SSCP在寡核苷酸适配子ssDNA多克隆筛选中的应用

目的利用单链构象多态性技术弥补SELEX(systematic evolution of ligands by exponential en-richment,SELEX)实验在寡核苷酸适配子克隆、测序环节中的不足,减少SELEX实验的环节。方法利用单链构象多态性技术(singel-strand conformation polymorphism,SSCP)将多轮SELEX筛选的198个寡核苷酸适配子克隆在测序前进行SSCP筛查。结果对198个克隆的SSCP电泳条带位置分析,挑选出58个克隆测序。SSCP筛查得到有效克隆的检出率为20.69%,是不用SSCP筛查检出率6.07%的3.4倍;如果去除组间误差,有效克隆的检出率44.44%是不用SSCP筛查检出率的7.32倍。结论通过对198个克隆的20批次SSCP电泳筛查,并经58个克隆测序后的实验结果证明:同一SSCP电泳胶片上电泳条带泳动位置相同的克隆片段,基因序列相同;电泳条带泳动位置不同的片段,基因序列不同。根据SSCP电泳条带泳动位置,挑选有代表性的克隆测序,避免对多克隆盲目测序,为多克隆测序前的筛查探索一条新的途径。     

重组戊型肝炎氢氧化铝佐剂疫苗的磷含量与免疫效力关系研究

目的探索氢氧化铝佐剂戊肝疫苗的免疫原性与疫苗中PO_4~(3-)浓度的关系,并分析抗体滴度与抗原在羊淋巴液中吸附率有无相关性。方法用不同浓度PO_4~(3-)处理氢氧化铝佐剂制备试验疫苗,腹腔免疫Balb/c小鼠,ELISA法定量检测免疫后不同时间血清抗体滴度,同时采用钼酸铵还原法检测试验疫苗离心沉淀中的磷含量,根据兰格缪尔方程计算抗原在含不同浓度PO_4~(3-)的佐剂表面的最大吸附量(Γm)。试验疫苗在羊淋巴液中的抗原吸附率采用ELISA法检测。结果随疫苗中PO_4~(3-)浓度增加,抗原最大吸附量(Γm)减小,抗原在羊淋巴液中的吸附率下降,免疫血清抗体滴度渐次增加,直至达到平稳状态。结论在一定范围内增加疫苗磷酸根含量可减小抗原在羊淋巴液中吸附率,降低佐剂对抗原的吸附程度,提高疫苗免疫抗体滴度。     

无细胞百日咳疫苗原液双向电泳技术的建立

[目的]建立无细胞百日咳疫苗（APV）原液的双向电泳技术,获得分辨率高,重复性好的双向电泳图谱,用于APV中成分的分析。[方法]用适当的方法浓缩处理APV原液,以固相pH梯度等电聚焦（IEF）为第一向,SDS—PAGE垂直电泳为第二向进行双向电泳（2-DE）,考马斯亮蓝染色后进行扫描分析。[结果]原液样品中蛋白质得到有效分离,主要集中在碱性区域。[结论]建立了无细胞百日咳疫苗原液的双向电泳分析方法。2-DE图谱较为理想、清晰,有较好的重复性。为进一步评价疫苗质量,研究和发现新的免疫保护性抗原建立了基础。     

胰岛素溶液化学稳定性研究

本文用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)和高效液相凝胶层析法(GF-HPLC)研究了pH值对胰岛素溶液化学稳定性的影响。稳定性实验采用经典恒温法。实验结果表明pH值是影响胰岛素溶液化学稳定性的重要因素,在酸性溶液中降解反应速率随pH值的降低而增大;而在碱性溶液中则随pH值的降低而减小,即溶液pH值接近胰岛素等电点时其稳定性最好。胰岛素溶液加热降解反应规律符合一级动力学方程。     

关于建立县级食品药品检验检测中心的建议

食品药品的安全问题直接关系到广大人民群众的身体健康和生命安全,关系到国家经济健康发展和社会和谐稳定。《药品管理法》、《食品安全法》的公布实施,对规范食品、药品生产、经营及使用行为,防范食品药品安全事故发生,增强食品药品安全监管工作的规范性、科学性和有效性,提高我国食品药品安全监管整体化水平,具有重要意义。     

