再生障碍性贫血T-bet/IFN-酌信号通路及中医研究进展

再生障碍性贫血（AA）是T 淋巴细胞介导的自身免疫性疾病。AA 的发病机制研究主要集中在免疫功能异常、造血干细胞损伤、造血微环境异常3 个方面。近年来,AA 免疫机制异常越来越受到中医药血液病研究者的关注。AA 发病机制中细胞因子及相关的细胞内信号转导通路尤其复杂,其中T-bet/IFN-γ信号通路在AA 发生发展过程中起着重要的作用。本文就T-bet/IFN-γ及其相关信号传导通路在AA 中的作用做一综述。     

温肾益髓生血方对RA大鼠肾脏PI3K/AKT 信号通路影响的研究

目的：探讨温肾益髓生血方对RA大鼠贫血的改善作用及其对肾脏PI3K/AKT信号通路的影响。方法：50只雄性SPF级Wister大鼠,按体质量进行随机分层,分为五组：正常组10只,假手术组10只,模型组10只,生血宁组10只,温肾益髓生血组10只。模型组与治疗组每日予180 mg·Kg·d-1腺嘌呤灌胃及予各治疗组对应的治疗药物,正常组、假手术组与模型组使用等体积去离子水灌胃,每周称取大鼠体质量。饲养12周后,各组大鼠用10%水合氯醛麻醉后取血,测定血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、尿酸（UA）等指标;RBC、HGB指标;留取肾组织并用10%福尔马林固定,HE、Mallory染色观察大鼠肾脏病理,免疫组化检测大鼠肾脏EPO、PI3K、AKT、p-AKT、bcl-2蛋白表达水平,原位杂交检测大鼠肾脏EPO、PI3K、AKT、bcl-2mRNA表达水平。结果：与正常组和假手术组比较,模型组体质量明显降低,有极显著性差异（P < 00.01）,肾脏出现明显病理损害;与模型组比较,温肾益髓生血组大鼠的一般状态有明显改善,各治疗组体质量有所升高,具有极显著性差异（P < 0.01）,治疗组血清BUN、Scr、UA水平明显降低,RBC、HGB水平升高,具有及显著性差异（P < 0.01）,肾脏病理损害减少,各治疗组大鼠肾脏EPO、PI3K、AKT、p-AKT、bcl-2蛋白表达水平明显降低,具有极显著性差异（P < 0.01）,EPO、PI3K、bcl-2mRNA表达水平明显升高,具有极显著性差异（P < 0.01）,AKTmRNA各组间无明显差异（P >0.05）。结论：温肾益髓生血方能够纠正RA大鼠的贫血状态并可能是通过干预肾脏PI3K/AKT信号通路起到抗肾脏细胞凋亡的作用。     

海昆肾喜对阿霉素肾病大鼠肾组织PDGF-BB蛋白及mRNA表达的影响

目的:研究海昆肾喜对阿霉素肾病大鼠肾组织血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)蛋白及mRNA表达的影响。方法:将54只阿霉素肾病模型大鼠随机分为6组:正常组、假手术组、模型组、苯那普利组、海昆肾喜低剂量组及高剂量组。实验第10周观察各组大鼠24 h尿蛋白定量,肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)水平及肾组织形态学变化;应用免疫组化及原位杂交方法分别观察PDGF-BB蛋白及mRNA在肾组织中的表达。结果:海昆肾喜低剂量组及高剂量组24 h尿蛋白定量和SCr、BUN水平较模型组均明显降低。PDGF-BB蛋白及mRNA的表达见于肾小管上皮细胞胞浆及肾小球系膜细胞,其表达较模型组显著减少。结论:海昆肾喜能抑制阿霉素肾病大鼠肾组织PDGF-BB蛋白及mRNA的表达,这可能是该药物防治肾小球硬化的作用机制之一。     

