聚合酶链反应方法检测鼠疫耶尔森菌的内部对照研究

目的 避免聚合酶链反应(PCR)方法检测鼠疫菌发生假阴性。方法 通过克隆，将16srRNA引物的扩增产物与鼠疫菌F1抗原基因克隆子相连，并以其作为内部对照模板进行PCR试验。结果 得到了在包含F1抗原基因中连接有16SrRNA扩增产物的质粒，并初步确立了作为内部对照质粒的参照标准浓度。结论 在采用PCR方法检测鼠疫菌时，加入适宜浓度的内部对照质粒作为模板与待检样品同时扩增，可避免假阴性的发生。     

中国炭疽芽胞杆菌致死因子基因中单核苷酸多态性位点分析

目的分析中国炭疽芽胞杆菌致死因子基因中的单核苷酸多态性（SNP）位点特征.方法选择18株炭疽芽胞杆菌,采用PCR方法扩增炭疽芽胞杆菌致死因子基因、测序,并进行SNP位点分析.结果实验中所用中国炭疽芽胞杆菌致死因子基因中第895位核苷酸均为G,与国外菌株不同.中国不同地区（包括新疆、广西、北京、内蒙古等地区）、不同年代和不同来源（包括土壤、牛、羊、骡、狗、患者等）分离的菌株,具有相同的SNP位点特征.结论致死因子基因中第895位核苷酸均为G的SNP位点特征很可能是中国炭疽芽胞杆菌的共同特征.     

利用串联重复序列研究炭疽芽胞杆菌的基因分型

目的 应用基因组中多位点串联重复序列遗传标记对不同地区88株炭疽芽胞杆菌进行基因分型。方法炭疽芽胞杆菌染色体DNA基因组中存在着串联重复序列。在串联重复序列两侧设计引物，PCR扩增，琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳，凝胶影像分析软件对PCR扩增产物碱基含量进行测算，并与测序结果进行比较，计算出串联重复拷贝数，对拷贝数进行聚类分析。结果 （1）聚类分析发现，88株菌株可分为三大群，45个基因型，基因型与生态环境存在一定的关系。就某一地区炭疽暴发而言，其可变数目串联重复序列遗传标记具有相似性。（2）研究发现，A16R疫苗株作为中国的疫苗株具有代表性。结论 炭疽芽胞杆菌基因组中的串联重复序列具有遗传稳定性和特异性，可作为炭疽芽胞杆菌基因分型的指标，在炭疽暴发和生物恐怖事件中的病原体溯源上具有重要的意义。     

TaqMan-LNA探针多重实时荧光定量PCR检测炭疽芽胞杆菌的研究

目的设计检测多个靶基因的炭疽多重荧光定量PCR反应系统,建立快速准确的基因诊断方法,解决蜡样芽胞菌群基因诊断交叉反应问题。方法选择炭疽杆菌PX01毒素质粒基因pagA,PX02毒素质粒基因capB,以及染色体上的前噬菌体λBa03基因PL3作为靶基因,利用在线荧光定量PCR引物设计软件设计、优化多重PCR引物以及相应的TaqMan探针序列,对探针进行LNA标记并优化荧光PCR反应体系,构建多重实时荧光定量PCR反应系统。以3对引物PCR扩增并克隆靶基因的质粒标准品,倍比稀释后进行敏感度试验,以炭疽、蜡样芽胞杆菌、苏云金杆菌、蕈状杆菌以及常见肠道致病菌进行特异度试验,利用炭疽弱毒株污染土壤及奶粉进行模拟检测。结果 TaqMan-LNA多重实时荧光定量PCR可迅速检出3个炭疽杆菌靶基因,常用的探针法荧光定量PCR反应液均适用;pagA、CapB、PL3基因克隆标准品序列正确;该方法对pagA、CapB、PL3基因的检出限分别为63、398、114copies/μl,且仅检出炭疽杆菌基因,其余4种蜡样芽胞菌扩增均阴性。土壤及奶粉样品检测均阳性,其中pagA近检出限为6.6×104/ml,PL3基因检出限为6.6×105/ml。结论 TaqMan-LNA多重实时荧光定量PCR方法具有适用性广,检测迅速,灵敏度及特异度高等特点,能够将炭疽杆菌与蜡样芽胞菌群中其他细菌相鉴别,可试用于炭疽杆菌的感染检测。     