注射用胶原酶对磷脂酶A2活性抑制作用的体外实验研究

目的研究注射用胶原酶对炎性物质磷脂酶A2(PLA2)的水解作用和对其活性的抑制作用。方法制备不连续SDS-PAGE垂直平板凝胶,将3种酶促反应体系的不同酶解时间的反应液样品,进行电泳、固定、染色、脱色。同时在PLA2活性测定体系中,加入定量的胶原酶溶液,测定各反应体系的PLA2活性相当值。以不含胶原酶的PLA2活性测定体系为标准,求出不同活性单位胶原酶体系的PLA2相对活性,并依据实验所获得的数据,绘制Lineweaver-Burk图加以识别。通过对注射用胶原酶在PLA2水解卵磷脂过程中所起的作用,确定注射用胶原酶对PLA2活性的抑制机制。结果注射用胶原酶对PLA2无水解作用,但在体外对PLA2的活性有明显的抑制作用,其抑制类型为竞争性抑制,且抑制作用随胶原酶剂量的增加而增强。结论虽然注射用胶原酶在体外对炎性物质PLA2的活性有明显的抑制作用,但根据酶促反应动力学的基本理论,“针抵患处、酶达底物”是构成化学溶解术这一微创技术的基本要素和应用该技术时必须遵守的基本原则。     

应用高效液相色谱法比较我国不同地区东亚钳蝎毒（ButhusmartensiiKarsch）

用胶过滤、离子交换高效液相色谱分离我国不同地区东亚钳蝎毒，其图谱表明：不同地区东亚钳蝎毒蛋白质的种类、含量存在一定差异，地区相近，差异较小，反之差异较大．     

关于市县两级药检所业务调整问题的思考

药品监督管理体制改革后 ,县级药检所不再独立存在 ,市县两级药品检验业务如何适应新形势 ,发挥现有人员、设备等资源的最大效益 ,是摆在我们面前急需解决的问题。我们认为 ,应从以下四个方面对市县两级药检业务做出相应调整 ,以适应目前工作的需要。1　调整市县两级药检所的工作重点 ,建立市级中心实验室 ,加大市级药检所抽验的力度和覆盖密度 ,充分发挥市中心实验室的作用。按照国家药品监督管理局制定的“二级计划 ,三级抽验”的方案 ,作好市县两级药检所的分工 ,使其工作重点有所侧重 ,是今后一段时期药检工作应研究解决的一个问题。另…     

东亚钳蝎毒的提取物Tityustoxin-Ⅲ镇痛作用及其机理的研究

本文报告了蝎毒素-Ⅲ的镇痛作用及其作用机制。蝎毒素-Ⅲ(ti?yusioxin-Ⅲ)是一种镇痛活性多肽。它是从东亚钳蝎毒中经过Cm-sephaden G-50柱层析提取,再用Sephaden G50凝胶过滤纯化而成。小鼠扭体实验表明TT-Ⅲ的镇痛作用较粗毒强三倍,较安痛定作用亦强。小鼠光热甩尾法实验结果TT-Ⅲ(0.424mg/kg iv)使痛阈(甩尾反应时间)提高4倍。侧脑室注射TT-Ⅲ14μg/kg抑制皮层诱发电位N波82±12%,与等剂量吗啡相似。利血平化大鼠,TT-Ⅲ对皮层诱发电位N波失去抑制作用,Ⅲ由侧脑室注入5HT后,TT-Ⅲ对N波的抑制率恢复到68.9%。     

东亚钳蝎(ButhusmarthensiiKarsch)毒镇痛活性肽的分离纯化及其镇痛作用研究

本文采用凝胶过滤及离子交换层析法从东亚钳蝎毒中分离纯化出一种蝎毒镇痛活性肽（ＳｃｏｒｐｉｏｎＡｎａｌｇｅｓｉｃＰｅｐｔｉｄｅ简称ＳＡＰ）．ＳＡＰ经ＰＡＧＥ得单一条带，ＨＰＬＣ层析为单一峰；以ＳＤＳ－ｐＡＧＥ法测定其分子量为９１２０，等电聚焦法测定ＳＡＰ的等电点为７．８５，ＳＡＰ对热比较稳定．用小鼠醋酸扭体法等３种动物实验模型测定ＳＡＰ的镇痛作用，结果表明均有较强的镇痛活性．