抗体结构信息、通过聚类分析建立的全合成人组合抗体库(the fully gene-synthetic human combinational antibody library,HuCAL)由Peter Pack等于1997年率先提出.与其它抗体库不同,HuCAL由源于人免疫系统胚系基因分类获得的7个VH、7个VL(4个Vκ、3个Vλ)主架序列及CDR3库组成,其49个ScFv主架在大肠杆菌周质腔中,均能以分泌形式正确表达;CDR两侧特有的酶切位点,使CDR的替换非常方便;同时,由于CDR3库在构建时,采用了三联核苷酸突变技术,增加了随机化的准确性和效率,使抗体库的质量得到极大的提高.构建好的HuCAL经多种抗原筛选后,产生了一大批高亲和力结合子,且筛出的抗体表达量、热稳定性较好.由于HuCAL主架基因是人免疫系统胚系基因的通用序列,其免疫原性大大降低,可用于产生体内诊断性或治疗性的人源抗体.本文对HuCAL的构建及其优化进行综述.     

抗工程菌产HBcAg单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

制备乙型肝炎核心抗原(HBcAg)和核心抗体(抗-HBc)是深入研究乙型肝炎不可缺少的条件之一。目前国内已建立多株抗-HBc单克隆抗体,但免疫用的HBcAg基本上是从尸肝中提取。由于富含HBcAg的尸肝不易获得,而且从组织中提取纯化抗原的步骤也比较复杂,因此抗原来源困难。近年来,HBcAg已能用遗传工程菌进行大量生产,本文报告用菌产HBcAg制备抗HBc-     

单克隆抗体与毒素的连接

单克隆抗体与毒素连接得到的结合物亦称免疫毒素，主要作为导向药物。定向药物的设想早在100年前就由德国药物化学家Ehrlich提出，但由于技术上的原因，特别是；(1)可用于结合的药物不多，而且毒性不强：(2)抗体的纯度和特异性差；(3)制备结合钧的方法不理想。因此定向药物的设想在很长一段时间里一直未能实现。八十年代以后由杂变瘤技术产生单克隆抗体的方法越来越普及，单克隆抗体特异性高，匀一性好，能大量生产。此外异型双功能交联剂的发展，大大推动了免疫毒素这一领域的发展。     

利用重组痘苗病毒表达人CD20基因

目的获得重组人 CD2 0分子并研究编码人 CD2 0的基因在痘苗病毒中的表达。方法从 p GEM- T- EASY/ CD2 0载体上酶切下编码人 CD2 0分子的 c DNA,亚克隆到 p JSA1175载体上 ,重组质粒与野生痘苗病毒共转染 TK- 143细胞。结果APAAP检测到重组病毒感染的细胞表面有 CD2 0分子表达 ,富集后病毒滴度约为 1× 10 9pfu/ ml。结论人 CD2 0基因在痘苗病毒中表达 ,为研究其功能以及研制单克隆抗体奠定了基础