上海地区阿罗格皮肤点刺试验临床分析

目的研究上海地区阿罗格皮肤点刺试验阳性病例在变应原分布、年龄、季节等方面的特点。方法应用阿罗格点刺试液对上海地区1000例有鼻部过敏症状者进行皮肤点刺试验,分析30种变应原的分布以及在不同季节的阳性率。按年龄将1000例被调查者分为≤17岁、18~39岁、40~59岁和≥60岁组,分别计算皮肤点刺试验阳性率,并进行统计学处理。结果皮肤点刺试验的阳性率,30种变应原中以粉尘螨、屋尘螨最高,其次为干草尘埃、胶乳、狗上皮、猫上皮;男女之间差异无统计学差异(P>0.05);秋、冬季显著高于春、夏季(P<0.01);随着年龄的增大,阳性率呈阶梯式下降趋势(P<0.01)。结论上海地区变应性鼻炎患者的变应原以粉尘螨、屋尘螨为主;点刺试验阳性率以秋、冬季较高且随年龄的增大呈下降趋势。     

梗阻性黄疸大鼠肝细胞线粒体DNA损伤的定量研究

目的:对梗阻性黄疸大鼠肝细胞线粒体DNA损伤进行定量研究,探讨其与线粒体功能损伤的关系.方法:48只健康Wistar大鼠随机分为假手术组和梗阻性黄疸组,梗阻性黄疸组用胆总管双重结扎并切断制成胆道梗阻模型.Estabrook氧电极法测定线粒体呼吸控制率(RCR)和磷氧比值、Kimmich法测定肝组织内ATP含量以评价肝细胞线粒体功能,并利用荧光定量PCR方法,对各组大鼠肝细胞总mtDNA、缺失型mtDNA进行相对定量检测.结果:相对于假手术组,梗阻性黄疸组RCR、磷氧比值及肝组织ATP含量明显减少(P＜0.01),细胞内总mtDNA拷贝数减少(P＜0.01);假手术组内未检测出缺失型mtDNA,梗阻性黄疸组存在着缺失型mtDNA;随着梗阻时间的延长,梗阻性黄疸组RCR、磷氧比值及肝组织ATP含量逐步降低,总mtDAN拷贝数逐步减少(P＜0.01),缺失型mtDNA在总mtDNA中的百分比逐步增加(P＜0.01),其变化与线粒体功能损害相一致.结论:大鼠梗阻性黄疸肝细胞mtDNA损伤是导致线粒体功能损伤的重要因素.     

梗阻性黄疸大鼠肝细胞线粒体DNA片段缺失的定位研究

目的对梗组性黄疸大鼠线粒体DNA片段缺失进行定位研究，为进一步研究梗阻性黄疸大鼠线粒体功能及肝功能的变化情况打下基础。方法48只健康wistar大鼠随机分为SHAM组（假手术组），BDO组（梗阻性黄疸组），利用大片段PCR结合ApaⅠ及SauⅠ限制性酶切分析及基因测序方法，对大鼠梗阻性黄疸mtDNA的片段缺失状况进行定位研究。结果大鼠梗阻性黄疸肝细胞mtDNA的片段缺失位点位于4101-15294之间。结论大鼠梗阻性黄疸肝细胞mtDNA存在着4101-15294碱基之间约11194bp的片段缺失。     

提高大鼠原位肝移植手术质量的技巧和注意事项

目的探讨提高大鼠原位肝移植手术质量的技巧和注意事项。方法通过改良的双袖套法对115只大鼠进行了原位肝移植(不包括预试验),设定供肝冷保存时间为60min。观察手术成功率和术后生存率以及手术并发症。结果手术成功率为95.6%,1周存活率为88.7%。结论熟练的显微外科技术和缩短无肝期时间是手术成功的关键,采用各项改良措施并注意手术的细节是手术成功的有效保障。     

