芳酰肼类小分子有机化合物J2的免疫抑制作用

目的:研究芳酰肼类小分子有机化合物J2的免疫抑制作用。方法:利用3H-TdR掺入法检测混合淋巴细胞培养,通过玫瑰花结计数评价细胞黏附实验,利用流式细胞术检测IL-2和IFN-γ,通过凝胶阻滞电泳分析(electrophoresis mob ility sh ift assay,EMSA)研究活化T细胞核因子(nuc lear factor of activated T cells,NF-AT)的表达。结果:J2对混合淋巴细胞培养中反应细胞的增殖具有抑制作用,其IC50为(67.75±4.47)μmol/L;J2可以抑制表达CD4的HEK293/CD4细胞和表达MHCⅡ类分子的Daud i细胞之间的细胞黏附;对反应细胞的IL-2和IFN-γ的产生具有抑制作用;并抑制NF-AT的表达。结论:小分子有机化合物J2具有一定的免疫抑制作用。     

噬菌体Ф29DNA装配研究进展

噬菌体Ф29是研究双链DNA病毒核酸装配很好的模型。噬菌体Ф29装配机制的研究将对病毒防治以及大分子之间的相互作用提供理论帮助。本文对噬菌体Ф29DNA装配过程中的主要参与成分以及小分子pRNA与它们的相互作用，DNA装配机制的几种学说做一综述。     

影响母乳量的社会心理学因素研究

母乳是婴儿的最佳食品,近20年来,中国的婴儿母乳喂养率呈现迅速下降的趋势。以往的一些研究工作表明,与母乳喂养有关的重要因素是“乳量分泌少”。作者在上海、云南和吉林进行了一系列的研究,包括399例的病例对照研究,500例的第一次随访研究和1999例的第二次随访研究,主要目的在于分析影响乳量的因素。研究结果表明,影响乳量分泌和喂养方式的主要因素是杜会心理学和行为因素,这些在统计学上有意义的因素正是妇幼保健工作的重点。本文提供了为促进母乳喂养而采取措施所需的重要信息。     

FKBP12/BAX双聚体诱导细胞凋亡模型的建立

目的：建立FKBP12／BAX双聚体可诱导细胞凋亡生物效应的细胞模型,并利用阳性药物对其进行鉴定。方法：RT-PCR扩增鼠源性BAX全长基因,插入pUC18载体进行测序鉴定。将鉴定正确的mBAX插入载体pC4FV1E中,构建pC4FV1E／BAX表达质粒。将表达质粒与pcDNA3．1共转染HEK293细胞,建立pCAFV1E／BAX-neo和neo基因稳定表达的细胞模型。利用形态学方法、流式细胞术等对化学药物诱导FKBP12／BAX双聚体介导的细胞凋亡进行定性及定量的分析。结果：RT-PCR、Westem blot法分别从mRNA及蛋白水平检测到FKBP12-mBAX融合基因的整合及表达;阳性化合物AP20187作用4～6h后,Giemsa染色可见明显的凋亡小体;钙依赖核酸内切酶亦被激活,出现典型的“DNA ladder”;天然产物FK506可竞争性地抑制这种阳性药物诱导的细胞凋亡。结论：FKBP12／BAX双聚体可诱导细胞凋亡生物效应的细胞模型的建立,为FK506类小分子化合药物的高通量筛选提供可应用的技术平台。     

逆转录PCR克隆L－选择素cDNA

本文为从转录水平研究Ｌ─选择素表达的调节机制，利用Ｇｏｌｄｋｅｙ软件及ＥＭＢＬ数据库选出人与大鼠Ｌ─选择素高同源性但与其它细胞因子及其受体无高同源性的ｃＤＮＡ片段，设计ＰＣＲ引物，一步法分离Ｂ系Ｒａｊｉ细胞ＲＮＡ，逆转录ＰＣＲ扩增目的片段，ＨｉｎｆⅠ酶切初步确定后，将片段插入ＰＵＣ１９质粒ＨｉｎｃⅡ位点，转化ＪＭ１０９大肠杆菌，经测序证实扩增克隆片段与设计相符。     

