D-半乳糖氨大鼠肝衰竭模型并发内毒素血症对Smac凋亡通路的影响

近年研究表明,细胞凋亡是导致肝损伤的重要机制之一,内毒素血症作为肝功能衰竭的第二次打击,在肝功能衰竭病理过程的发生、发展过程中发挥重要作用.线粒体释放的第二种Caspase激活物Smac是2000年发现的促凋亡分子.     

聚合酶链反应检测SEN病毒的方法学探讨

目的探讨聚合酶链反应(PCR)扩增SEN病毒(SENV)核酸的优化条件。方法将标本分别以Acupure DNA／RNA提取法(方法1)、SDS-蛋白酶K方法(方法2)及裂解液提取’兀V核酸法(方法3)抽提SENV DNA模板，并用3组针对SENV DNA不同区的引物进行扩增，比较不同模板提取方法、不同扩增引物及不同体积标本对SENV DNA检出率的影响。结果在191份血清中，方法1、方法2和方法3提取核酸后可分别检测出15份、9份和7份。采用方法1提取SENV DNA的基础上，采用2组套式引物分别扩增出15份和11份，一次PCR引物仅检出2份SENV DNA阳性标本；应用引物2扩增至少需要50μl血清。结论不同引物扩增方法和不同模板提取方法可能是影响SENV DNA检出率重要因素。     

恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎患者的临床疗效及其生存质量评价

目的:评价恩替卡韦对慢性乙型肝炎(CHB)患者临床疗效和生存质量(QOL)的影响。方法:对200例CHB患者进行前瞻性研究,采用美国医学结局研究组的普适性测定量表(SF-36)进行生存质量调查,根据患者的意愿分为对照组(常规用甘草酸二胺护肝治疗,77例)和恩替卡韦治疗组即试验组(在常规护肝基础上加用恩替卡韦抗病毒治疗,123例)。观察各组患者治疗前、治疗后26周、52周的临床症状、肝功能、HBV DNA、生存质量指数,并进行对照分析,综合评价恩替卡韦的疗效。结果:两组患者在基线时年龄、性别、肝功能、HBV DNA水平和生存质量指数等方面均无统计学差异(P>0.05)。与对照组相比,试验组在治疗后26周和52周的肝功能复常率(26周:90.08%Vs 28.95%,P=0.000;52周:97.44%Vs 26.03%,P=0.000)、HBV DNA阴转率(26周:68.60%Vs0.00%,P=0.000;52周:86.32%Vs 1.37%,P=0.000)均优于对照组,差异有显著性意义(P<0.05)。治疗26周后和52周后,试验组患者的QOL在除PF(躯体功能)、BP(肌体疼痛)以外的多个纬度的得分均高于治疗前(P<0.05);对照组患者的QOL在治疗26周和52周时与治疗前比较,未见明显改善。结论:恩替卡韦能改善CHB患者的临床客观指标,提高患者的生存质量。     

内毒素对肝细胞Smac凋亡通路的影响

Smac作为重要的凋亡因子,可与凋亡抑制蛋白(IAP)结合,使其丧失抑制Caspase活性的作用,因此Smac在细胞凋亡的途径中有着极其重要的作用….我们采用D-氨基半乳糖氨建立大鼠肝衰竭模型和体外内毒素(LPS)刺激L02肝细胞,探讨促凋亡蛋白Smac对Caspase9和Caspase3的活性的影响.     

肾综合征出血热患者电解质及肾功能动态变化的意义

对 15 5例肾综合征出血热 (HFRS)患者临床各期的电解质和肾功能的变化进行了动态观察 ,并分析它们与并发症及病死率的关系 ,发现血钾、钠、氯、钙于疾病各期均以降低为主 ,血尿素氮、肌酐在发热期即升高 ,少尿期和移行期达高峰 ,至恢复期仍有部分患者未恢复正常 ,电解质紊乱组和肾功能损害严重者并发症的发生率和病死率明显高于电解质正常组和肾功能损害较轻者。透析可明显提高严重肾功能损害患者的成活率。     

武汉地区散发性急性戊型肝炎流行特点和病毒基因型分析

目的：探讨武汉地区散发性急性戊型肝炎流行特点和病毒基因型。方法：采用逆转录-巢式聚合酶链反应（RT-nPCR）检测162份急性戊型肝炎患者血清HEV RNA,并对PCR产物进行测序及同源进化分析。结果：武汉地区急性戊型肝炎患者男女比例为4.40∶1,30～59岁年龄段占71.60%,162份急性戊型肝炎患者血清有41份HEVRNA阳性,阳性率为25.31%,同源进化分析表明41株HEV毒株均属于基因Ⅳ型,各毒株间的核苷酸同源性为84.7%～100%,基因Ⅳ型又可进一步分为5种亚型,即Ⅳ-A、Ⅳ-B、Ⅳ-C、Ⅳ-D和Ⅳ-E,各亚型内部的核苷酸同源性分别为91.3%～100%、98.0%、92.0%～100%、98.0%～100%、100%,其中Ⅳ-A与上海株、西安株和广西株的核苷酸同源性分别为92.0%～97.3%、94.7%～99.3%和91.3%～96.0%,Ⅳ-D与北京株的核苷酸同源性为95.3%～96.7%。结论：武汉地区急性戊型肝炎以男性多见,好发于30～59岁年龄段,且均由基因Ⅳ型HEV引起,基因Ⅳ型又可进一步分为Ⅳ-A、Ⅳ-B、Ⅳ-C、Ⅳ-D和Ⅳ-E 5种亚型,其中Ⅳ-A与上海株、西安株和广西株亲缘关系较近,Ⅳ-D与北京株亲缘关系较近。     

