肝癌患者CIK细胞的诱导及对肝癌细胞毒作用的研究

观察肝癌患者PBMC在体外诱导成CIK细胞的能力及其对肝癌细胞的细胞毒作用。对比正常人组和肝癌患者组CIK细胞和LAK细胞之间的扩增差异。用流式细胞仪检测CIK细胞表面标志CD3、CD5 6 ,3 H TdR释放法检测CIK细胞、LAK细胞对肝癌细胞系SMMC 772 1等多种细胞系的细胞毒作用。结果显示 ,肝癌组和正常组的CIK细胞扩增倍数分别达 6 4 3倍和6 7 4倍 ,CD3+CD5 6 +细胞扩增倍数均达 6 0 0倍以上 ,在细胞扩增曲线及细胞表面标志上无差异 ,远大于LAK细胞 ;肝癌组CIK对肝癌细胞SMMC 772 1、Bel 74 0 2、Hep 3b杀伤能力均达 6 5 %～ 81% ,与正常组相同 ,且与对肠癌细胞系HIC 2 5 1杀伤能力无差异 ;对正常胎肝细胞系L 0 2的细胞毒作用 <5 % ;肝癌患者CIK对耐药的和未诱导耐药的K5 6 2细胞细胞毒作用均达到 70 %左右。肝癌患者CIK和正常人CIK一样对肝癌细胞有很强的细胞毒作用 ,对耐药肿瘤同样有效 ,对正常肝细胞无损伤 ,具有临床应用前景     

呼吸内科住院老年患者常见护理问题和对策分析

目的：分析呼吸内科住院老年患者常见的护理问题以及相应的对策。方法：选择65例在呼吸内科住院的60～80岁年龄段之间的老年患者，对他们采取问卷调查的方式，对护理的常见问题进行分析。结果：通过调查显示，呼吸内科住院老年患者常见的护理问题为心理护理、皮肤护理、饮食护理以及用药护理，分别占70．77％、35．38％、61．54％、56．92％。结论：通过对呼吸内科住院老年患者常见的护理问题的调查结果，从心理、饮食、用药、皮肤护理等方面采取相对应的策略，提高住院老年患者的满意度，帮助他们恢复健康。     

红细胞生成素对骨髓间充质干细胞干性的影响

有研究表明,当体外培养的骨髓间充质干细胞(MSC)形成集落时,其多向分化潜能具有逐渐丧失的倾向,且在体外扩增过程中MSC出现了自发分化的倾向,限制了其在临床上的应用.我们前期实验发现,在体外促红细胞生成素(EPO)能促进MSC的增殖和迁移能力.本实验拟用EPO作用于MSC,观察其未分化相关转录因子端粒酶逆转录酶(TERT)、POU5fl转录因子-4(OCT4)、性别决定基因相关转录因子-2(SOX2)和多潜能维持因子(Nanog)mRNA的表达情况,探讨EPO对MSC干性的影响.     

子宫颈扩张过程中白细胞介素8和黏附分子在子宫下段肌组织中的表达

妊娠晚期，宫颈成熟、子宫下段形成和宫颈扩张是分娩的必要条件，但其机制尚不明确。有学者认为，宫颈扩张类似于急性炎症反应。白细胞介素8（IL-8）和黏附分子[E选择素、血管细胞黏附分子（VCAM-1）、细胞间黏附分子1（ICAM-1）]等在炎症反应中有重要作用。我们通过观察IL-8及其mRNA、黏附分子在分娩期宫颈不同扩张程度下的子宫下段肌组织中的表达，探讨其在宫颈扩张过程中的作用。     

脐血清用于CIK诱导及细胞培养的观察

目的 :观察脐血清能否替代正常人AB血清用于人PBMC体外诱导CIK的细胞培养过程。方法 :①按照本室的方法体外分别用含正常人AB血清或脐血清的培养基诱导正常人 (脐血组和正常组各 10例 )CIK ,比较不同血清诱导CIK的扩增差异 ;②流式细胞仪检测CIK细胞表面标志CD3、CD56;③ 3H -TdR释放法检测CIK对肝癌细胞系SMMC -772 1、Bel-740 2、Hep -3b ,肠癌细胞系HIC -2 51,正常胎肝细胞系L -0 2 ,红白血病细胞系K562及经阿霉素诱导的耐药K562细胞毒作用。结果 :①不同血清诱导的CIK在细胞扩增曲线及细胞表面标志上无差异 ,细胞扩增倍数达 64.3倍和 67.4倍 (t =1.0 0 3 ,P >0 .0 5) ,CD3 + CD56+ 细胞扩增倍数达 80 0倍以上 ;②脐血组CIK对肝癌细胞SMMC -772 1、Bel-740 2、Hep -3b、HIC -2 51杀伤能力达 70 %～ 80 % ,与正常组相同 ,杀伤能力无差异 ;③对正常胎肝细胞系L -0 2的细胞毒作用 <5% ;④二组CIK对已诱导耐药的K 562细胞和未诱导耐药的K562细胞细胞毒作用均达到 70 %左右。结论 :脐血清组和正常人组CIK一样对肝癌细胞有很强的细胞毒作用 ,对正常肝细胞无损伤 ,并且对耐药肿瘤同样有效 ,具有临床应用前景     

