受强力霉素调控的永生化骨骺干细胞株的建立

目的:建立受强力霉素调控高表达外源基因的真核表达体系-永生化骨骺干细胞株,为调控甲状旁腺相关肽的不同片断在骨骺干细胞中的表达打下基础。方法:实验于2006-09/2007-03在同济医学院矫形外科实验室完成。①实验材料:SD大鼠的乳鼠由华中科技大学同济医学院动物实验中心提供,雄鼠4只,雌鼠6只。②实验方法:取SD大鼠的乳鼠10只,显微镜下选取LaCroix环处的软骨及软骨前体细胞(骨骺干细胞),采用磁性细胞分选的方法,分离出原代骨骺干细胞,并用PCMVSV40质粒将其永生化。用脂质体介导法将pTet-on质粒转染已永生化的骨骺干细胞,通过G418筛选并经有限稀释法进行单克隆化,得到稳定转染的抗性克隆并将其分别扩增培养。将pTRE2hyg-luc质粒瞬时转染扩增后的单克隆细胞,加入终浓度为1mg/L的强力霉素诱导剂培养,48h后逐一检测每个细胞株的荧光素酶表达活性,逐一筛选强力霉素调控高表达外源基因的永生化骨骺干细胞株。③实验评估:将挑选出的第23号克隆扩增培养,加入0.01,0.1,0.5,1,5mg/L强力霉素进行诱导培养,并设置3组对照,一组为空白对照(蒸馏水),一组为未转染Tet-on系统的骨骺干细胞(均加入1mg/L0.1mg/强力霉素诱导),另一组为转染后的骨骺干细胞不加入强力霉素诱导。观察强力霉素对骨骺干细胞的最优诱导质量浓度。结果:第23号克隆的细胞经诱导后荧光素酶的表达活性为85790,而非诱导状态下该细胞株的活性为437,诱导后的活性增加196.3倍。强力霉素质量浓度梯度实验提示,强力霉素的最优诱导质量浓度是1mg/L左右,质量浓度过高可导致细胞死亡,过低时诱导效率降低。结论:永生化骨骺干细胞株可用于真核调控高表达,为研究甲状旁腺相关肽的不同功能片断与骨骺干细胞的分化机制的关系打下了基础。     

大鼠PTHrP亚基因的克隆及其真核反应质粒的构建

目的:克隆甲状旁腺相关肽(PTHrP)亚基因PTHrP(1-36)、PTHrP(38-94)和PTHrP(107-139)并构建四环素反应性元件调控的反应质粒pTRE-PTHrP(1-36)、pTRE-PTHrP(38-94)和pTRE-PTHrP(107-139),为调控PTHrP亚克隆在软骨前体细胞中的表达打下基础. 方法:提取骨骺干细胞的总RNA,以RT-PCR方法获得带有酶切位点的PTHrP(1-36)、PTHrP(38-94)和PTHrP(107-139)基因片段,扩增的DNA片段分别与含潮霉素筛选标记的四环素反应性元件载体pTRE-2Hyg双酶切后连接,转化扩增后对重组质粒进行提取和酶切、测序鉴定. 结果:经酶切图谱分析和DNA序列测定证实目的基因已经插入重组质粒. 结论:成功克隆出PTHrP亚克隆基因PTHrP(1-36)、PTHrP(38-94)和PTHrP(107-139)并构建了反应质粒pTRE-PTHrP(1-36)、pTRE-PTHrP(38-94)和pTRE-PTHrP(107-139),为进一步精确调控PTHrP亚基因的表达奠定了基础.     

中医治疗女性不孕重在调经探源

女性不孕症是呈不断上升趋势的常见病，非意愿性生育困难达到8％～15％。近年，生殖生物学和生殖医学是生命科学领域发展迅猛的学科之一，现代科学对相关的理论和技术不断取得突破，新的临床治疗手段不断发展。同时，世界范围内对传统医学更加关注，具有完整理论体系的中医妇科同样需要整理和挖掘，以利于现代的继承和发展，继续造福于华夏儿女。     

不同浓度血清对大鼠骨骺干细胞向软骨细胞分化的诱导效果比较

背景：血清成分复杂，其中不仅存在促细胞生长因子，同时也存在细胞生长抑制因子，因此合适的血清浓度对于体外培养细胞的增殖和分化至关重要。目的：比较不同浓度的胎牛血清对大鼠骨骺干细胞向软骨细胞分化的影响。设计、时间及地点：细胞学体外观察，于2007—03／10在华中科技大学同济医学院附属同济医院矫形外科研究室完成。材料：纯系清洁级新生24h内的SD大鼠8只，用于制备骨骺干细胞。胎牛血清为Gibco公司产品。方法：免疫磁珠分离纯化FGFR-3阳性的骨骺干细胞，稳定传至第3代后，分别用含1．25％，2．5％，5％，10％胎牛血清的软骨诱导培养基进行干预，诱导14d。主要观察指标：BrdU．ELISA法检测细胞增殖活性。应用免疫荧光染色和RT—PCR法检测细胞Ⅱ型胶原的表达。结果：骨骺干细胞向软骨细胞诱导14d后，10％胎牛血清组细胞增殖活性显著高于1．25％，2．5％，5％胎牛血清组（P〈0．05）：10％胎牛血清组Ⅱ型胶原免疫荧光染色阳性程度及Ⅱ型胶原mRNA的表达均明显强于其他3组。结论：含10％胎牛血清的软骨诱导液更有利于骨骺干细胞向软骨细胞方向分化。     