冷保存、慢性排斥反应构建移植肝胆管病大鼠模型

目的 建立大鼠移植肝胆管病模型并评估其意义.方法 将大鼠按实验要求分为4组:(1)长时间(12 h)冷保存组(n=24):同基因系近交系大鼠♂Wistar→♂Wistar,所获供肝于4℃UW液保存12 h后行两袖套法大鼠原位肝移植(rat liver orthotopic transplantation,ROLT).术中利用内支架管直接对合供、受体肝总动脉及肝外胆管;(2)慢性排斥反应组(低剂量环孢素每天1 mg/kg,冷缺血时间1 h)(n=24):异基因近交系大鼠♂DA→♂Lewis.供肝于4℃UW液保存1h后同法行ROLT; (3)对照组(冷保存时间1 h)(n=24):同基因系近交系大鼠♂Wistar→♂Wistar,供肝于4℃UW液保存1h后同法行ROLT; (4)假手术组(n=24):♂Wistar大鼠,只进行开关腹手术.观察术后16周内各组大鼠并发症的发生情况和大鼠肝脏标本的病理学改变.结果 在长时间冷保存组和慢性排斥反应组,术后大鼠意识恢复慢,胆道及血管并发症发生率高,肝内汇管区胆管增生及炎细胞浸润明显.16周时可见肝小叶被增生胆管分隔,正常肝小叶结构消失,增生胆管上皮细胞萎缩、坏死、胞浆消失,仅见固缩的细胞核.胆管周围有较多的炎细胞浸润,肝内小动脉闭塞或消失.结论 通过供肝长时间冷保存或诱导慢性排斥反应可以建立稳定可靠的大鼠移植肝胆管病模型.该模型是研究肝移植术后移植肝胆管病的理想模型.     

射频消融治疗儿童扁桃体和腺样体肥大

等离子射频消融术具有创伤小、出血少、疼痛轻、手术时间短及术野清晰等优点，受到医师及患者的肯定，特别受到儿童患者及其家属的欢迎，目前已常规应用于我科儿童扁桃体及腺样体肥大的治疗。     

整合素αvβ6在移植肝胆管纤维化中的作用

目的 探讨整合素αvβ6在移植肝胆管纤维化中的作用,为探索新的移植物胆管病(graft cholangiopathy,GC)防治策略提供理论基础.方法 小鼠被随机分为假手术组、单纯移植组和药物干预组.假手术组不行肝移植,仅行开关腹;单纯移植组和药物干预组均采用非动脉化的小鼠原位肝移植模型,供肝冷保存时间均为12h.术后按2、4、6周3个时相点采集血液及组织标本.采用荧光实时定量PCR法测定整合素αvβ6及基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、转化生长因子-1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、转化生长因子-2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)和Ⅰ型前胶原(procollagen α1)等纤维化相关基因的mRNA表达,同时测定血清ALT、GGT、ALP以及肝组织羟脯氨酸(Hyp)的含量,并采用Masson三色染色法评估肝内胆管的纤维化情况.计量资料多组均数间的比较采用双因素方差分析,两总体均值的比较采用t检验,相关性分析采用直线回归分析.结果 严重的冷保存再灌注损伤(cold preservation/reperfusion injury,CPRI)合并动脉血供障碍可以迅速地诱发移植肝胆管纤维化.在术后第4、6周,整合素αvβ6 mRNA表达分别上调至假手术组的13.2、32.5倍,肝组织Hyp含量较假手术组分别上升87.5％、124.4％.通过特异性抑制整合素αvβ6可以明显缓解移植肝胆管纤维化,同时在一定程度上改善肝功能.结论 缺血再灌注损伤是造成移植肝胆管纤维化的重要原因之一,整合素αvβ6在这一过程中可能扮演着关键性的角色,针对整合素αvβ6的干预策略可能为GC的治疗提供新的思路.     

