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991.
目的建立一种耐多药结核分枝杆菌检测方法。方法设计并构建含有kat G315、rpo B526、rpo B531耐药基因突变位点的质粒;通过PCR扩增及纯化、等位基因特异性引物延伸反应(ASPE)、荧光微球杂交反应及液相芯片系统Luminex 200检测;并对该方法反应条件进行探索及方法学评价。结果 ASPE反应中Tsp DNA聚合酶最适浓度为0.025 U/μL,杂交荧光微球浓度为每μL 100个,链霉亲和素藻红蛋白浓度及杂交时间分别为2μg/m L和20 min;所建立方法的检测灵敏度最低可达1ng/m L;当质粒浓度为1.5×105ng/m L时,批间和批内变异系数(CV)分别为6.48%~12.15%和0.35%~6.92%;当质粒浓度为2 ng/m L时,批间和批内变异系数(CV)分别为5.73%~10.77%和0.97%~8.91%;特异性引物探针与其他突变位点均无交叉反应。结论液相芯片技术联合等位基因特异性引物延伸反应检测耐多药结核分枝杆菌灵敏且具有成本低、高通量等特点,极具临床应用潜力。 相似文献
992.
目的分析江苏宿迁地区汉族人群IL-6基因-572C/G多态性与冠心病(CHD)的关系。方法采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测197例CHD患者及202例健康对照者IL-6基因-572C/G多态性,并进行HardyWeinberg平衡检验,选取部分DNA进行测序,以验证其基因型;用AU5400全自动生化分析仪测定其血糖和血脂水平。结果IL-6-572C/G基因频率在CHD组和健康对照组中均具有群体代表性(P0.05);健康对照组和CHD组CC、CG、GG基因型分布分别为53.5%、41.1%、5.4%和36.6%、49.7%、13.7%,C,G等位基因频率则分别为74.0%、26.0%和61.4%,38.6%。与健康对照组比较,CHD组IL-6-572C/G的CG+GG基因型频率显著升高(χ~2=11.53,P=0.007);危险因素分析结果显示,IL-6-572G等位基因增加了CHD患病风险(OR=1.79,95%CI:1.32~2.42,P=0.000)。在CHD组中,血糖血脂水平在IL-6-572CC、CG和GG 3种基因型间的差异无统计学意义(P0.05)。早发冠心病与健康对照组比较结果显示CG+GG基因型频率显著升高(χ~2=5.52,P=0.019),且G等位基因频率显著升高(χ~2=6.01,P=0.014);但早发冠心病与晚发冠心病比较,所有基因型差异均无统计学意义(P0.05)。结论 IL-6-572G等位基因与江苏宿迁地区汉族人群CHD的发病密切相关,与早发CHD易感性亦显著相关。 相似文献
993.
目的对1个糖原累积症(glycogen storage disease,GSD)家系进行基因突变分析,并对该家系中的一高危胎儿进行产前分子诊断。方法采集该家系先证者及其父母外周血,采用二代测序方法查找先证者致病基因及突变位点,Sanger测序进行突变验证。确定先证者及其父母基因型后采集羊水标本,采用PCR扩增及直接测序方法进行产前分子诊断。结果该家系先证者为G6PC基因c.648GT纯合突变。双亲均为G6PC基因c.648GT杂合突变。胎儿携带与父母相同的c.648GT杂合突变。结论建立了对GSD进行分子诊断和产前分子诊断的方法,并成功应用于1个GSD家系。 相似文献
994.
目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者癌组织中锌指结构反义转录本1(zinc finger antisense 1,ZFAS1)表达水平,探讨ZFAS1在NSCLC进展中的生物学作用。方法实时荧光定量RT-PCR检测ZFAS1在NSCLC患者癌组织和癌旁组织中的表达水平。RNA干扰ZFAS1在A549细胞中表达,细胞计数和克隆形成实验检测细胞增殖情况,流式分析检测细胞周期和细胞凋亡,Transwell迁移和基质胶侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力,实时荧光定量RT-PCR检测Cyclin D1、Bcl2、N-cadherin、ZEB1、Slug和Twist基因表达水平变化。结果 ZFAS1在NSCLC患者癌组织中的平均表达水平[0.01(0.002,0.054)]较癌旁组织[0.002(0.001,0.012)]明显升高(Z=-2.638,P0.01)。ZFAS1基因敲减后,A549细胞增殖能力明显减弱(P0.01);A549细胞周期G1期比例升高,S期比例下降(P0.01);A549细胞凋亡比例明显增加(P0.01);A549细胞迁移和侵袭能力明显下降(P均0.01);A549细胞中Cyclin D1、Bcl2、N-cadherin、ZEB1、Slug和Twist基因表达水平均降低(P均0.05)。结论 ZFAS1在NSCLC患者癌组织中呈高表达。ZFAS1基因敲减诱导细胞周期阻滞、凋亡和抑制上皮-间质转变(EMT),减弱NSCLC细胞增殖、迁移和侵袭能力。 相似文献
995.