SOX5对骨肉瘤细胞迁移和侵袭能力的影响

目的 观察Y染色体上的性别决定区相关高迁移率族盒蛋白-5(sex determining region Y-box protein 5,SOX5)对骨肉瘤细胞MG63迁移和侵袭能力的影响,探讨其在骨肉瘤发病和转移中的作用.方法 本研究为前瞻性研究,通过脂质体介导的基因转染技术将SOX5的三个不同的siRNA(siSOX5-1、siSOX5-2和siSOX5-3)瞬时转染骨肉瘤细胞MG63,转染后48 h检测SOX5的mRNA和蛋白表达,从中挑选出干扰效果最明显的siRNA.进而采用博伊登室实验方法分别对干扰前后的骨肉瘤细胞MG63进行体外细胞迁移和侵袭测定,采用免疫印迹(Western blot)检测迁移和侵袭相关蛋白[基质金属蛋白酶(matrix metallproteinase,MMP)-2、MMP-9、Twist1和Snail1)]的表达水平.结果 3条针对人的siRNA(siSOX5-1、siSOX5-2、siSOX5-3)均能够降低SOX5 mRNA及蛋白水平表达,其中siSOX5-3干扰效果最明显.siSOX5-3干扰组的迁移细胞数为(52±5)较对照组的(107±9)显著减少(P<0.05),siSOX5-3干扰组的侵袭细胞数为(27±4)较对照组的(71±2)显著减少(P<0.05).Western blot结果显示siSOX5-3干扰组的侵袭相关蛋白(MMP-2、MMP-9、Twist1和Snail1)的表达均较对照组显著降低(P<0.05).结论SOX5 RNA干扰能显著降低骨肉瘤细胞的迁移和侵袭能力,SOX5能促进骨肉瘤细胞的迁移和侵袭.     

前路齿状突螺钉固定与后路寰枢椎融合修复齿状突骨折的Meta分析

BACKGROUND: Many studies concern the comparison of anterior screw fixation and posterior cervical fusion for odontoid fractures, but the sample size of many studies has limitations. There is lack of objective evaluation on advantages and disadvantages of two surgical methods.     

辽宁省中等卫生学校办学基本条件浅析

为贯彻中共中央关于教育体制改革的决定,进一步办好中等卫生学校,促进中等医学教育的发展和提高,根据辽高教学(1986)51号文件的精神和省卫生厅辽卫函字(1986)第63号通知的要求,我们于1986年4～6月期间,对全省中等卫生学校的办学条件和办学情况进行一次调查。现将调查结果汇综如下,并进行初步分析。方法一、调查对象各地市主管卫生学校14所。其中,1950年建校的2所,1958年的6所,七十年代建校     

低分子量肝素对骨肉瘤细胞增殖和survivin表达的影响

[目的]研究低分子量肝素对骨肉瘤细胞增殖和survivin表达的影响。[方法]体外培养骨肉瘤细胞系MG-63,应用MTT法检测不同浓度低分子量肝素不同时间段对骨肉瘤细胞系MG-63生长的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化,免疫组化和RT-PCR法分析低分子量肝素对骨肉瘤细胞survivin基因表达的影响。[结果]低分子量肝素可抑制骨肉瘤细胞系MG-63生长,且随着低分子量肝素剂量的增加,MG-63细胞凋亡率明显增加。免疫组化和RT-PCR显示,骨肉瘤细胞系MG-63中survivin的表达较用药前明显下降。[结论]低分子量肝素对骨肉瘤细胞系MG-63有明显的抑制作用,其作用可能通过抑制抗凋亡基因survivin的表达,促进肿瘤细胞的凋亡而实现。     

COX-2抑制剂塞来昔布对大鼠脊髓损伤的保护作用

目的 观察选择性环氧化酶一2抑制剂塞来昔布（celecoxib）对大鼠脊髓损伤的保护作用。方法 48只SD大鼠，随机分为单纯损伤组及治疗组。采用改良Allen’s打击法制作脊髓损伤动物模型，分别在伤后12、24、72h测定脊髓标本的丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）含量。用苏木精-伊红染色观察损伤脊髓组织病理变化，原位末端标记法（TUNEL）标记凋亡细胞。同时采用Tarlov评分和斜板实验观察脊髓神经功能恢复情况，比较各组之间的差异。结果 治疗组较单纯损伤组神经功能明显改善（P〈0．05）。治疗组各时间点MDA含量较单纯损伤组明显降低（P〈0．05），SOD含量明显升高（P〈0．05），病理形态改变较轻且凋亡细胞少（P〈0．05）。结论 COX-2抑制剂塞来昔布可减少神经细胞凋亡，对继发性脊髓损伤起到保护作用。     

椎旁肌入路联合后正中入路手术治疗胸腰椎骨折合并脊髓损伤

目的通过对椎旁肌入路联合后正中入路与传统后正中入路手术的比较,评价经椎旁肌入路联合后正中入路在胸腰椎骨折合并脊髓损伤手术中的疗效。方法回顾性分析自2009-02—2012-02诊治的具有完整随访资料的胸腰椎骨折合并脊髓损伤52例,分为2组,后正中入路手术组24例,椎旁肌入路联合后正中入路手术组28例。结果 52例获得18~36(26±4.5)个月的随访,椎旁肌入路联合后正中入路组在手术时间、术中及术后出血量、术后1周VAS评分评定疼痛改善情况方面优于后正中入路组,差异有统计学意义(P0.05),而伤椎前后缘高度恢复、Cobb角矫正率以及神经功能恢复情况方面,差异无统计学意义(P0.05)。结论椎旁肌入路联合后正中入路手术治疗胸腰椎骨折合并脊髓损伤的患者具有与后正中入路手术具有相同的疗效,且具有手术时间短、创伤小、出血量少、术后患者恢复快等优点。