大黄素诱导急性胰腺炎胰腺细胞凋亡机制的实验研究

目的从凋亡信号传导的角度探讨中药大黄素治疗大鼠急性胰腺炎的分子生物学机制.方法将44只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、非治疗组、大黄素组.以腹腔注射雨蛙肽的方法诱导大鼠急性胰腺炎模型,并于大黄素治疗后6、24、48、72、96小时处死大鼠.应用HE染色比较胰腺组织病理学改变,应用Tunel法检测胰腺细胞凋亡指数,应用RT-PCR技术检测治疗前后凋亡调控基因Bak 和Bax mRNA表达.结果大黄素干预治疗急性胰腺炎后96小时淀粉酶值显著低于未治疗组,胰腺细胞凋亡指数显著高于未治疗组,凋亡调控基因Bak mRNA 的表达与未治疗组之间无显著性差异,而Bax mRNA的表达显著高于未治疗组.结论大黄素治疗实验性急性胰腺炎的机制可能与干预凋亡调控基因有关,诱导凋亡调控基因Bax表达增强可能是干预凋亡信号传导的重要机制,而与Bak 基因表达无关.     

血清miR-146a／b实时荧光定量分析及其作为分子标志物的初步评价

目的：以特异性调节Toll样受体信号通路的miR-146a／b为检测靶标,建立血清miRNAs分子荧光定量检测方法,并对其作为血清炎症分子标志物的潜在价值进行初步评价。方法：采集正常体质量儿童血清20例（对照组）、超重儿童血清20例（超重组）、肥胖儿童血清20例（肥胖组）及健康成年人血清50例（健康成人组）,酚-氯仿法提取血清总RNAs,SYBRGreen实时荧光定量技术定量检测血清中miR-146a／b拷贝数,GraphpadPrism5．0软件进行统计分析并绘图。结果：对照组血清中miR-146a的拷贝数显著低于超重组（P=-0．0061）和肥胖组（P=-0．0262）,超重组和肥胖组之间差异无统计学意义（P=0．0656）。miR-146a表达量的受试者工作特征曲线下面积（AUC）分析显示：对照组vs超重组AUC=O．8475,P=-0．0002;对照组vs肥胖组AUC=0．6050,P=-0．2560;超重组vs肥胖组AUC=0．5475,P=0．6073。miR-146b与miR-146a呈不同表达趋势,超重组儿童血清miR-146b拷贝数显著高于对照组（P=-0．0090）和肥胖组儿童（P=0．0023）,肥胖组儿童血清中miR-146b的拷贝数均值虽略低于对照组,但差异无统计学意义（P=-0．1556）。miR-146b表达量的AUC分析显示：正常组vs超重组AUC=0．7425,P=O．0087;正常组vs肥胖组AUC=0．6325,P=0．1517;超重组vs肥胖组AUC=0．7825,P=0．0023。miR．146a／b拷贝数值变异系数（CV）大：对照组、超重组和肥胖组儿童血清中miR。146a拷贝数的cv值分别为80．94％、110．94％、175．88％;miR-146b拷贝数的cV值分别为164．11％、189．72％、152．00％。在健康成人血清中miR-146a／b呈现相近表达模式,miR-146a和miR-146b的cV值分别是37．86％、74．82％。结论：miR-146a在对照组、超重组和肥胖组的表达量变化显示其与儿童肥胖具有-定相关性,可以从整体水平说明miR-146a与体内炎症水平呈正相关关系,但是由于其在血清中拷贝数值变异较大且各组问无明确分界,不能确定其参考值范围。因此,血清miR-146a／b拷贝数差异不足以用于临床个体化诊断,血清miR-146a／b作为炎症相关分子标志物的价值尚需进一步探讨。     

血浆D-二聚体及纤维蛋白（原）降解产物检测的临床意义

目的 探讨血浆D-二聚体和纤维蛋白（原）降解产物在临床不同血栓性疾病的诊断、疗效观察和预后判断中的应用价值.方法 选取2013年6-11月兰州大学第一医院住院病人257例作为疾病组,健康对照组34例,用酶联免疫荧光法、胶乳免疫比浊法对不同疾病患者的血浆D-二聚体和纤维蛋白（原）降解产物进行检测.结果 过敏性紫癜、脑梗死、肝硬化、原发性肝癌、急性粒细胞白血病、肺栓塞、静脉血栓形成等疾病患者血浆D-二聚体和纤维蛋白（原）降解产物增高,与健康对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 D-二聚体、纤维蛋白（原）降解产物检测有助于临床对患者高凝和纤溶状态的判断与治疗.     

小病初起不要滥用药

小病初起不要滥用药小病初起不要频繁吃药打针。一向身体健康者，小病初起一般情况不必过急用药。中医认为：病邪初犯人体时，正气必与邪气抗争。正气强于邪气，病势逐渐减轻。西医认为：对于疾病初起发烧，体温只要不过３８度，不必立即服退烧药。因为体温发烧不过高时，...     

