猪naive⁃like胚胎干细胞向神经细胞体外诱导分化

目的：明确不同时期胎猪的肾脏发育情况,并研究胎猪肾脏发育相关信号分子的表达。方法：收集不同时期（妊娠21.5、27.5、35.0、45.0、75.0及110.0 d）胎猪肾脏组织,应用HE法观察不同时期胎猪肾脏的组织结构。通过实时荧光定量PCR和Western blot分别检测肾脏发育相关信号分子（Pax2、Pax8、Six2、Six1、Sall1和Bmp4）的mRNA和蛋白表达水平,并通过免疫组织化学检测Pax2在不同时期胎猪肾脏的表达定位情况。结果：27.5 d胎猪的后肾已经开始发育;35 d早期肾小体已经出现,肾小管也开始发育;45 d观察到近皮质不成熟的肾小体和近髓质成熟的肾小体;75 d肾单位数目显著增加,观察到肾椎体、肾乳头和肾盂;110 d肾脏基本发育成熟,皮髓质分界明显,仍有新的肾单位产生。Pax2、Pax8、Six2、Six1、Sall1和Bmp4在胎猪75 d的肾脏中mRNA和蛋白表达量高于35 d。Pax2广泛表达于输尿管芽、后肾间充质、帽状间充质、肾小囊体、逗号形体、S形体以及肾小管,并在后肾发育过程中持续表达。结论：27.5 d时胎猪后肾已经开始发育,110 d基本发育成熟。Pax2、Pax8、Six2、Six1、Sall1和Bmp4等信号分子在胎猪肾脏发育过程中均有不同程度表达,其中Pax2可能是胎猪肾脏发育的关键调控分子。     

西立伐他汀抑制单核细胞基质金属蛋白酶及组织因子的表达及活性

目的观察西立伐他汀对单核/巨噬细胞系的THP-1细胞的基质金属蛋白酶-2(matrixmetalloproteinase-2,MMP-2)及组织因子(tissuefactor,TF)的表达及活性的作用.方法培养的THP-1细胞中加入不同浓度的西立伐他汀,用RT-PCR法检测MMP-2及TFmRNA,酶原电泳法测定培养基中MMP-2活性,ELISA法测定细胞内TF抗原.结果随着西立伐他汀浓度增加,THP-1细胞的MMP-2及TFmRNA水平逐渐降低.在1μmol/L时MMP-2mRNA从93.5±10.2降至58.9±8.2,P＜0.05.对培养基中MMP-2活性的抑制作用呈浓度依赖性.0.1、1.0μmo1/L时的光密度值分别从667.7±41.1降至498.8±7.4、469.0±21.4(P＜0.05).THP-1细胞的TFmRNA水平在浓度为0.1、1.0μmol/L时,分别降低36%及67%(80.0±15.7及41.3±16.4vs125.1±21.0,P＜0.05).细胞内TF抗原含量在1μmol/L时减少50%(0.22±0.04vs0.43±0.06,P＜0.05).结论西立伐他汀能抑制THP-1细胞表达MMP-2及TF,降低MMP-2及TF活性.     

血小板GP Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂治疗急性冠脉综合征的研究进展

血小板GP Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂治疗急性冠脉综合征的研究已有数年.本文就血小板GP Ⅱb/Ⅲa受体的结构、功能及其拮抗剂治疗急性冠脉综合征的临床疗效作一综述.     

