猪naive-like诱导性多能干细胞系的建立及红色荧光蛋白标记

目的：建立猪naive-like诱导性多能干(induced pluripotent stem,iPS)细胞系,并对其进行红色荧光标记,为通过示踪猪naive iPS细胞发育和分化的相关研究奠定基础。方法：首先利用核转染技术向巴马小型猪胎儿成纤维细胞(porcine embryonic fibroblast,PEF)中转入鼠源OCT4、SOX2、KLF4和c-MYC转录因子表达载体TetO-FUW-OSKM,并同时转入激活表达载体FUW-M2rtTA,采用白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)结合碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)的培养体系进行培养,通过在培养液中添加盐酸多西环素(doxycycline hyclate,DOX) 进行诱导,建立起猪iPS细胞系,并对细胞系的多能性进行鉴定。在此基础上,向iPS细胞系转入红色荧光蛋白表达载体,对其进行标记,并鉴定被红色荧光标记后的细胞是否仍然具有多能性。结果：所建立的iPS细胞系克隆呈三维立体生长,可以进行单细胞传代培养至30代以上,核型正常,碱性磷酸酶染色呈阳性,表达多种干细胞多能因子,利用LIF/STAT3信号通路维持其增殖,体外可分化形成表达三胚层相关基因的类胚体,为猪naive-like iPS细胞系。成功对所建立的iPS细胞系进行红色荧光标记,碱性磷酸酶染色和免疫荧光染色结果显示被红色荧光标记的iPS细胞的多能性依然存在。结论：成功建立了稳定表达红色荧光蛋白的猪naive-like iPS细胞系。     

低表达抑癌环状RNA在胃癌诊断及预后中作用的Meta分析 #br#

目的 通过Meta分析探讨低表达环状RNA（circRNA）对胃癌诊断及预后判断中的价值。方法 检索国外 主要医学数据库，包括 PubMed，Embase和 Web of science，搜索有关 circRNA与胃癌预后及诊断的相关研究，检索时 限均为建库至 2019年 6月。由 3名研究者独立筛选文献，提取相关数据并评价纳入研究的偏倚风险，采用 Stata 14.0 进行 Meta分析。结果 共有 20篇文献纳入研究，9篇文献进行预后 Meta分析，16篇文献进行诊断 Meta分析。结果 发现低表达抑癌circRNA与更差的临床病理特征相关，预后Meta分析结果显示高表达抑癌circRNA与较好的总生存 期（OS）相关（HR=0.37，95%CI：0.29~0.48），诊断 Meta分析结果显示汇总后的敏感度为 0.73（95%CI：0.66~0.79），特异 度为 0.77（95% CI：0.68~0.84），汇总受试者工作特征曲线（SROC）AUC为 0.81（95% CI：0.77~0.84）。结论 低表达抑 癌circRNA对胃癌患者预后判断及诊断均有一定价值，但仍需要更多高质量的临床研究进一步证实。     

当归补血汤对糖尿病大鼠肝脏、骨骼肌中PKC-ζ表达的影响

[目的]研究当归补血汤对糖尿病大鼠肝脏、骨骼肌中蛋白激酶C-ζ（PKC-ζ）表达的影响。[方法]选取雄性SD大鼠50只,随机分为空白对照组、当归补血汤对照组、2型糖尿病（T2DM）模型组、T2DM+当归补血汤组、2型糖尿病+吡格列酮组。采用链脲佐菌素（STZ）联合高脂高糖饲料建立大鼠糖尿病模型,造模成功后,药物干预5周,取血检测大鼠空腹血糖（FPG）、空腹胰岛素（FINS）水平。用免疫组织化学法检测各组大鼠肝脏、骨骼肌细胞中PKC-ζ表达。[结果]与空白对照组比,T2DM模型组FPG、FINS显著升高;与T2DM模型组相比,T2DM+当归补血汤组和T2DM+吡格列酮组FPG、FINS下降。通过免疫组化检测发现,与空白对照组比,T2DM模型组肝脏和骨骼肌中PKC-ζ的表达下降;T2DM+当归补血汤组和T2DM+吡格列酮组较T2DM组表达升高,且T2DM+当归补血汤组与T2DM+吡格列酮组组间无明显差异。[结论]当归补血汤能够改善胰岛素抵抗、降低血糖,这可能与其促进肝脏、骨骼肌中PKC-ζ的表达有关。     