S腺苷蛋氨酸对肝癌细胞中GADD45β基因的表达诱导及其机制研究

目的 初步明确肝癌细胞中特异性表达缺失的GADD45β基因近端启动子活性调控中心,并探讨S腺苷蛋氨酸对肝癌细胞HepG2中GADD45β表达的影响及可能机制.方法 以30～50个碱基的间隔,于体外人工合成GADD45β近端启动子序列(-618～-520),分别插入pGL3 basic荧光素表达质粒的荧光基因上游,以电穿孔法转染HepG2,根据启动子活性强度结合TRANSFAC数据库,分析可能存在的转录调节因子结合位点;实时荧光定量PCR比较S腺苷蛋氨酸作用前后HepG2细胞GADD45β表达,并在此基础上进一步比较S腺苷蛋氨酸对GADD45β启动子活性的诱导作用,探讨其可能作用机制,并为GADD45β近端启动子研究提供功能性证据.结果 GADD45β近端启动子中含有3个NF-kB转录调节因子与启动子结合位点(-602/-593、-581/-572、-537/-528);S腺苷蛋氨酸能明显诱导HepG2中GADD45β的表达,并呈现出剂量一效应的正相关关系,同时其能相应明显诱导NF-kB的启动子活性.结论 S腺苷蛋氨酸能明显诱导肝癌细胞中特异性缺失的GADD45β基因表达,增强转录调节因子NF-kB的活性水平是其可能的作用机制,该研究为S腺苷蛋氨酸的肝脏保护作用提供了新的实验依据.     

骨髓穿刺活检——一些基本病变观察的探讨

根据1,000例骨髓穿刺活检及近二年来采用H.E.、姬姆萨、网状纤维、胶原纤维、PAS及铁反应6种染色后的工作体会,对一些基本病变的观察作了分析和探讨.共讨论了10个问题:如造血组织与脂肪组织的比例、粒细胞与红细胞的比例、造血细胞成熟过程、浆细胞含量、巨核细胞含量、骨髓水肿与出血、网状纤维的变化、胶原纤维的变化、骨小梁变化及骨髓中贮存铁的观察等,并对其中某些内容提出了自己镜检的常规标准.     

大鼠小体积肝移植后肝再生障碍的实验研究

目的探讨部分肝移植后肝再生状况和小体积移植物发生肝再生障碍的可能机制。方法实验分为大鼠全肝移植组（OLT）、50%部分肝移植组（50%PLT）和30%部分肝移植组（30%PLT）。分析各组术后肝功能的变化,通过免疫组化观察移植肝标本Cyclin D1和PCNA的表达,并对移植肝组织结构进行电镜观察。结果各组ALT和AST于术后24hr达到峰值,且30%PLT组上升显著。Cyclin D1和PCNA的免疫组化表达中,50%PLT组表达明显上调,而30%PLT组表达则明显抑制。电镜观察发现30%PLT组术后微观结构改变显著。结论 30%PLT组术后肝细胞增殖再生受到明显抑制,推测与肝细胞微环境的恶化和叠加的缺血再灌注损伤有关。     

索拉非尼抑制肝癌细胞增殖中自噬的作用及其机制

目的：研究分子靶向药物索拉非尼在体外对人肝癌细胞株HepG_2增殖抑制过程中自噬的表达及作用,并探讨其可能机制。方法：以吖啶橙染色荧光显微镜对自噬进行定性观察;cell counting kit-8检测活性氧（reactiveoxygen species,ROS）抑制前后HepG_2细胞成活率的变化;RT-PCR检测自噬基因Beclin-1表达的变化。Western印迹检测自噬相关蛋白Beclin-1的变化：荧光分光光度计检测胞内二氯荧光素DCF的荧光强度。结果：索拉非尼对肝癌细胞HepG_2具有显著的抑制作用;索拉非尼可诱导肝癌细胞HepG_2产生自噬及ROS,自噬在基因及蛋白水平表达均增加;抑制ROS的产生可减少索拉非尼诱导的肝癌细胞HepG_2自噬的表达量,自噬的抑制增强了索拉非尼对肝癌细胞的抑制作用。结论：ROS参与索拉非尼诱导肝癌细胞HepG_2的自噬表达,索拉非尼在抑制肝癌细胞自噬过程中自噬可能起到保护作用,抑制自噬可能为提高进展期肝癌病人索拉非尼分子靶向治疗敏感性提供新的思路。     

羟基脲对不同p53状态肝癌细胞中GADD45β的诱导差异及调控机制

目的 探讨羟基脲对不同p53状态肝癌细胞的GADD45β诱导差异及可能调控机制.方法 转染p53全序列建立Hep3B+p53;体外合成GADD45β近端启动子序列群(-618～-314),构建荧光素表达质粒,转染肝癌细胞株HepG2、Hep3B和Hep3B+p53;以实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)比较羟基脲对GADD45β表达诱导及其近端启动子活性影响差异;比较对DNA合成和细胞克隆形成能力抑制差异;通过Caspase-3的表达变化测定凋亡的发生和发展.结果 羟基脲对Hep3B中GADD45诱导并不明显,转染p53全基因序列后,Hep3B+p53对羟基脲的敏感性明显增加,并呈现出剂量-效应的正相关.荧光素分析提示羟基脲作用Hep3B+p53后的启动子核转录因子( NF)-κB( -618/+6)和E2F-1(-470/+6)活性较Hep3B明显增强约1.1倍和0.8倍.羟基脲能够更加明显地抑制Hep3B+p53的DNA合成能力和细胞克隆形成能力,10 mmol/L羟基脲对Hep3B+p53DNA合成抑制率达到37.15％,对细胞克隆形成能力的抑制率达85.29％,与Hep3B比较差异有统计学意义(P＜0.05).羟基脲作用后Hep3B+p53的Caspase-3能够迅速地启动凋亡的发生和发展.结论 p53对核糖核苷酸还原酶抑制性化疗药物对肝癌细胞的GADD45诱导起重要作用,增强转录调节因子的表达水平是其可能的作用机制.