注射用胶原酶治疗腰椎间盘突出症体外作用机制

目的研究注射用胶原酶对磷脂酶A2活性的影响及对3种类型胶原蛋白的水解效率。方法不同剂量的胶原酶在不同时间内水解磷脂酶A2,其水解产物检测是通过SDS PAGE分析确认;以卵磷脂作为磷脂酶A2的底物,在反应体系中分别加入不同剂量的胶原酶以考察其对磷脂酶A2活性的影响;利用Lineweave r Burk双倒数法,求得磷脂酶A2水解卵磷脂的米氏常数(Km)以及反应体系含有胶原酶时的表观Km;分别以Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型胶原蛋白为底物,在100 min内,考察每个反应体系在间隔10 min时产物生成量,以比较注射用胶原酶对不同类型胶原蛋白的水解效率。结果注射用胶原酶不水解磷脂酶A2,但对磷脂酶A2活性具有抑制作用,且随胶原酶剂量的加大,抑制作用也随之增强,磷脂酶A2水解卵磷脂的Km为0.95 mol.L-1,含有胶原酶时的表观Km为3.76 mol.L-1;注射用胶原酶对3种类型胶原蛋白水解活性不同,其水解速率是Ⅲ型>Ⅱ型>Ⅰ型。结论胶原酶在体外对磷脂酶A2活性的抑制作用是竞争性;在3种类型胶原蛋白中,对Ⅲ型的水解作用最强。     

应用高效液相色谱法比较我国不同地区东亚钳蝎毒（ButhusmartensiiKarsch）

用胶过滤、离子交换高效液相色谱分离我国不同地区东亚钳蝎毒，其图谱表明：不同地区东亚钳蝎毒蛋白质的种类、含量存在一定差异，地区相近，差异较小，反之差异较大．     

关于市县两级药检所业务调整问题的思考

药品监督管理体制改革后 ,县级药检所不再独立存在 ,市县两级药品检验业务如何适应新形势 ,发挥现有人员、设备等资源的最大效益 ,是摆在我们面前急需解决的问题。我们认为 ,应从以下四个方面对市县两级药检业务做出相应调整 ,以适应目前工作的需要。1　调整市县两级药检所的工作重点 ,建立市级中心实验室 ,加大市级药检所抽验的力度和覆盖密度 ,充分发挥市中心实验室的作用。按照国家药品监督管理局制定的“二级计划 ,三级抽验”的方案 ,作好市县两级药检所的分工 ,使其工作重点有所侧重 ,是今后一段时期药检工作应研究解决的一个问题。另…     

东亚钳蝎毒的提取物Tityustoxin-Ⅲ镇痛作用及其机理的研究

本文报告了蝎毒素-Ⅲ的镇痛作用及其作用机制。蝎毒素-Ⅲ(ti?yusioxin-Ⅲ)是一种镇痛活性多肽。它是从东亚钳蝎毒中经过Cm-sephaden G-50柱层析提取,再用Sephaden G50凝胶过滤纯化而成。小鼠扭体实验表明TT-Ⅲ的镇痛作用较粗毒强三倍,较安痛定作用亦强。小鼠光热甩尾法实验结果TT-Ⅲ(0.424mg/kg iv)使痛阈(甩尾反应时间)提高4倍。侧脑室注射TT-Ⅲ14μg/kg抑制皮层诱发电位N波82±12%,与等剂量吗啡相似。利血平化大鼠,TT-Ⅲ对皮层诱发电位N波失去抑制作用,Ⅲ由侧脑室注入5HT后,TT-Ⅲ对N波的抑制率恢复到68.9%。     

东亚钳蝎(ButhusmarthensiiKarsch)毒镇痛活性肽的分离纯化及其镇痛作用研究

本文采用凝胶过滤及离子交换层析法从东亚钳蝎毒中分离纯化出一种蝎毒镇痛活性肽（ＳｃｏｒｐｉｏｎＡｎａｌｇｅｓｉｃＰｅｐｔｉｄｅ简称ＳＡＰ）．ＳＡＰ经ＰＡＧＥ得单一条带，ＨＰＬＣ层析为单一峰；以ＳＤＳ－ｐＡＧＥ法测定其分子量为９１２０，等电聚焦法测定ＳＡＰ的等电点为７．８５，ＳＡＰ对热比较稳定．用小鼠醋酸扭体法等３种动物实验模型测定ＳＡＰ的镇痛作用，结果表明均有较强的镇痛活性．     