益髓生血颗粒对AA大鼠CD4 + CD25 + Foxp3调节性T细胞的影响

目的：观察益髓生血颗粒对再生障碍性贫血（Aplastic Anemia,AA）大鼠CD4 + CD25 + 调节性T细胞（Regulatory T Cell,Treg细胞）的影响及其治疗AA的作用机制。方法：取雄性SD大鼠按体重随机分组。其中模型组连续7周隔天皮下注射苯（1 mL ? kg -1 ）、取材10天前开始腹腔注射环磷酰胺（25 mL ? kg -1 ）,连续3天,第4周将模型组大鼠按体重随机分为模型组、司坦唑醇组、益髓生血颗粒组,灌胃给药。正常组及模型对照组给予等体积生理盐水。实验结束时,检测外周血WBC、RBC、HGB、PLT;制备血涂片、骨髓涂片;免疫组织化学法检测脾组织Treg细胞Foxp3蛋白表达;RT-PCR法检测骨髓组织Foxp3 mRNA的表达。结果：与正常组比较,模型组WBC、RBC、HGB、PLT均显著减少（P<0.01）,血涂片示血细胞通透性差、白细胞减少、退化细胞增多,骨髓涂片示脂肪滴明显增加、造血细胞均明显降低、非造血细胞增多;经益髓生血颗粒组治疗后WBC、RBC、HGB、PLT均显著增加（P<0.01）,血涂片及骨髓涂片显示细胞通透性好转、形态趋于正常、脂肪滴明显减少,造血细胞均明显增加,脾组织Foxp3蛋白及骨髓组织Foxp3 mRNA表达明显升高（P<0.01）。结论：益髓生血颗粒可上调Foxp3的因及蛋白表达,调控AA免疫功能,进而改善AA免疫环境,促进骨髓造血功能的恢复,发挥治疗AA的重要作用。     

中医“肾髓系统”的初步构建

"肾藏精,精生髓"是中医藏象理论的重要内容之一,近代学者提出的肾-髓-脑,肾-髓-骨等生物轴均是以"肾髓系统"为核心,并在此基础上衍生的,在中医整体观念的指导下,构建中医"肾髓系统"有利于不断完善和充实"肾髓相关"理论,更好地把握和运用"肾髓相关"理论解决重大疾病的临证问题。而历代医家并没有对"肾髓系统"做出明确的界定,没有形成一个完整的理论体系, "肾髓系统"中的"髓"包括脑髓、脊髓、骨髓,髓可化生血液,其与骨髓共同滋养骨骼,而骨髓与脑髓、脊髓相互贯通,均与血有关,故"髓化血"这一功能特点在"肾髓系统"中占据着重要地位。本文从"肾髓系统"的结构和功能方面初步阐释和构建中医"肾髓系统",以期丰富"肾髓系统"相关理论内涵。     

参芪糖肾安颗粒对糖尿病肾病大鼠肾脏保护与氧化应激的影响

目的:探讨参芪糖肾安颗粒对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏保护作用以及对大鼠血清一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的影响。方法:65只SD大鼠按体质量随机分为正常对照组8只,造模组57只。造模组行单侧肾切除,术后1周空腹一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)55 mg/kg,以72 h后血糖≥16.7 mmol/L、尿糖≥4+者为糖尿病造模成功。然后按大鼠血糖水平随机分为模型组,厄贝沙坦组,参芪糖肾安大、中、小剂量组,给药12周。每2周测1次体质量,第4,8,12周末收集大鼠24 h尿检测尿蛋白量。12周末处死大鼠,无菌取肾组织,行肾组织病理染色,观察肾脏病理改变;取血并分离血清,检测血清三酰甘油(TG)、肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、NO、MDA、SOD含量。结果:参芪糖肾安可以减轻肾脏病理改变,降低糖尿病肾病大鼠尿蛋白,增加大鼠体质量,降低TG、SCr、BUN,升高血清NO、SOD水平,降低MDA含量。结论:参芪糖肾安可能减轻糖尿病肾病大鼠氧化应激反应,进而减轻肾脏病理损害、延缓糖尿病肾病的病程进展。     

