Myostatin基因疫苗动物免疫效果的初步研究

目的:检测Myostatin基因疫苗的免疫效果,观察其对免疫动物的影响,为Myostatin基因疫苗的应用提供实验研究.方法:以Myostatin基因疫苗pVAC-TT-Ms免疫小鼠,ELISA法测定其免疫小鼠血清的抗体滴度,通过全自动生化分析仪检测血清指标.以组织化学染色(HE)染色检测Myostatin基因疫苗对免疫小鼠骨骼肌的影响.利用Scion Image 4.02 分析Myostatin基因疫苗对免疫小鼠肌纤维横截面积的影响.结果:基因疫苗Myostatin能够诱导小鼠产生针对Myostatin的抗血清.与正常对照组比较,基因疫苗pVAC-TT-Ms免疫的动物平均体重增加了9.8%,股四头肌、腓肠肌和胸大肌分别增加了24.1%、10.9%和20.3%.结论:基因疫苗Myostatin能够诱导小鼠产生针对Myostatin的特异性中和抗体.Myostatin基因疫苗免疫的动物体重增加,肌细胞有肥大现象,肌肉质量明显增加.     

可溶性IL-13受体α2对支气管哮喘小鼠气道炎症的影响

目的 通过观察可溶性IL-13受体α2(sIL-13Rα2)对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠气道炎症的影响,了解sIL-13Rα2对哮喘潜在的治疗价值.方法 24只BALB/c小鼠随机分成正常对照组、哮喘组及sIL-13Rα2治疗组,哮喘组和sIL-13Rα2治疗组以鸡卵白蛋白(OVA)致敏和激发,建立哮喘模型,对照组用生理盐水代替OVA.sIL-13Rα2治疗组每次激发前30 min腹腔注射sIL-13Rα2 100μg,正常对照组及哮喘组则用生理盐水替代.比较各组支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞计数、肺组织学检查.结果 与正常对照组相比,哮喘组BALF中细胞总数及嗜酸粒细胞百分比显著增加(P值均＜0.001),血清及BALF中IL-13明显增多(P值均＜0.001),病理示肺组织损害明显.与哮喘组相比,sIL-13Rα2治疗组BALF中细胞总数及嗜酸粒细胞百分比显著降低(P值均＜0.001),血清及BALF中IL-13明显减少(P值均＜0.001),病理示肺组织损害明显减轻.结论 sIL-13Rα2可明显减轻哮喘小鼠气道炎症.     

重组人bFGF蛋白的克隆、表达、纯化及鉴定

【目的】构建人碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）基因的原核表达载体,并对其进行诱导表达和蛋白质纯化,以获得大量重组人bFGF蛋白。【方法】人工合成bFGF基因,进行测序分析,将该基因克隆入原核表达载体pET22b中,转化感受态细胞大肠杆菌RPX,经IPTG诱导表达重组bFGF蛋白,对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析和Western blotting检测分析。【结果】成功构建了人重组bFGF表达质粒pET22b-rhbFGF,表达的蛋白经SDS-PAGE电泳分析,分子量约在18×103Da处出现了一条新生的蛋白条带,经灰度扫描检测,表达量约占菌体总蛋白的28%,纯化后的蛋白质灰度扫描检测,纯度为95%。【结论】成功构建了重组人bFGF原核表达载体,并成功纯化了该基因的原核表达产物,为下一步人bFGF的产业化打下了基础。     

人MUC1重复序列与GM-CSF融合表达的重组卡介苗疫苗对乳腺癌生长的抑制作用

目的 构建一种新的基于人MUC1重复序列与GM-CSF融合表达的重组卡介苗疫苗,并观察其对乳腺癌生长的预防性抑制作用.方法 分步克隆人MUC1重复序列1、4、8串联体基因(MVNTR1/4/8),构建人MUC1重复序列串联体与GM-CSF基因融合的大肠-分枝杆菌表达载体pDE22-MVNTR1/4/8-CSF,酶切鉴定及序列分析后,将构建的穿梭质粒电穿孔转染卡介苗,构建重组卡介苗疫苗rBCG-MVNTR1/4/8-CSF,SDS-PAGE和Western Blot检测MVNTR与GM-CSF融合蛋白的表达.在hu-PBL-SCID鼠模型评价其对乳腺癌生长的抑制作用,并通过免疫组化染色检测其免疫诱导的T细胞反应.结果 SDS-PAGE和Western Blot结果说明:人MUC1重复序列与GM-CSF基因融合的重组卡介苗疫苗分别有MVNTR1/4/8与GM-CSF融合蛋白的表达.rBCG-MVNTR4/8-CSF免疫组在MCF-7乳腺癌细胞接种42 d后,肿瘤成瘤率分别为37.5%和25%,而PBS和BCG-pDE22对照组均为100%(P＜0.05).与对照组相比,rBCG-MVNTR4/8-CSF预防接种显著抑制MCF-7乳腺癌细胞生长(P＜0.01),且生长抑制作用随着VNTR的增加而增强.肿瘤细胞接种70 d后,rBCG-MVNTR4/8-CSF组小鼠生存率分别为75%和87.5%,而BCG-pDE22对照组的生存率为12.5%(P＜0.05).rBCG-MVNTR4/8-CSF免疫组瘤体组织中可见CD4+和CD8+T淋巴细胞浸润.结论 重组卡介苗疫苗rBCG-MVNTR4/8-CSF预防接种可显著抑制乳腺癌生长.     