对虾白斑综合征病毒胸腺嘧啶核苷酸合成酶基因的系统进化分析

目的为了对对虾白斑综合征病毒 (whitespotsyndromevirus,WSSV)中最为保守的胸腺嘧啶核苷酸合成酶 (WSV TS)基因 ,进行该病毒的系统发育学研究。方法通过GenBankTM 数据库和DNAMAN分析系统 ,对不同生物来源的胸腺嘧啶核苷酸合成酶进行同源性比较并构建了该基因的系统发育进化树。结果 :WSV TS的氨基酸序列与来自高等生物 ,特别是同哺乳动物有着很高的同源性 ,而与多种病毒的同源性较低。结论WSV ts基因是WSSV基因组中最为保守的基因 ,其进化树的构建对于理解WSSV的进化地位有重要的帮助。     

重组人干扰素α2a分离纯化中试工艺研究

目的探索无单克隆抗体亲和层析的重组人干扰素α2a分离纯化工艺。方法用 7mmol·L-1盐酸胍抽提干扰素 ,然后用金属螯合层析、离子交换层析、反相柱层析和凝胶过滤将提取的干扰素纯化。结果目标蛋白纯化了 195 1倍 ,蛋白比活性达 2 4 0× 10 8IU·mg-1,回收率达 30 1%。SDS PAGE检定呈一条带 ,其分子质量约为 19kD ,纯度大于 97%。结论本工艺降低了生产成本 ,易于扩大生产规模 ,适合产业化要求。     

2008年广饶县食品药品监管局药品检验技术支撑能力建设情况调研报告

广饶县食品药品监管局自建局以来,在省、市食品药品监管局领导下,高度重视技术监督在监管中的作用,积极提升药检技术支撑能力,在保留了原有人员技术力量和设备基础上,还通过招聘应届药学大中专生、考选具备药学专业的公务员等方式丰富人员储备;根据基层监管的特点,配备相应仪器和试剂用于药品稽查,丰富办案手段,为保障我县广大群众用药安全有效做出较大贡献.     

爪蟾卵母细胞表达的大鼠ASIC3电生理学特性研究

目的:研究大鼠酸感受离子通道亚基3 (acid-sensing ion channel subunit 3,ASIC3)组成的同聚体离子通道的电生理学特性.方法:将编码ASIC3亚基的cRNA注射到爪蟾卵母细胞中以表达ASIC3离子通道,使用双电极电压钳技术记录H 诱发电流,分析电流的药理学和门控动力学特征,并观察了Ca2 、Na 及K 离子对H 诱发电流的影响.结果:在注射ASIC3亚基cRNA的爪蟾卵母细胞上,降低胞外液pH值可诱导出内向电流.pH值越小则H 诱发的电流幅度越大,pH50＝5.83.H 诱发电流可被阿米洛利(氨氯吡咪)可逆性阻断,电流呈现快速和稳态失活,其失活常数分别为τ1＝(1.5±0.7) ms,τ2＝(364.5±1.3) ms.提高胞外Ca2 浓度可降低H 诱发的电流幅度,IC50＝9.16 mmol/L.当细胞外液中无Na 时,H 基本上不能诱发出内向电流;当同时去除细胞外液中Na 和K 时,H 可诱发出外向电流.结论:成功建立了特异性表达大鼠ASIC3亚基同聚体离子通道细胞模型.ASIC3除了对Na 通透外,对K 具有一定程度的通透.胞外Ca2 对ASIC3的开放具有抑制性作用.     

人丙氨酸氨基转移酶基因(ALT1)的克隆、表达、纯化及酶活性的鉴定

目的克隆、表达、纯化重组人丙氨酸氨基转移酶(ALT1),并测定该酶活性,为建立特异性的ALT分型检测方法奠定基础。方法通过RT-PCR从肝癌细胞中扩增丙氨酸氨基转移酶(ALT1)基因,并将其克隆至pET-28 a表达载体中。重组表达质粒pET28 a-ALT1,转化大肠杆菌BL21,经1.0mmol.L-1IPTG诱导,表达可溶性重组融合蛋白,通过硫酸铵沉淀、镍离子柱亲和色谱及QHP柱色谱3步纯化,并检测融合蛋白活性。结果经过表达条件的优化增加了可溶性蛋白的表达,纯化后目的蛋白纯度达到85%,经测定重组蛋白具有很高的丙氨酸氨基转移酶活性(200 U.mg-1)。结论通过基因克隆及大肠杆菌表达,能得到活性较高的丙氨酸氨基转移酶蛋白。