温脾汤治疗慢性肾衰竭的研究进展

温脾汤出自唐·孙思邈《备急千金要方》 ,由大黄、附子、干姜、人参、甘草五味药组成 ,功可温补脾阳 ,兼以攻下冷积 ,主治脾阳虚弱 ,手足不温 ,脉沉弦的腹痛 ,冷积便秘 ,或久痢赤白等病证。近代医家多用温脾汤治疗慢性肾衰竭(ＣＲＦ) ,实验研究和临床研究均取得了较好疗效 ,本文拟就国内外有关文献作一概述。　　 1　实验研究郑平东等〔1〕用温脾汤治疗大鼠实验性ＣＲＦ ,结果该方可以改善高氮质血症 ,对照组血清尿素氮 (ＢＵＮ)异常增高 ,而温脾汤组则显著降低 ,比对照组降低了 2 9% ;改善电解质代谢 ,血Ｎａ 两组显著差异 ,血Ｋ 温脾汤…     

阿霉素联合氢化可的松诱导慢性肾脏病肾阳虚证大鼠模型的建立与评价及真武汤干预机制研究＊

目的 探索应用阿霉素联合氢化可的松诱导建立慢性肾脏病肾阳虚证大鼠模型的方法与评价及真武汤干预的机制。方法 采用阿霉素联合氢化可的松注射诱导建立慢性肾脏病肾阳虚证大鼠模型。52只SPF级雄性6-8周龄SD大鼠，随机分为正常组10只，模型组42只。大鼠适应性饲养2周，模型组大鼠阿霉素3 mg·kg^-1尾静脉注射，第4周4 mg·kg^-1剂量第2次注射，模型成功后随机分为阿霉素组，氢化可的松组与真武汤组。第12周，氢化可的松组与真武汤组进行氢化可的松10 mg·kg^-1肌肉注射，真武汤组按照每日5.39 g/kg进行真武汤干预。在实验中记录一般情况，称取体质量，采取BCA法检测24 h尿蛋白定量，采取红外体温计测量体温，采取游泳耐力法检测体力耐力。实验第24周取材，摘取肾脏，脾脏，睾丸称量并计算脏器指数；大鼠肾组织HE、Masson染色分析病理形态学变化；大鼠血清采用比色法检测Scr、BUN、UA、TC、TG、TP、ALB、SOD；采用酶联免疫吸附法检测CORT、T3、T4、TSH、FSH、LH、T、E2水平。结果 与正常组比较，氢化可的松组大鼠一般情况出现弓背、戗毛、蜷缩、喜卧懒动，精神不振等肾阳虚表现；24 h尿蛋白大量增加（P < 0.01）；与氢化可的松模型相比，真武汤组肾阳虚表现出现好转，24 h尿蛋白降低（P < 0.05），体温升高（P < 0.05）；HE结果显示氢化可的松组肾小球发生球囊壁粘连，系膜区增宽，肾小管扩张或萎缩，大量蛋白管型，肾间质炎性细胞浸润；Masson结果显示氢化可的松组肾小球节段性硬化，肾小管与肾间质发生纤维化；真武汤组HE结果显示蛋白管型减少，球囊壁粘连减轻，肾间质炎性细胞浸润减少，Masson结果显示肾小球纤维化减轻，肾小管与肾间质纤维化减轻；与正常组相比，氢化可的松肾功能异常，血脂升高，蛋白显著降低；CORT降低，T3、T4降低（P < 0.05，P < 0.01），TSH明显升高（P < 0.01）；SOD明显降低（P < 0.01）；T明显降低，FSH、LH、E2显著降低（P < 0.05，P < 0.01）；与氢化可的松组相比，真武汤组血肌酐与尿酸下降，血清蛋白上升（P < 0.05）；CORT上升，T3明显升高（P < 0.05）、T4升高、TSH下降，SOD显著升高（P < 0.01）、T、E2、FSH、LH出现升高。结论 阿霉素联合氢化可的松可以成功建立慢性肾脏病肾阳虚证动物模型。真武汤可能通过改善肾功能、作用于下丘脑肾上腺轴、甲状腺轴和性腺轴对慢性肾脏病肾阳虚证起到很好的干预作用。     

