Oct4及Wnt/β-Catenin在肝癌中的表达及相互作用

目的 探讨干细胞相关基因Oct4与Wnt/β-Catenin信号转导通路在人肝癌组织及肝癌细胞系中的表达及相互作用.方法 选取肝癌组织、癌旁组织及正常肝组织,采用免疫组化SP法检测其Oct4的表达;RT-PCR法及实时荧光定量PCR检测Oct4、Wnt5b、β-Catenin的mRNA表达.SiRNA-Oct4 沉默人肝癌HepG2细胞Oct4的表达后,以实时荧光定量PCR检测Oct4、Sox2、Nanog、β-Catenin等干细胞相关基因的表达变化.结果 Oct4在肝癌组织和癌旁组织中均有表达,正常肝脏组织几乎未发现明显的Oct4表达;实时荧光定量PCR发现Oct4和β-Catenin在癌组织内表达最高,癌旁次之,正常肝最低,而Wnt5b却相反.使用SiRNA-Oct4 沉默人肝癌HepG2细胞Oct4后,Oct4表达明显下调,β-Catenin、Sox2、Nanog表达亦下调,与Oct4呈正相关关系,而Wnt5b表达却上调,与Oct4呈负相关关系.结论 Oct4在肝癌组织中高表达,且为肝癌发生过程的早期事件;Oct4及Wnt/β-Catenin在肝癌中存在一定的相互作用.     

肿瘤疫苗对小鼠肝癌作用的研究

目的 :通过动物实验评价肿瘤疫苗对肝癌的防治作用 ,为临床应用提供实验依据。方法 :用小鼠肝癌细胞系MM45T .Li经过化学修饰制成肿瘤疫苗免疫小鼠 ,然后再用该细胞系接种于小鼠腋下。分别观察免疫鼠及未免疫小鼠的肿瘤生长情况 ,进行病理学检查 ;并用3H -TdR释放法检测小鼠脾细胞对MM45T .Li细胞的杀伤能力差异。结果 :①经肿瘤疫苗免疫的小鼠的肿瘤生长速度明显低于未免疫小鼠 ;②病理学检查发现免疫鼠肿瘤组织内大量淋巴细胞浸润 ,未免疫鼠内罕见淋巴细胞浸润 ;③3H -TdR释放实验显示免疫鼠脾细胞对MM45T .Li细胞的杀伤能力明显高于未免疫鼠。结论 :按我们现行方法制备的肿瘤疫苗能激活小鼠抗肝癌的免疫反应 ,抑制肝癌的生长 ,但完全保护作用尚不明确     

3963例孕妇血清IgG抗A(B)调查分析

新生儿溶血病(HDN)中96％的病例是由母婴ABO血型不合致使母体血液中IgG抗A(B)效价增高引起，严重时可导致高胆红素血症和胆红素脑病。笔者对本院2000年1月以来检测的3963名孕妇IgG抗A(B)资料进行统计分析，报道如下。     

CD_3AK的制备及杀瘤作用观察

目的：观察CD_3AK抗CD3单克隆抗体）的活化及对肿瘤细胞的杀伤活性。方法：以不同的肿瘤细胞为靶细胞,以人外周血淋巴细胞为效应细胞,在体外用不同浓度的抗CD3单克隆抗体和／或IL-2进行激活,用MTT法观察细胞毒杀伤作用。结果：CD3AK的扩增率较LAK高一个数量级,且对不同的肿瘤细胞均有杀伤作用。其18h杀伤均大于4h。结论：由于CD3AK较LAK对IL-2的需要量少,扩增率高,而比LAK更有临床应用发展前景。     

c-myc在消化系统肿瘤的表达及其与端粒酶活性关系的研究

为了解c-myc在消化系统肿瘤的表达以及c-myc与端粒酶活性的关系，采用链酶抗生物素蛋白－碱性磷酸酶免疫组织化学技术对67例消化道肿瘤及15例消化道良性病变的c-myc蛋白表达进行研究，并采用方差分析及相关系数对其进行统计学处理，结果各组织标本均有不同程度的c-myc蛋白表达，肿瘤组与非肿瘤组c-myc双样本方差分析P＞0．05；不同组织间c-myc双样本方差分析P＜0．05，低分化癌与高分化癌及中分化癌统计结果分别为P＜0．05，P＜0．001，c-myc表达与端粒酶活性的相关系数＝0．31，端粒酶阳性与阴性组c-myc表达P＞0．05，但端粒酶阳性组c-myc表达平均积分高于阴性组，结果表明：（1）随着肿瘤分化程度的减低c-myc蛋白表达减弱；（2）c-myc蛋白表达可能为组织增生的标志并非肿瘤特异性标志物；（3）c-myc蛋白表达与端粒酶活性有一定的关系。     