原发性肝癌介入术后并发症治疗临床观察

目的评价对症治疗在原发性肝癌介入术后患者临床恢复期疗效。方法回顾分析在我院感染科,原发性肝癌患者行介入术后86例患者,临床恢复期内,使用常规对症疗法治疗术后并发症的疗效。结果患者在肝癌介入术后一般对症疗法,无特殊不良反应。结论一般性对症支持疗法缓解肝癌介入术后患者术后不良反应有较好的疗效和治疗安全性。     

Effects of Endotoxin on Liver Smac Apoptosis Channel

To study the effect of endotoxin on liver apoptosis, L02 liver cells were cultured and passaged in vitro, and then stimulated by endotoxin at 10 mg/mL for 4, 8, 16 and 24 h respectively. Liver apoptosis was flow cytometrically and fluorescently detected. Immunohistochemistry was used to detect the delivery of smac and caspase9. The delivery of liver cell smac and the activity of caspase3 were measured by caspase3 assay kit. The hepatic failure models of rats were established by using D-galactosamine. The blood serum and liver tissues were collected for the detection of the liver function, the level of endotoxin and the activity of caspase3 by using chromogenic substrate limulus amebocyte lysate method （LAL） and caspase3 active assay kit. The expression of smac and caspase9 in liver cells was detected by Western blotting. With in vitro study, the L02 cells stimulated by LPS condensed into conglobation and formed apoptotic bodies. After those cells were stained by hoechst, the apoptotic cells displayed blue color under the fluorescent microscope. The apoptosis rate was increased over time and the apoptosis was mainly of advanced stage. Meanwhile, the rate of smac delivery and activity of caspase9 and caspase3 were increased on L02 cell membrane. In vivo, hepatic failure and obvious endotoxemia were induced by injection of more than 200 mg/kg D-GalN. Hepatic mitochondria smac was reduced with dosage of D-GalN and, on the contrary, the activity of caspase3 was increased. D-GalN at 200 mg/kg increased Caspase9 while D-GalN at 300 mg/kg decreased caspase9. Mitochondria signal channel plays an important role in the endotoxin-induced apoptosis of hepatic cells by promoting the release of smac from mitochondria to cytoplasm and activating caspase9 and caspase3 in its low-level channel.     

乙型肝炎病毒基因型与YMDD变异的关系

目的:了解乙型肝炎病毒(HBV)基因型与YMDD变异之间的关系.方法:多对型特异性引物PCR扩增法对238例经拉米夫定治疗的慢性乙型肝炎患者进行HBV基因分型,直接序列分析;采用基因芯片检测YMDD及前C/BCP区变异.结果:238例患者中,检测出B基因型190例(79.8%),C基因型41例(17.2%),BC混合型7例(3.0%);发生YMDD变异44例,变异率为18.5%,其中B基因型33例,变异率为17.4%,C基因型8例,变异率为19.5%,BC混合型3例,变异率为42.4%,C基因型YMDD变异的发生率与B基因型相比,差异无显著性意义(P＞0.05).44例YMDD变异者中,30例同时存在L528M变异,7例联合前C区(nt 1 896)变异,13例联合BCP区(nt 1 762/1 764)双重突变.结论:本地区慢性乙型肝炎患者中,优势基因型为B型和C型,经拉米夫定治疗后YMDD变异的发生率在B型和C型差异无显著性意义,同时伴有L528M及前C/BCP区多重变异.     

尿酸辅助树突细胞免疫对小鼠淋巴细胞增殖及CTL效应的影响

目的：观察尿酸辅助HBsAg蛋白负载的树突细胞免疫接种对小鼠免疫功能的影响。方法：将负载HB-sAg的小鼠骨髓来源树突细胞经尾静脉注射接种小鼠，1次／w，共2次。分DC（树突状细胞）对照组、联合尿酸组、尿酸对照组。MTT法检测体外经HBsAg或PBS重刺激的脾T淋巴细胞增殖反应；流式细胞仪法检测CTL（细胞毒性T淋巴细胞）活性。结果：免疫2周时，小鼠脾T细胞增殖反应及体内HBsAg特异性CTL的杀伤活性，联合尿酸组明显强于各对照组。结论：尿酸可促进负载HBsAg树突细胞免疫后小鼠脾T淋巴细胞的增殖及HBsAg特异性CTL效应。尿酸具有增强DC疫苗免疫效应的活性，可用作研制抗HBV的治疗性疫苗的免疫佐剂。