慢性肾脏病肾阳虚证“病证结合”大鼠模型的对比研究＊

目的 通过动物实验，在诱导大鼠慢性肾脏病基础上分别施加不同复合因素，比较研究不同“病证结合”模型特点及筛选构建与评价最优慢性肾脏病肾阳虚证“病证结合”大鼠模型。方法 将106只SPF级雄性SD大鼠适应性喂养2周，随机分为正常组10只、模型组96只，模型组大鼠分别于第3周、第4周尾静脉注射阿霉素3 mg·kg^-1、4 mg·kg^-1，建立慢性肾脏病动物模型，将成模大鼠随机分为阿霉素组、羟基脲组（300 mg·kg^-1灌胃）、氢化可的松组（10 mg·kg^-1肌肉注射）、雌二醇组（4 mg·kg^-1腹腔注射）、甲硫咪唑组（2 mL·kg^-1灌胃）、氨鲁米特组（20 g·L^-1灌胃），每组各16只，再施加复合因素，建立慢性肾脏病肾阳虚证“病证结合”动物模型。记录大鼠一般状态、体质量、体温和游泳耐力；检测大鼠24 h尿蛋白；造模24周后，股动脉取血并处死大鼠，测量大鼠肾脏、脾脏、睾丸、肾上腺和甲状腺的脏器指数；采用HE和Masson染色法，观察大鼠肾脏病理变化；用比色法检测大鼠Scr、UA、BUN、TP、ALB、TC、TG的含量，用酶联免疫法检测大鼠FSH、LH、T、E2、T3、T4、TSH、SOD、CORT的含量。结果 与正常组比较，慢性肾脏病肾阳虚证各模型组大鼠一般情况均较差，出现不同程度的毛发干枯、弓背蜷缩、消瘦、精神萎靡等，其中氢化可的松组大鼠症状最为严重；各模型组游泳耐力减弱，尾根部温降低，24 h尿蛋白明显增加，部分大鼠出现腹水症状，其中，甲硫咪唑组大鼠体温最低，氢化可的松组大鼠游泳耐力最低；各模型组大鼠的甲状腺、睾丸和肾上腺指数降低，而肾脏指数不同程度的升高（P < 0.01），其中氢化可的松组大鼠脾脏指数明显上升（P < 0.01）；HE、Masson染色结果显示，各模型组大鼠出现肾小管上皮细胞疏松变、空泡变，肾小管扩张，肾小球纤维化、球囊壁增厚，肾间质出现淋巴细胞浸润。与正常组相比，各模型大鼠出现不同程度的Scr、UA、BUN、TC、TG的升高，而TP和ALB不同程度降低，其中，氢化可的松组大鼠TP和ALB明显降低（P < 0.05，P < 0.01）；各模型组的CORT均明显升高，内源性T3、T4、FSH、LH、T、E2和SOD不同程度的降低（P < 0.05，P < 0.01）；而TSH不同程度的升高（P < 0.01），其中，雌二醇组大鼠T最低，甲硫咪唑组大鼠SOD最低。结论 本实验中5种慢性肾脏病肾阳虚证大鼠均出现下丘脑-垂体-靶腺轴的紊乱，但在“性腺轴”“甲状腺轴”“肾上腺轴”上各有特点，其中氢化可的松组大鼠模型符合人类慢性肾脏病肾阳虚证证候特点和“肾阳虚三轴”改变，是理想的慢性肾脏病肾阳虚证“病证结合”模型，是中西医结合范式研究的有益尝试。     

海昆肾喜对阿霉素肾病大鼠肾组织PDGF-BB蛋白及其mRNA表达的影响

目的：研究海昆肾喜(fucoidan)对阿霉素肾病大鼠肾组织血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)蛋白及mRNA表达的影响。方法：采用阿霉素肾病模型,将54只大鼠随机分为6组：正常组、假手术组、模型组、苯那普利组、海昆肾喜低及高剂量组(0.77,3.08 mg·kg^-1)。实验第10周观察各组大鼠24 h尿蛋白定量,肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平及肾组织形态学变化；应用免疫组化及原位杂交方法分别观察PDGF-BB蛋白及mRNA在肾组织中的表达。结果：海昆肾喜低及高剂量组24 h尿蛋白定量和Scr,BUN水平较模型组均明显降低。PDGF-BB蛋白及mRNA的表达见于肾小管上皮细胞胞浆及肾小球系膜细胞,其表达较模型组显著减少。结论：海昆肾喜能抑制阿霉素肾病大鼠肾组织PDGF-BB蛋白及mRNA的表达,这可能是该药物防治肾小球硬化的作用机制之一。