组织型纤溶酶原激活物cDNA的克隆

组织型纤溶酶原激活物（t1SSUetypepl。Smlllogen。CtlV“－tor，tPA）是一种丝氨酸蛋白水解酶，在纤维蛋白存在的条件下，可使血浆纤溶酶原转变为纤溶酶，如果没有纤维蛋白的存在，它使纤溶酶原转变为纤溶酶的能力有限．当静脉给予药理剂量的tPA时，它与血栓处的纤维蛋白结合，同时把捕捉的纤溶酶原转变为纤溶酶，使纤维蛋白的溶解在血栓处发生，而并非全身性，这样可以减少全身性出血副作用，这也更是tPA优于尿激酶和链激酶之处．tPAlha床上主要用于治疗血栓性疾病，如急性心肌梗塞、肺栓塞、视网膜动脉栓塞等．而天然来源的tPA非…     

TRAIL工程菌的高密度发酵及其体内活性的测定

目的实现TRAIL工程菌的高密度发酵,并测定TRAIL在体内的抗瘤活性。方法利用自控发酵罐,采用恒定溶氧、连续补料的方法对TRAIL工程菌进行了高密度发酵,从发酵菌体中纯化TRAIL蛋白,构建动物肿瘤模型,用所纯化的蛋白进行体内抗瘤试验。结果高密度发酵取得成功,发酵菌中TRAIL的表达量与摇瓶中的相当,摇瓶水平纯化TRAIL蛋白的工艺也适用发酵水平,体内试验显示TRAIL对小鼠移植瘤的抑制率达到67.2%。结论TRAIL工程菌成功实现高密度发酵,TRAIL蛋白在体内具有明显的抗瘤活性。     

十五肽BPC 157对小型猪皮肤切割伤的保护作用研究

目的:研究机体保护多肽BPC 157对于小型猪皮肤切割伤的治疗作用.方法:将24只10～15kg的小型猪随机分为4组,采用特制的打孔器在动物背部打孔制备皮肤切割伤模型,模型分别用甘露醇、成纤维细胞生长因子(bFGF)和BPC 157(125和250ng·kg-1)处理17d,bid,在不同时期观察创面愈合水平以及肉芽组织内的胶原含量.结果:对小型猪皮肤切割伤模型,BPC 157(125～250ng·kg-1)可以加快创面愈合速度,增加创面表层肉芽组织内胶原的含量,和对照组相比,差异有显著性,但作用弱于bFGF.d17对照组尚残留创面18.6%,而bFGF组和BPC 157低、高剂量组创面已经基本愈合.结论:BPC 157有促进表皮修复的作用和促进肉芽组织成熟的作用.     

抗hTNF-α中和抗体识别表位的筛选和鉴定

目的:对噬菌体随机线性7肽库进行筛选,得到能与抗hTNF-α中和抗体特异性结合的表位肽.方法:以抗hT-NF-α中和抗体为靶,筛选噬菌体线性7肽库,双夹心ELISA,竞争抑制ELISA及MAP点杂交鉴定阳性噬菌体克隆.结果:经3轮筛选后随机挑取50个噬菌体克隆,经ELISA检测其中15个克隆显示与抗hTNF-α抗体有较强的结合能力,DNA测序结果得到的结构相似群为:WTFKMQP,WPFKMSP,WPYK-MIP和WNYKMLP,竞争性ELISA结果显示四个序列均能与TNF竞争性结合抗hTNF-α mAb,MAP点杂交结果显示筛选得到的多肽是能与抗hTNF-α抗体特异性结合的多肽.结论:筛选得到的7肽序列具有很高的同源性,并能与抗hTNF-α中和抗体特异性结合,为hTNF-α相关多肽疫苗的研究提供依据.     

重组人Tum-5融合蛋白的克隆、表达、纯化及鉴定

目的:构建人肿瘤抑素(tumstatin)活性片段Tum-5的融合重组表达载体并对其进行诱导表达和蛋白纯化以获得大量重组融合蛋白.方法:人工合成Tum-5基因,进行测序分析,将该基因克隆入原核表达载体pQE-30中,转化感受态细胞DHSα,经IPTG诱导表达重组融合蛋白,对表达产物进行Tricine-SDS-PAGE电泳分析和Western Blot检测分析.结果:构建了重组融合表达质粒pQE-30-Tum-5,表达的蛋白经Tricine-SDS-PAGE电泳分析,在约Mr10×103处出现了一条新生的蛋白条带,经灰度扫描检测,表达量约占菌体总蛋白的40%,纯化后的蛋白灰度扫描检测,纯度为95%.结论:成功地构建了人Tum-5基因的原核表达载体,并纯化了该基因的原核表达产物.