局部皮瓣在修复外鼻小面积皮肤缺损中的应用

目的：探讨应用外鼻临近局部皮瓣修复外鼻小面积缺损的方法与临床疗效。方法：42例鼻小面积缺损（直径〈2cm）的患者分别应用外鼻局部皮瓣（鼻背瓣、鼻唇沟瓣和双叶瓣）修复。皮肤恶性肿瘤切除后缺损38例,皮肤其他良性病变4例,缺损直径1～2cm。鼻尖缺损7例采用鼻背旋转皮瓣一期修复;鼻侧部缺损30例采用鼻唇沟瓣修复,其中使用岛状鼻唇沟瓣一期修复7例,插补式皮瓣二期修复18例,滑行瓣修复5例;鼻侧上方缺损5例采用双叶瓣一期修复。结果：所有患者均修复成功,组织皮瓣全部成活。患者平均随访3个月～2年,肿瘤无复发。结论：外鼻局部皮瓣如鼻背瓣、鼻唇沟瓣和双叶瓣是修复鼻部小面积皮肤缺损的有效方法,疗效满意。     

大鼠供肝冷保存时间延长损伤移植肝肝细胞和肝窦内皮细胞

目的 探讨供肝冷保存时间与肝移植后肝细胞和肝窦内皮细胞（SEC）损伤的关系。方法 选取健康雄性SD大鼠作为供、受者，建立原位肝移植（OLT）模型。随机分为3组，冷保存1h组（H=48）：供肝获取后，置于4C的冷保存液中保存1h，再行OLT。冷保存12h组（n=48）：供肝获取后，置于4℃的UW液中保存12h，再行OLT。对照组（H=6）：大鼠只打开腹腔，不进行移植。前2组分别于术后1、6、12、24、48、72、96和168h采取血液及组织标本，对照组仅在开腹时取血液及组织标本，检测各组、各时点血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）及透明质酸（HA）的水平；观察移植肝的病理形态学变化，透射电镜观察其超微结构改变；原位末端脱氧核糖核酸转移酶标记法（TUNEL）检测移植肝细胞的凋亡情况；观察术后168h时的大鼠存活率。结果 冷保存1h和冷保存12h组肝移植后各时点血清ALT、AST及HA均较对照组明显升高（P〈0．05），并且冷保存12h组又明显高于冷保存1h组（P〈0．05）。冷保存12h组术后24h移植肝组织出现片状坏死，而冷保存1h组病理学改变不明显。冷保存12h组肝窦内皮细胞凋亡指数（AI）明显高于冷保存1h组（F=63．58，P〈0．01），两组大鼠移植肝组织均于术后6h出现凋亡高峰，且肝窦内皮细胞的凋亡指数明显高于肝细胞。冷保存1h组和冷保存12h组大鼠肝移植后168h时的存活率分别为100％和50％，两组比较，差异有统计学意义（F=6．39，P〈0．05）。结论 肝移植后肝细胞和肝窦内皮细胞的损伤程度与冷保存时间密切相关。肝窦内皮细胞对冷保存及再灌注损伤的敏感性高于肝细胞，其损伤方式以细胞凋亡为主。     

绿茶浸出液对水中有机污染物致DNA损伤的抑制作用

目的探讨绿茶浸出液能否抑制水中有机污染物对细胞DNA的损伤。方法 固相萃取水中有机物,用绿茶浸出液与有机提取物以不同方式处理(同时处理、绿茶预处理、绿茶后处理)大鼠肝细胞后,采用单细胞凝胶电泳实验检测细胞,观察DNA迁移长度及拖尾细胞百分率,并检测培养液中丙二醛含量。结果同时处理组和绿茶预处理组的结果显示绿茶浸出液浓度在0.5、5、50μg/ml时可缩短DNA迁移长度,与水样对照组比较,差异有非常显著意义(P<0.01),拖尾细胞百分率和培养液中丙二醛含量的变化与此一致;后处理组细胞损伤明显加重,分水样对照组比较,差异有显蓍性(P<0.01)。结论绿茶浸出液对水中有机提取物致肝细胞DNA的损伤有保护作用,且在一定的浓度范围内呈剂量一反应关系。机制可能是抑制水中有机提取物对细胞的氧化损伤。