DNMT1和DNMT3b基因在人膀胱癌组织和细胞中的表达及意义

目的 探讨DNA甲基转移酶1(DNMT1)和DNA甲基转移酶3b(DNMT3b)在人膀胱癌组织和人膀胱癌细胞系BIU-87中的表达及意义.方法 用免疫组织化学法分别检测DNMT1和DNMT3b蛋白在24例膀胱癌组织和10例正常膀胱组织中的阳性表达率;用RT-PCR和Western blot分别检测DNMT1和DNMT3b基因在人膀胱癌细胞系BIU-87中mRNA表达水平和蛋白表达水平.结果 在24例膀胱癌组织中,DNMT1阳性表达率为(75.29±2.51)%,而在10例正常膀胱组织中的阳性表达率为(12.61±1.57)%,二者之间的差异具有显著性意义(P<0.05);DNMT3b在24例膀胱癌组织中的阳性表达率为(70.91±2.86)%,在10例正常膀胱组织中的阳性表达率仅为(10.16±1.22)%,二者差异亦具有显著性意义(P<0.05);在人膀胱癌细胞系BIU-87中,通过RT-PCR和Western blot均检测到DNMT1和DNMT3b基因mRNA和蛋白的表达.结论 在膀胱癌组织中,DNMT1和DNMT3b蛋白的表达较正常膀胱组织明显增加,说明DNMT1和DNMT3b的高表达可能与膀胱癌的发生发展有关;DNMT1和DNMT3b在人膀胱癌细胞系BIU-87中存在表达.     

缺氧对Müller细胞水通道蛋白4及血管内皮生长因子的影响

目的:观察缺氧条件下,体外培养的人视网膜Müller细胞上水通道蛋白4(AQP4)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况。方法:酶消化法培养人视网膜Müller细胞,免疫荧光和透射电镜进行细胞鉴定,CoCl2诱导细胞缺氧,RT-PCR测定视网膜Müller细胞AQP4和VEGF基因的表达。结果:免疫荧光显示95%以上细胞谷氨酰胺合成酶、神经胶质纤维酸性蛋白、α-平滑肌肌动蛋白、中间丝波形蛋白呈阳性。Müller细胞AQP4 mRNA和VEGFmRNA的表达在缺氧条件下均升高,VEGF更明显,且呈部分浓度和时间相关性。缺氧12 h时VEGF mRNA表达达高峰,24 h时AQP4 mRNA达高峰。结论:AQP4和VEGF均与缺氧时的细胞水肿有关,二者关系密切,VEGF的作用较早且强。     

肝癌生物治疗研究进展

肝癌手术治疗是最主要的治疗方法 ,但生物治疗也取得了重要进展。本文就以下四个方面来展现肝癌的生物治疗的进展。1　过继细胞免疫治疗包括ＬＡＫ (ｌｙｍｐｈｏｋｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄｋｉｌｌｅｒ)、ＴＩＬ(ｔｕｍｏｒ ｉｎｆｉｌ ｔｒａｔｅｄｌｍｙｐｈｏｃｙｔｅ)、ＣＤ3ＡＫ(ＣＤ3Ａｂａｃｔｉｖａｔｅｄｋｉｌｌｅｒ)及新近采用的其他方法体外活化淋巴细胞 ,再输给肿瘤患者以治疗肿瘤的方法。继ＬＡＫ、ＴＩＬ之后 ,ＣＤ3ＡＫ在国内外已被广泛地用于肿瘤治疗的研究中。ＣＤ3ＡＫ的扩增率较ＬＡＫ高 ,对ＩＬ 2的需要量少 ,且较ＴＩ…     

RNAi及其在抗肿瘤中的应用

RNA干扰(RNAi)作用是生物界普遍存在的一种进化上高度保守的现象，是一种研究基因功能的新方法。肿瘤是多基因疾病，RNAi为肿瘤的基因治疗提供新的思路，通过RNAi抑制癌基因的表达可能成为一种新的癌症基因治疗策略。现综述RNAi的作用机制、特点以及在抗肿瘤中应用的研究展望。     