慢性肝病患者血清总胆汁酸测定的临床意义

目的探讨各种慢性肝病患者血清总胆汁酸测定的临床意义。方法测定慢性肝病（脂肪肝、肝硬化及原发性肝癌）患者血清总胆汁酸浓度及其它肝功能指标[丙氨酸氨基转移酶（ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红素（TBIL）],并与对照组进行比较。结果（1）慢性肝病患者血清TBA水平较对照组均升高,肝硬化及原发性肝癌患者血清TBA水平与对照组比较有显著性差异（P〈0.05）,且肝硬化患者升高更加显著（P〈0.01）;（2）肝硬化患者TBA随着child-pugh分级A、B、C级的升高逐渐递增,且C级与A、B级之间TBA水平比较有显著性差异（P〈0.01）;（3）脂肪肝、肝硬化及原发性肝癌患者的TBA阳性率分别为28.6%、88.3%和100%,肝硬化患者的TBA阳性率高于ALT、AST和TBIL;（4）肝硬化患者Child-Pugh C级TBA阳性率与A、B级比较差异有显著性（P〈0.05）,Child-Pugh分级B、C级TBA阳性率显著高于其他肝功能实验指标（P〈0.05）。结论血清TBA水平是反映肝实质损害的一项灵敏指标,对监测肝病的病情发展、严重程度、预后及治疗效果等方面具有重要的参考价值,而且在分析肝硬化患者肝损害方面比常规肝功能项目更为灵敏。     

2017—2019年我国炭疽流行特征及炭疽芽胞杆菌分子分型分析

目的:探讨2017—2019年我国炭疽流行特征及发病规律,对部分省份（自治区）的炭疽芽胞杆菌进行分子分型分析。方法:收集中国疾病预防控制传染病监测信息系统和突发公共卫生事件报告管理信息系统中2017—2019年报告的炭疽发病资料,采用描述性流行病学方法分析流行特征和时间、地区及人群分布情况;以2017—2019年分离的...     

胃肠动力治疗仪联合聚乙二醇粉治疗便秘型肠易激综合征临床疗效研究

目的评价胃肠动力治疗仪联合聚乙二醇粉治疗便秘型肠易激综合征(IBS)的疗效。方法采用随机、开放、平行、阳性药物对照方法进行研究。入选符合罗马Ⅱ标准的便秘型IBS患者90例,分为胃肠动力治疗仪组、胃肠动力治疗仪加聚乙二醇粉联合治疗组(联合治疗组)及莫沙比利组3组,每组30例。试验包括1周基线期,2周治疗期。根据患者临床症状及生活质量进行评分。结果治疗后,3组患者腹痛、腹胀症状均有改善,联合治疗组腹胀症状改善最明显。胃肠动力治疗仪组腹痛症状改善最明显。各组患者大便Bristol分级构成及生活质量较治疗前明显改善,差异均有统计学意义(P<0.05);其中联合治疗组、胃肠动力治疗仪组与莫沙比利组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);联合治疗组与胃肠动力治疗仪组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论应用胃肠动力治疗仪联合聚乙二醇粉治疗便秘型IBS疗效好。     

炭疽暴发疫情病原应急检测方法的应用与分析

目的 对延安市甘泉县突发炭疽疫情进行实验室检测,分离鉴定病原菌。方法 采集病例病灶渗出液、血液、疫点外环境等标本共147份,开展病原分离、免疫学、分子生物学检测。结果 共检出各类阳性标本37份,总阳性率为25.18%。病原学检测分离到1株炭疽芽胞杆菌,阳性率为1.28%;分子生物学检测中皮损渗出液荧光定量PCR(qPCR)阳性率最高,达89.47%,血清学(ELISA)检测阳性率为75%,在环境标本中未检出阳性结果。结论 炭疽疫情应急实验检测中,由于抗菌素使用,人体标本病原分离率较低,血清学试验只具有回顾诊断的价值,应引入敏感快速的分子生物学检测技术,以迅速明确诊断。     

鼠疫菌102kb基因座一端IS100的缺失与pgm+稳定性的研究

目的 了解鼠疫菌102kb pgm基因座一端IS100的缺失与pgm~1稳定性的关系。方法 采用聚合酶链式反应(PCR)扩增国内各型鼠疫菌102kb pgm基因座色素沉着这一端IS100的片段,并选择克隆测序分析。结果 通过PCR扩增,其中只能扩增出约2560bp左右条带的生态型,也就是其102kb pgm基因座色素沉着这一端IS100的片段缺失,除锡林郭勒高原布氏田鼠型,还有北天山东段型、北天山西段A、B型,其pgm~ 表型非常稳定;而有一部分菌株的扩增结果为阴性另一部分菌株扩增出4492bp条带的生态型,扩增出4492bp条带的菌株102kb pgm基因座色素沉着这一端有IS100,结果为阴性的菌株其整个102kb pgm基因座可能已经丢失,此种情况包括祁连山型,青藏高原型,冈底斯山型,滇西纵谷型等,其pgm~ 表型表现出不稳定。结论 鼠疫菌102kb pgm基因座一侧缺失IS100的菌株,可具有较稳定的pgm~ 表型,而鼠疫菌102kb pgm基因座两侧有IS100的菌株,pgm~ 表型不稳定。     

鼠疫菌基因组与脉冲场电泳图型

目的利用PFGE图形来了解鼠疫菌基因组重排现象。方法PFGE分析并与全基因组序列进行比较。结杲计算PFGE各条带大小可初步判断鼠疫菌基因组序列重排结构。结论利用PFGE图型来判断鼠疫菌基因组序列重排结构,可以大大节约测序所需花费的成本。