建立稳定表达猪LIF蛋白的小鼠STO细胞系

目的:在STO小鼠成纤维细胞中表达猪白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF),并尝试使用其作为饲养层培养大鼠诱导多能性干细胞(iPS细胞)?方法:通过脂质体转染的技术,将已构建的猪LIF基因真核表达载体pCAG-pLIF转染至小鼠STO细胞中,获得能够稳定表达猪LIF的转基因STO细胞(STO-pLIF细胞)?通过RT-PCR?qPCR?Western blot等方法检测STO-pLIF细胞中猪LIF基因的表达量,选择高效表达猪LIF的STO-pLIF细胞作为饲养层,培养大鼠iPS细胞?通过生长曲线检测?碱性磷酸酶染色?干细胞多能因子的RT-PCR和免疫荧光染色等方法,检验STO-pLIF细胞饲养层在大鼠iPS细胞培养方面的功能?结果:STO-pLIF细胞中LIF RNA和蛋白表达水平均上调(P < 0.05),而该细胞系作为饲养层所培养的大鼠iPS细胞在形态?多能性因子表达方面更接近于传统培养的大鼠iPS细胞,与无外源添加LIF所培养的大鼠iPS存在差异(P < 0.05)?结论:成功获得了稳定表达猪LIF基因的STO-pLIF细胞,并证明该细胞作为饲养层在大鼠iPS细胞培养中具有一定优势?     

CRISPR/Cas9介导的猪Six1和Six4基因敲除细胞系的建立

目的：利用干细胞囊胚互补技术再生同种或异种动物器官已得到验证,其重要的前提是需要构建出相应的器官缺失动物模型。本文拟通过CRISPR/Cas9基因编辑技术建立猪Six1单基因和Six1/Six4双基因敲除猪细胞系,为构建肾脏发育缺陷和缺失猪模型奠定重要的研究基础。方法：选取猪Six1基因和Six4基因第一外显子为敲除靶点,分别设计并合成单导向RNA（single guide RNA,sgRNA）,将其插入含有Cas9骨架的PX330质粒,分别构建Six1基因和Six4基因敲除打靶载体PX330?sgRNA1和PX330?sgRNA4;用T7EN1酶验证打靶载体敲除效率后,将高效打靶载体与含G418抗性的质粒（pCMV?tdTomato）共转染原代猪胎儿成纤维细胞（porcine fetal fibroblasts,PFFs）中,并通过药物筛选获得单克隆细胞群落,随后对单克隆细胞进行基因型鉴定。结果：分别成功构建Six1和Six4基因的Cas9/sgRNA表达载体。转染Six1基因打靶载体经药物筛选后,利用PCR方法鉴定所获得的Six1基因敲除单克隆细胞系48个,其中Six1-/-细胞系21个。通过同样方法同时转染Six1基因和Six4基因打靶载体,经药物筛选后共获得44个单克隆细胞系,其中Six1-/- Six4-/-细胞系为13个。结论：通过CRISPR/Cas9基因编辑技术可高效获得Six1单基因敲除细胞系和Six1/Six4双基因敲除细胞系,为构建肾脏发育缺陷猪动物模型提供了基础,并有助于研究Six1和Six4基因在猪肾脏发育中的功能。     

当归补血汤对糖尿病大鼠肝脏、骨骼肌中PKC-ζ表达的影响

[目的]研究当归补血汤对糖尿病大鼠肝脏、骨骼肌中蛋白激酶C-ζ(PKC-ζ)表达的影响。[方法]选取雄性SD大鼠50只,随机分为空白对照组、当归补血汤对照组、2型糖尿病(T2DM)模型组、T2DM+当归补血汤组、2型糖尿病+吡格列酮组。采用链脲佐菌素(STZ)联合高脂高糖饲料建立大鼠糖尿病模型,造模成功后,药物干预5周,取血检测大鼠空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)水平。用免疫组织化学法检测各组大鼠肝脏、骨骼肌细胞中PKC-ζ表达。[结果]与空白对照组比,T2DM模型组FPG、FINS显著升高;与T2DM模型组相比,T2DM+当归补血汤组和T2DM+吡格列酮组FPG、FINS下降。通过免疫组化检测发现,与空白对照组比,T2DM模型组肝脏和骨骼肌中PKC-ζ的表达下降;T2DM+当归补血汤组和T2DM+吡格列酮组较T2DM组表达升高,且T2DM+当归补血汤组与T2DM+吡格列酮组组间无明显差异。[结论]当归补血汤能够改善胰岛素抵抗、降低血糖,这可能与其促进肝脏、骨骼肌中PKC-ζ的表达有关。     