miRNA⁃205过表达载体的构建及其对猪诱导性多能干细胞建系的作用

目的：构建miRNA?205过表达载体并研究miRNA?205对猪诱导多能干细胞系建立的影响。方法：对本实验室已建系的猪primed胚胎干细胞、猪内细胞团细胞及猪胎儿成纤维细胞三者之间进行miRNA表达谱的分析比较,利用PCR扩增miRNA?205前体序列,并将其克隆于基础表达载体pCAGDNA3?hFat1,构建过表达载体pCAG?miR205。使用脂质体转染技术将该载体转染到已转基因修饰的猪胎儿成纤维细胞（含有鼠源干细胞多能性转录因子Oct4、Sox2、Klf4和c?Myc）。利用干细胞培养液诱导培养建立猪诱导性多能干细胞系。通过实时荧光定量PCR检测转染前后细胞内miRNA?205的表达情况,比较分析miRNA?205对猪诱导性多能干细胞的建系效率的影响。结果：成功构建了pCAG?miR205过表达载体;相较于未转染细胞,转染该载体细胞的miRNA?205表达量显著升高（P＜0.01）;利用干细胞培养液诱导后培养转染组的诱导性多能干细胞克隆长出率高于未转染细胞组。结论：研究结果表明在细胞水平上过表达microRNA?205,可提高猪诱导性多能干细胞建系效率;已构建的miRNA?205过表达载体将有助于在后续研究中建立稳定表达miRNA?205的细胞系,为进一步深入研究miRNA?205在干细胞重编程和多能性维持中的作用机制打下基础。     

介绍一种新型多功能气垫褥

危重患者的骶尾，肩后和足跟等部位由于长期受压容易并发褥疮，如何预防褥疮成为护理工作中的一大难题。为此特设计新型多功能气垫褥，既可预防褥疮，又便于大小便的护理，同时还可为高热病人降温提供方便。     

胃癌前病变信号通路及相关中医药治疗的研究进展

中国肿瘤患者中,胃癌的发病率及病死率均较高。胃癌前病变（PLGC）是胃癌发展的关键阶段,及时诊断、干预PLGC,可降低胃癌发生发展风险。PLGC的治疗,西医目前以抗幽门螺杆菌（Hp）、补充维生素、叶酸、非甾体类药物为主,同时密切随访,其疗效尚有争议。中医药治疗PLGC独具特色,且已有许多研究证实其疗效可靠,但具体机制尚未完全明确,故综述PLGC的常见信号通路及中医药治疗机制的研究进展。     

用于异种移植的新型基因改造猪的培育

目的培育用于异种移植的新型基因改造猪,在α-Gal基因敲除以及膜辅蛋白CD46、血栓调节蛋白（TM）基因转入的基础上,进一步将Ⅱ类反式激活因子基因N端缺失显性负向（CⅡTA-DN）基因转入猪胎儿成纤维细胞,以抑制猪白细胞抗原（SLA）Ⅱ类分子的表达。方法设计合成博来霉素（Zeocin）抗性基因片段,并将其与含有CⅡTA-DN基因的pST205载体连接,构建置于人Tie2增强子和CMVB—actin启动子下游的pNMU105／CⅡTA-DN表达载体,将线性化的pNMU105通过脂质体转染法转入已经敲除了α-Gal并转入CD46、TM基因的猪胎儿成纤维细胞181B（DKO／CD46／TM）。Zeocin抗性筛选转染pNMU105质粒的181B细胞,PCR方法检测CⅡTA-DN基因在181B细胞中的转入,获得阳性单克隆并进行核移植,得到DKO／CD46／TM／CⅡTA-DN转基因猪。取仔猪的耳缘组织裂解后进行基因鉴定。结果成功设计Zeocin抗性基因片段并构建pNMU105／CⅡTA-DN表达载体,经过质粒转染和Zeocin抗性药物筛选获得多株阳性单克隆,顺利通过核移植得到转基因猪。仔猪耳缘组织经PCR鉴定,在592bp位置检测到预期条带,证明均为CⅡTA-DN转基因阳性。结论通过新型基因改造猪的培育,在抑制超急性排斥反应和补体反应、降低凝血和人CD4＋T细胞免疫反应的理论基础上进行了转基因模型猪的构建,为异种移植中更加有效地减少免疫损伤、提高移植器官的存活做出了新的尝试。     

加强医院成本核算,提高管理水平

医院作为医疗市场竞争的主体,要想在竞争中处于有利地位而不被淘汰,就必须改革现行医疗成本核算和经济管理方式,积极推行全成本核算,特别要实行质量成本核算和管理,这样才能提高医院的绩效和管理水平。     

肛肠外科疾病的护理体会

<正> 我科1989年7月～1990年2月收治67例肛肠疾病患者,现将护理体会报告如下:一般情况:男42例,女25例1年龄7～80岁;肛周脓肿28例,痔疮14例,直肠息肉12例,其它13例。1、心理护理:予以同情和理解,对肛肠病人要亲切、热情、体贴,使他们感到自己被理解和同情。保护病人自尊心。     

病房护理工作实行质量标准化管理的体会

病房护理是医院三级护理管理的重要单元,是为病人医疗服务的第一线。病房护理工作质量的优劣,直接影响医院的医疗水平。病房第一线的护理工作如何在医院的总体目标下,分清层次,理