银染检测端粒酶活性方法的建立

目的应用银染TRAPEZE技术对消化系肿瘤的端粒酶活性进行初步研究,以探讨端粒酶活性与肿瘤的关系,建立一个低污染的端粒DNA显色技术.方法采用TRAPEZE-银染方法检测73例消化道恶性肿瘤组织及17例良性病变组织端粒酶活性.结果采用χ2检验进行统计学处理.结果61/73例消化道恶性肿瘤,对照组2/17例检出端粒酶活性;其中食道癌15/17例,肠癌6/9例,胃癌20/25例,肝癌20/22例检出端粒酶活性;高分化癌13/17例,中分化癌28/31例,低分化癌20/25例检出端粒酶活性.χ2检验消化道恶性肿瘤及对照组端粒酶活性检出率有显著性差异(P＜0.001);不同病理组织间及不同分化程度的肿瘤组织间端粒酶活性检出率无显著性差异(P＞0.05).结论端粒酶活性是消化道恶性肿瘤的一个重要标志;端粒酶活性在恶性肿瘤的表达无显著的组织特异性,可作为一广谱的肿瘤标志物;端粒酶活性与细胞分化程度无明显关系;银染技术可以得到理想的端粒DNA图谱,可用于端粒酶活性的检测.     

c-myc在消化系统肿瘤的表达及其与端粒酶活性关系的研究

为了解c-myc在消化系统肿瘤的表达以及c-myc与端粒酶活性的关系，采用链酶抗生物素蛋白－碱性磷酸酶免疫组织化学技术对67例消化道肿瘤及15例消化道良性病变的c-myc蛋白表达进行研究，并采用方差分析及相关系数对其进行统计学处理，结果各组织标本均有不同程度的c-myc蛋白表达，肿瘤组与非肿瘤组c-myc双样本方差分析P＞0．05；不同组织间c-myc双样本方差分析P＜0．05，低分化癌与高分化癌及中分化癌统计结果分别为P＜0．05，P＜0．001，c-myc表达与端粒酶活性的相关系数＝0．31，端粒酶阳性与阴性组c-myc表达P＞0．05，但端粒酶阳性组c-myc表达平均积分高于阴性组，结果表明：（1）随着肿瘤分化程度的减低c-myc蛋白表达减弱；（2）c-myc蛋白表达可能为组织增生的标志并非肿瘤特异性标志物；（3）c-myc蛋白表达与端粒酶活性有一定的关系。     

NASBA和IS-NASBA的临床应用及研究进展

核酸序列依赖扩增(NASBA)是一种特异性等温扩增RNA的技术,是基于一个等温扩增酶系统,包括AMV逆转录酶(AMVRT)、RNaseH和T7RNA聚合酶。以RNA为模板,在AMV逆转录酶和引物Ⅰ的作用下合成cDNA,引物Ⅰ的5′端带有T7启动子序列,然后引物Ⅱ与cDNA链退火合成cDNA链的互补链,进而形成了含完整T7启动子序列的双链DNA。T7RNA聚合酶以此双链DNA为模扳,合成大量拷贝的RNA片段。原位NASBA(insituNASBA,ISNASBA)是结合原位杂交技术而发展起来的,主要用于分子病理学、分子形态学领域的杂交技术。     

DNMT1、DNMT3bsiRNA重组质粒转染对人膀胱癌细胞DNMTs表达的影响及其生物学效应

目的：探讨DNMT1、DNMT3b基因在膀胱癌发生发展中的作用。方法：①将DNMT1、DNMT3bsiRNA重组质粒分别单独和共同转入人膀胱癌细胞系Nu87;②半定量RT—PCR和WesternBlot分别检测DNMT1和DNMT3b基因mRNA和蛋白水平的变化;③用MTT法观察各组细胞生长曲线,流式细胞术观察细胞生长周期及凋亡率的变化。结果：单独和共同转染DNMT1（或DNMT3b）mRNA、蛋白表达量明显下降,能影响BIU一87的生长曲线,使细胞增殖减慢,并使细胞周期阻滞于G1期,明显提高细胞调亡率;转染空质粒和单独转染DNMT3bsiRNA重组质粒对BIU-87细胞的生长和增殖无明显影响。结论：联合转染DNMT1、DNMT3bsiRNA重组质粒,可同时下调DNMT1和DNMT3b在BIU87细胞中的表达,并能在体外抑制BIU-87细胞生长,促进细胞凋亡发生,其效果优于单独转染的重组质粒。单独转染DNMT3bsiRNA重组质粒对BIU-87细胞的生长和增殖无明显影响。     

呼吸内科住院老年患者常见护理问题和对策分析

目的：分析呼吸内科住院老年患者常见的护理问题以及相应的对策。方法：选择65例在呼吸内科住院的60～80岁年龄段之间的老年患者,对他们采取问卷调查的方式,对护理的常见问题进行分析。结果：通过调查显示,呼吸内科住院老年患者常见的护理问题为心理护理、皮肤护理、饮食护理以及用药护理,分别占70．77％、35．38％、61．54％、56．92％。结论：通过对呼吸内科住院老年患者常见的护理问题的调查结果,从心理、饮食、用药、皮肤护理等方面采取相对应的策略,提高住院老年患者的满意度,帮助他们恢复健康。