西立伐他汀对血管内皮细胞一氧化氮合酶及细胞间黏附分子的作用

目的　观察西立伐他汀对内皮细胞一氧化氮合酶 (NOsythase ,eNOS)和细胞间黏附分子 1 (intercellularadhesionmolecule 1 ,ICAM 1 )基因的表达 ,NOS活力和黏附的THP 1细胞量的影响。方法　以氧化LDL抑制培养的ECV 3 0 4细胞表达eNOS ,加入不同浓度西立伐他汀后 ,用RT PCR法检测eNOSmRNA ,硝酸还原酶法测定培养基中NO量。以脂多糖 (LPS)及西立伐他汀加入ECV 3 0 4细胞后 ,用RT PCR法检测ICAM 1mRNA ,并测定黏附的THP 1细胞量。结果　随着西立伐他汀浓度增加 ,内皮细胞eNOSmRNA水平增加 ,0 0 1 ,0 1 ,1 0 μmol/L时分别增加 5 0 %,1 5 0 %,3 0 0 %,P均 <0 0 5。培养液中NO亦相应增加 ,0 0 1 ,0 1 ,1 0 μmol/L时分别增加 2 6 7%,92 3 %,2 3 0 %,P <0 0 5。西立伐他汀浓度为 0 1 ,1 0 μmol/L时 ,ICAM 1mRNA分别从 70 7± 1 0 4降至 5 6 2± 6 5 ,3 5 8± 4 2 ,P <0 0 5。黏附于ECV 3 0 4细胞的THP 1细胞在 1 0 μmol/L时被抑制 2 6 %,P <0 0 5。结论　西立伐他汀能诱导内皮细胞eNOS基因的表达及增加NOS活力 ;抑制内皮细胞表达ICAM 1mRNA及THP 1细胞黏附于内皮细胞     

谈如何做好科室护理管理工作

近年来,随着现代科学技术的飞速发展,护理学科已成为一门独立的学科。护理工作涉及面广、内容复杂而烦琐,为了适应     

护理工作应激与护士心理健康状况的研究

采用一般健康问卷（ＧＨＱ１２）和麦氏应激问卷（ＭＷＳＱ）对７４７名护士进行了调查。统计分析结果表明，护士人群的心境抑郁、心理紧张和焦虑失眠者发生率较高；心理状况不佳的检出率为１２３％。单因素统计可见，急诊科、儿科护士心理状况不佳检出率最高，分别为３０％和２５％（Ｐ＜０．００１）；三种工作应激因素（应付能力、工作满意感和职业应激源）确对心理健康状况有显著影响（Ｐ＜０．００１）。多因素Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析也进一步证明，上述工作应激和急诊科环境对心理状态不佳发生概率影响较大，复相关系数为０６７，并具有统计学意义。从而证明，护理工作应激因素与护士心理健康状况关系密切，进一步加强护士心理卫生工作，提高护士心理素质十分必要     

电致孔风池穴透药配合针刺治疗脑梗死30例临床观察

目的：观察电致孔风池穴透药配合针刺改善脑梗死患者椎动脉血流、肢体功能及生活活动情况。方法：选择缺血性脑梗死2周以后,3个月以内的患者60例,随机分为治疗组和对照组各30例。治疗组选取肩髃、曲池、合谷等常规穴位,普通针刺留针30 min后,使用电致孔透皮风池穴给正清风痛宁针治疗30 min;对照组同样选取常规穴位,普通针刺留针30 min后,使用中频透皮风池穴给正清风痛宁针治疗30 min。两组均2周为1个疗程,治疗1个疗程后评价患者椎动脉血流及肢体功能改善情况。结果：患者椎动脉血流、肢体功能组内比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,两组治疗后均优于治疗前;组间比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,治疗组均优于对照组。结论：电致孔风池穴透药配合针灸可有效改善脑梗死患者椎动脉血流,促进患者肢体功能及生活活动的康复。