目的结合影像学评价小而密低密度脂蛋白胆固醇(sdLDL-C)与冠状动脉(以下简称"冠脉")粥样硬化病变严重程度的关系。方法连续选取2015年7月至2016年3月阜外医院436例门诊初诊怀疑冠脉粥样硬化性心脏病(CAD)并行冠脉计算机断层摄影术检查(CT)的患者,从斑块性质、病变支数及狭窄程度3个方面分析sdLDL-C与冠脉粥样硬化严重程度的相关性。结果 sdLDL-C与载脂蛋白B(apoB)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、血糖(Glu)呈正相关(r依次为0.644、0.631、0.558、0.434、0.145,P均0.01),与高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)呈负相关(r=-0.241,P0.01);sdLDL-C、apoB可作为严重CAD(三支病变及重度狭窄75%)发生的危险因素,且独立于传统风险因素(年龄、性别、高血压史、糖尿病史、吸烟史、饮酒史)及他汀类降脂药的应用;对于三支病变,LDL-C、sdLDL-C、apoB预测价值依次增强(OR依次为1.936、2.673、31.707);对于重度狭窄,LDL-C非独立危险因素,sdLDL-C、apoB有预测价值(OR分别为2.000、9.457)。结论 sdLDL-C可作为独立于传统风险因素的严重CAD预测指标,预测价值优于LDL-C,有可能作为进一步的风险控制指标。 相似文献
996.
目的在内标双重PCR系统中寻找影响靶模板检测灵敏度的主要因素,并比较不同检测体系的灵敏度。方法针对HBV基因设计普通引物对和中部同序引物对,比较引物二聚体(PD)含量;控制内标基因的Ct值约为30,调整内标引物浓度为10、8、5、2、1μmol/L,比较不同体系的检测灵敏度;控制内标引物的用量不变,分别测定内标基因Ct值在15、20、25、30时的靶模板检测灵敏度。结果中部同序引物PD的Ct值在35以上,普通引物对PD的Ct值在30~33之间;10、8、5、2、1μmol/L浓度的内标引物需要内标模板的浓度分别为5×10~4、5×10~4、5×10~4、5×10~5、5×10~7IU/m L;不同内标引物用量检测灵敏度均为5×10~3IU/m L,仅使用中部同序引物的单重PCR检测灵敏度为5×102IU/m L;内标Ct值在15、20、25、30时靶模板检测的灵敏度分别为5×10~5、5×10~4、5×10~3、5×10~3IU/m L。结论在双重PCR检测体系中,对靶模板检测灵敏度影响最大的因素为内标的模板量,仅使用中部同序引物对的单重PCR具有最高的灵敏度。 相似文献
997.
正近年来,我国多地陆续报道了发热伴血小板减少综合征(SFTS),部分病例临床表现非特异,个别重症病例因多脏器损害,预后较差。SFTS可由不同病原体感染引起,以新型布尼亚病毒感染多见。关于该疾病骨髓象特征报道较少,现将1例新型布尼亚病毒感染患者骨髓象查见戒指样组织细胞报告如下。 相似文献
998.
目的评价肌钙蛋白联合和肽素对急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)早期诊断的临床价值。方法采用荟萃(meta)分析法,全面检索Pub Med、CNKI、万方、维普等中英文数据库,收集建库至2016年5月的关于肌钙蛋白联合和肽素对AMI早期诊断的研究,用Meta-Disc1.4软件进行分析。结果纳入19篇文献,共计11 176例研究对象。按随机效应模型计算(95%CI),肌钙蛋白单独检测及肌钙蛋白联合和肽素检测,对AMI早期诊断的敏感性、特异性、阳性似然比、阴性似然比、诊断比值比(DOR)、曲线下面积(AUCROC)分别为77%(75%~79%)、92%(91%~93%);0.85(0.85~0.86)、0.60(0.59~0.61);5.78(4.01~8.32)、2.25(1.98~2.55);0.22(0.18~0.28)、0.12(0.09~0.17);32.21(23.72~43.75)、20.23(14.33~28.55);0.911 8、0.788 8。结论肌钙蛋白联合和肽素具有更高的敏感性,可以减少漏诊率,但单独检测具有更高的特异性和诊断准确性。 相似文献
999.
目的对携带bla_(NDM-1)和bl_(aKPC-2)的弗劳地枸橼酸杆菌的碳青霉烯酶基因结构进行分析。方法收集4株耐碳青霉烯类药物弗劳地枸橼酸杆菌(CF-05、CF-17、CF-35、CF-43),琼脂稀释法测定抗菌药物敏感性;脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析细菌同源性;特异性PCR扩增和序列测定分析碳青霉烯酶耐药基因和ESBLs耐药基因、接合试验、耐药基因周围序列分析对菌株的耐药机制进行分子水平研究。结果 4株细菌仅CF-05对阿米卡星敏感,所有菌株对其他检测药物全部耐药;PFGE结果显示4株细菌不同源;特异性PCR扩增和序列分析显示2株(CF-35、CF-43)同时携带blaNDM-1和blaKPC-2、另2株(CF-05、CF-17)仅携带blaNDM-1,CF-35同时携带bla_(CTX-M-15);其中3株细菌(CF-05、CF-17、CF-43)接合成功,CF-05、CF-17接合子(CF-05-1和CF-17-1)携带bla_(NDM-1),CF-43获得2种接合子(CF-43-1携带bla_(KPC-2)、CF-43-2同时携带bla_(NDM-1)和bla_(KPC-2));分析blaNDM-1和blaKPC-2周围序列发现,4株细菌周围序列分别与国内报道携带bla_(NDM-1)和bla_(KPC-2)的肺炎克雷伯菌质粒pNDM-HN380和PK048周围序列高度相似。结论在4株弗劳地枸橼酸杆菌中检测到NDM-1型碳青霉烯酶,其中2株同时携带KPC-2型碳青霉烯酶,bla_(NDM-1)周围序列和bla_(KPC-2)周围序列与国内已知肺炎克雷伯菌相关耐药基因周围序列高度相似。 相似文献
1000.