抗血小板糖蛋白IIb/IIIa Fab抗体的原核表达及其生物活性

目的 :研制抗血小板膜糖蛋白IIb/IIIaFab抗体。方法 :通过间接免疫荧光试验和血小板聚集抑制试验 ,选取鼠源抗血小板糖蛋白IIb/IIIa单克隆抗体 (mAbP14 0 )。从分泌该mAb的杂交瘤细胞株 (P14 0 )中 ,克隆到抗体轻链基因和重链Fd段基因 ,构建原核表达重组质粒p3MH/P14 0к Fd ,并在XLI Blu菌株中进行表达。采用钴亲和层析法对P14 0Fab抗体进行纯化 ,用SDS PAGE、ELISA和Westernblot等方法 ,对P14 0Fab抗体进行检测 ,并通过血小板聚集抑制试验 ,观察P14 0Fab抗体的抗栓活性。结果 :SDS PAGE和Westernblot表明 ,纯化的P14 0Fab抗体的相对分子质量 (Mr)约为 4 70 0 0。ELISA的结果显示 ,P14 0Fab抗体可与人血小板特异性结合。在体外ADP诱导的血小板聚集试验中 ,P14 0Fab抗体对血小板聚集的抑制作用成剂量依赖性 ,IC50 的平均值为 16 .85mg/L。结论 :成功地研制出具有抗栓活性的抗血小板膜糖蛋白IIb/IIIa的Fab抗体     

金黄色葡萄球菌肠毒素B 的中和性全人源抗体制备北大核心CSCD

目的:制备靶向金黄色葡萄球菌外分泌蛋白肠毒素B(SEB)的中和性全人源单克隆抗体,为SEB诱发的中毒性休克综合征(SEBILS)提供新的治疗方法。方法:以金黄色葡萄球菌COL基因组为模板,利用PCR技术扩增seb基因,进一步构建原核表达载体pET28a-seb,并克隆至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达目的蛋白,通过Ni2+柱亲和纯化获得SEB蛋白;利用SEB诱导的小鼠SEBILS模型检测SEB活性;进一步通过噬菌体展示技术筛选SEB结合的噬菌体克隆并进行序列测定,以测序正确的阳性克隆质粒为模板,扩增该抗体的可变区基因并构建重组表达载体转染至293E细胞,并利用Protein A树脂亲和纯化抗体;利用SPR检测其亲和力,通过SEBILS模型验证抗体活性。结果:获得了高纯度重组SEB蛋白,且具有很好的活性;筛选出两株全人源靶向SEB的单克隆抗体YG11-1和YG11-2,SPR结果表明YG11-1、YG11-2的亲和力相当(其KD值分别为16.59 nmol/L和21.35 nmol/L),且YG11-1和YG11-2均能有效抵抗SEB诱导的小鼠中毒性休克综合征,降低小鼠的死亡率,YG11-2(200μg/只)时保护率能够达到100%。结论:本研究获得了具有良好活性的重组SEB蛋白,并制备了抗SEB两株全人源单克隆抗体,为研制SEB中毒治疗制剂提供了新的选择。     

从噬菌体随机肽库中筛选IL-6抗体的识别表位

目的：从噬菌体随机６肽文库中筛选ＩＬ－６抗体的识别表位。方法：利用具有ＩＬ－６中和活性的单抗Ｃ２２０筛选呈现于丝状噬菌体表面Ｐ３蛋白的随机６肽文库。结果：从噬菌体随机６肽文库中选出３６株可与单抗特异结合的噬菌体克隆,其中多数克隆呈现核心序列ＳＥＬＲ,该序列与ＩＬ－６的育列具有一定同源性。竞争结合实验的Ｗｅｓｔｅｍ印迹分析,带有ＳＷＦＮＬＲ和ＨＳＷＬＲＹ小肽的２株噬菌体克隆可与ＩＬ－６竞争结合单抗Ｃ     

Jak/STAT信号转导途径研究新进展

Ｊａｋ蛋白酪氨酸激酶和“信号转导子和转录激活子”的功能是随着近年来许多细胞因子和生活因子的信号转导机制的研究和逐渐阐明的。Ｊａｋ激酶通常是以与细胞因子受体胞浆区偶联的存在,在受体与相应配基结合后活化,并通过激活ＳＴＡＴ而诱导目的基因表达。由于Ｊａｋ、ＳＴＡＴ广泛地参与了各种细胞因子的信号转导过程,因此出现也Ｊａｋ／ＳＴＡＴ信号途径这一概念,并成为继Ｒａｓ途径之后的又一重要的细胞因子信号转导通路。