CIK细胞的诱导及其对肝癌细胞毒作用的体外研究

目的体外诱导细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK),并研究其生物学活性。方法从外周血和脐血分离单个核细胞(PBMC),经过细胞因子诱导、培养并扩增CIK细胞,以LAK作比较,流式细胞仪检测CIK细胞表面标志CD3、CD56。3H-TdR释放法检测CIK的增殖能力,MTT法检测对肝癌细胞系SMMC-7721、Bel-7402,正常胎肝细胞L-02的杀伤活性。结果CIK细胞第二周进入快速增殖期,到第31d扩增倍数超过60倍,CD3+CD56+细胞扩增倍数达800倍以上;CIK对肝癌细胞的杀伤能力明显优于LAK细胞(65%～81%);对正常胎肝细胞的细胞毒作用(<5%)。结论CIK细胞是一种具有很强杀瘤活性的免疫活性细胞,具有临床应用前景。     

肺肿瘤患者围手术期CD28及T细胞亚群检测的临床意义

目的:检测肺肿瘤患者手术前后外周血CD28和T淋巴细胞亚群的表达变化并探讨其意义。方法:采用流式细胞术检测63例肺肿瘤患者手术前后外周血CD28及T淋巴细胞亚群的表达,并与健康对照组及肺良性肿瘤组作比较。结果:肺肿瘤组术前外周血中CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、CD8+CD28+水平明显低于健康对照组和肺良性肿瘤组,而CD8+水平明显升高。肺肿瘤组CD8+表达水平随着临床分期的进展而有显著升高,CD3+、CD4+、CD4+/CD8+和CD8+CD28+水平随着临床分期的进展而有显著降低。不同病理分型的肺肿瘤患者之间外周血CD28及T细胞亚群水平无明显差异。肺肿瘤患者术后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+和CD8+CD28+表达显著升高;CD8+的表达明显降低,但仍未恢复至健康水平。结论:肺肿瘤患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+和CD8+CD28+表达水平低下,从而影响B7-CD28共刺激通路,使T细胞不能有效的清除肿瘤,提示肺肿瘤患者机体免疫功能低下,施行手术切除肿瘤有助于改善患者的细胞免疫功能。     

人脐带血间充质干细胞体外诱导分化为心肌细胞的实验研究

目的:研究人脐带血间充质干细胞体外诱导分化为心肌细胞的可行性。方法:由人脐静脉获得间充质干细胞,纯化培养后用不同浓度的5-氮杂胞苷(5-azacytidine)诱导,透射电镜、免疫组化及RT-PCR鉴定诱导后细胞。结果:经5-氮杂胞苷诱导后的脐带血间充质干细胞在透射电镜下观察到细胞内有明显的肌丝,横纹样结构形成,核呈卵圆形,位于细胞中央位置,胞质中可见富集的糖原颗粒及线粒体结构。免疫组化可见肌钙蛋白Ⅰ染色阳性。RT-PCR方法显示能表达缝隙连接膜通道蛋白Connexin-43基因。结论:人脐带血间充质干细胞可在体外经5-氮杂胞苷诱导分化为具有典型结构的心肌细胞。     

红细胞生成素对骨髓间充质干细胞干性的影响

有研究表明,当体外培养的骨髓间充质干细胞(MSC)形成集落时,其多向分化潜能具有逐渐丧失的倾向,且在体外扩增过程中MSC出现了自发分化的倾向,限制了其在临床上的应用.我们前期实验发现,在体外促红细胞生成素(EPO)能促进MSC的增殖和迁移能力.本实验拟用EPO作用于MSC,观察其未分化相关转录因子端粒酶逆转录酶(TERT)、POU5fl转录因子-4(OCT4)、性别决定基因相关转录因子-2(SOX2)和多潜能维持因子(Nanog)mRNA的表达情况,探讨EPO对MSC干性的影响.     

红细胞生成素对骨髓间充质干细胞干性的影响

有研究表明,当体外培养的骨髓间充质干细胞(MSC)形成集落时,其多向分化潜能具有逐渐丧失的倾向,且在体外扩增过程中MSC出现了自发分化的倾向,限制了其在临床上的应用.我们前期实验发现,在体外促红细胞生成素(EPO)能促进MSC的增殖和迁移能力.本实验拟用EPO作用于MSC,观察其未分化相关转录因子端粒酶逆转录酶(TERT)、POU5fl转录因子-4(OCT4)、性别决定基因相关转录因子-2(SOX2)和多潜能维持因子(Nanog)mRNA的表达情况,探讨EPO对MSC干性的影响.