干细胞相关基因在肝癌细胞系中的表达

目的 了解Oct4、Sox2、Nanog、SMO、β-Catenin、Wnt5b等干细胞相关基因在4株人肝癌细胞系SMMC-7721、Bel-7402、HepG2、MHCC-97和正常人肝脏细胞系L02中的表达情况,并比较不同细胞系中各基因量的差异和对全反式维甲酸(tRA)的反应.方法 逆转录聚合酶链反应测定4株人肝癌细胞系中Oct4、Sox2、Nanog、SMO、β-Catenin、Wnt5b mRNA的表达,实时荧光定量PCR比较不同细胞中各基因量的差异以及对tRA的反应.单因素方差分析比较各基因在不同细胞系中的表达差异.结果 干细胞相关基因Oct4、Sox2、Nanog、SMO、β-Catenin和Wnt5b在4株人肝癌细胞系SMMC-7721、Bel-7402、HepG2、MHCC-97和正常人肝脏细胞系L02中有不同程度的表达(P<0.05);人肝癌细胞系HepG2和正常人肝脏细胞系L02对tRA的反应也存在明显差异(P<0.05).结论 干细胞相关基因在人肝癌细胞系中不同程度的表达,不同肝癌细胞系中这些基因表达有一定的差异,可能与其生物学特性不同有关,人肝癌细胞系HepG2中Oct4和Sox2的表达调控不同于胚胎干细胞.在肝癌细胞中可能存在着Oct4对于Wnt/β-catenin信号转导通路的调节作用.     

多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统对肿瘤的筛查价值

目的：探讨多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统对于肿瘤诊断的临床应用价值.方法：使用多肿瘤标志物蛋白芯片检测仪检测46例健康体检者、63例已知的各期各种肿瘤患者和39例良性疾病患者的12种肿瘤标志物.结果：63例肿瘤患者中,51例结果异常,阳性率为80.95%,显著高于健康体检者与良性疾病患者（P＜0.05）.被检测46例健康体检者中,一项以上超出参考值范围的结果有9例,占19.57%.结论：多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统具有较高灵敏度和特异性,对肿瘤的早期诊断具有一定的价值.     

紫外线照射充氧自血回输对脑梗死患者Th1/Th2细胞因子的影响

目的　探讨紫外线照射充氧自血回输(UBIO)治疗对脑梗死患者Th1/ Th2细胞因子的影响。方法　采用EL ISA法检测脑梗死患者外周血单个核细胞(PBMC)培养上清液及血清中IFN-γ、IL - 4水平。结果　在PBMC培养上清液中,UBIO组治疗后IFN- γ水平为(177.2±11.9) ng/ L,与UBIO组治疗前的(191.1±19.9) ng/L、对照组(190 .8±2 5 .3) ng/ L和正常组的(198.5±16 .7) ng/ L相比较有显著性差异(P<0 .0 5 )。IL - 4水平UBIo组治疗前为(5 7.1±19.6 ) ng/ L、治疗后(5 4 .9±18.8) ng/ L 及对照组(5 9.4±2 1.4 ) ng/ L 均低于正常组(82 .8±30 .7) ng/ L (P<0 .0 5 )。血清中IL - 4水平UBIO组治疗后为(4.86±2 .31) ng/ L ,高于正常组(3.32±2 .0 9) ng/ L (P<0 .0 5 )。其余各组间无显著性差异(P>0 .0 5 )。结论　脑梗死患者Th1 / Th2 平衡倾向于Th1 ,UBIo治疗可下调Th1 细胞活性,使Th1 / Th2 趋于平衡。     

RNA干扰Oct4的表达对肝癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨干细胞相关基因Oct4与Wnt/β-catenin在人肝癌组织及肝癌细胞系中的相互作用.方法 PCR法检测Oct4、Wnt/β-catenin及其他相关基因在肝癌组织、癌旁组织及正常肝组织的表达差异.使用SiRNA-Oct4沉默人肝癌HepG2细胞Oct4的表达,实时荧光定量PCR法检测Wnt/β-catenin基因表达.检测RNAi后细胞迁移以及克隆形成能力.结果 肝癌患者的上述组织中,Oct4和β-catenin在癌内表达最高,癌旁次之,正常肝最低.使用SiRNA-Oct4沉默人肝癌HepG2细胞Oct4后,Oct4表达明显下调,β-catenin、Wnt10b表现为与Oct4表达呈正相关,TCF3表达与Oct4呈负相关.RNAi后HepG2细胞的迁移能力、克隆形成能力均下降.结论 Oct4在肝癌组织内高表达而在正常肝细胞中的表达极低.RNAi后HepG2细胞的迁移能力、克隆形成能力均下降可能与Wnt/β-catenin通路功能减弱有关.

Abstract：

Objective To investigate the expression of Oct4 in liver cancer, and the interrelation of the Oct4 and Wnt/β-catenin genes in hepatocellular carcinoma( HCC) cell line HepG2. Methods RTPCR technique was used to detect the expression of Oct4 and β-Catenin in HCC specimens; RNAi was used to knock-down the expression of Oct4 in HepG2, and the change of Wnt/β-catenin related genes were detected by Real time-PCR. Results In HCC specimens, the expression of Oct4 and β-Catenin in tumor and cirrhotic liver tissues were stronger than normal liver tissues. In SiRNA Oct4 HepG2 cells, the expression of Oct4 was downregulated, and β-catenin as well as Wnt10b were in a positive correlation with Oct4, TCF3 was in negative correlation with Oct4. Clone formation and move ability of the HepG2 were downregulated. Conclusions The expression of Oct4 was higher in tumor tissues than in normal liver tissues. Silencing Oct4 by SiRNA-0ct4 in HepG2 resulted in decreased ability of clone formation and cell movement.