人胎肺间充质干细胞的分离

目的 探索分离人胎肺间充质干细胞（MSCs）的有效方法.方法 在无菌条件下采集人工流产胎儿的肺组织,分别以组织块培养法和酶消化法分离细胞;通过相差显微镜观察细胞形态,流式细胞学方法检测细胞表型、成脂和成骨分化的多向分化潜能并证实其MSCs特征.结果 两种分离方法所得细胞,在原代培养初期的形态有所不同,但培养后期和传代后均为长梭形的贴壁细胞.流式细胞学检测显示,两种方法分离的细胞均表达MSCs标志物CD13、CD29、CD44、CD90、CD105、CD166及HLA-ABC,但不表达造血细胞系的标志物CD45、CD34、CD14、CD38、CD133和内皮相关抗原CD31,也不表达CD41a、CD42b、CD49d、CD106、CD61和HLA-DR.成脂诱导3～5d后,部分细胞转变为肥大、扁平的多角形细胞;1周后可见细胞内有囊泡状脂滴积聚;2周后脂滴增多、变大,并可被红O着色.成骨诱导者细胞内逐渐出现钙盐沉着,经诱导2周后大部分细胞内可见因钙盐沉着被茜素红S着色.结论 组织块培养法和胶原酶消化法均为获得人胎肺MSCs的有效方法.     

应用主动免疫方法建立不同节段脊髓损伤大鼠自身免疫神经保护动物模型

目的：应用不同主动免疫方法建立不同节段大鼠脊髓损伤自身免疫神经保护动物模型，并以其行为学变化加以评估验证。方法：实验于2004—06／09在河北医科大学附属第二医院实验中心进行。①实验动物选择：取近交成年雌性SD大鼠75只，随机分为5组，髓鞘碱性蛋白免疫组；全脊髓匀浆免疫组；卵白蛋白免疫组；假手术组；单纯损伤组，每组15只。豚鼠5只用于全脊髓匀浆制备。髓鞘碱性蛋白、卵白蛋白（均为Sigma）。②模型建立：除假手术组以外，按Gruner改良法制作B或T。脊髓背侧损伤模型，打击强度为25势能克厘米（gcf），假手术组仅行椎板切除术。③主动免疫：在损伤前1周，髓鞘碱性蛋白免疫组，皮下注射髓鞘碱性蛋白100μ／只；全脊髓匀浆免疫组，皮下注射全脊髓匀浆300μg／只；卵白蛋白免疫组，皮下注射卵白蛋白200μg／只。假手术组亦用髓鞘碱性蛋白100μg／只。损伤后即刻免疫，各组抗原剂量、种类同前者，但行腹腔注射。单纯损伤组，不做主动免疫。④大鼠行为学评估标准：分别在术后1，7，14，21，28d进行斜板试验角度测评；开阔地运动评分（观察大鼠后肢运动、关节活动、步态稳定性，爪、尾巴的位置等，时间为4min。0—21分标准，分值高为功能好，低为差）；网格试验和平衡试验。结果：实验用75只大鼠均进入结果分析。①大鼠不同胸段脊髓损伤的开阔地运动评分：伤后7d，T，损伤大鼠评分明显低于T9损伤大鼠（1．5比4．2分,t=22．71，〈0．05）；28d时，两者比较差异更显著，（2．9比8．2分，t=19．18,P〈0．01）。②免疫组大鼠斜板实验角度：脊髓损伤后28d，髓鞘碱性蛋白和全脊髓匀浆免疫组均显著大于卵白蛋白组（65&;#176;，60&;#176;比35&;#176;．P〈0．01）。⑧各组脊髓损伤后不同时间开阔地运动评分：免疫组明显高于卵白蛋白组（14．5，13．0比8．0分，P〈0．01）。④网格试验和平衡试验：各组评分结果与开阔地运动评分结果一致。结论：不同节段脊髓损伤时应用不同主动免疫方法建立的动物模型表明：①脊髓损伤的节段越低，恢复的效果越好。②髓鞘碱性蛋白或全脊髓匀浆主动免疫可促进大鼠脊髓损伤后神经功能康复，卵白蛋白为异体蛋白，非自身抗原，则无此作用。     

人脐带血来源的间充质干细胞在脑胶质瘤治疗中的应用前景

人脐带血来源的间充质干细胞能够表达多种趋化因子受体,可与胶质瘤细胞分泌的各种细胞因子相互作用而向胶质瘤定向迁移。hUCB-MSCs不仅可以通过诱导肿瘤细胞凋亡、上调抑癌基因表达、阻碍细胞周期进程和抑制肿瘤血管新生等机制发挥抗胶质瘤作用,还可通过携带治疗基因发挥更强大的抗肿瘤功效,在胶质瘤的生物治疗中具有广泛应用前景。     

重组人促红细胞生成素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤所致NF - κB和IκB表达的影响

目的 探讨NF - κB和IκB在重组人促红细胞生成素(r- HuEPO)对大鼠局灶性脑缺血再灌注炎性反应损伤的保护机制中的作用.方法 采用栓线法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(MCAO),应用免疫组化和Western blot分别检测缺血脑组织NF - κB和IκB的表达,IL-1β蛋白含量采用ELISA法确定.结果 与假手术组相比,脑缺血2h再灌注3h后缺血侧皮质IL- 1β含量显著升高至(86.2±25.2)pg/ml(P＜0.05),再灌注24 h IL- 1β含量达高峰(867.2±74.3)pg/ml(P＜0.01),72 h仍处于较高水平(185.5±24.4)pg/ml(P＜0.01).EPO治疗组缺血再灌注3h、6h、12 h(164.1±11.6)pg/ml和24h缺血侧皮质IL- 1β含量显著降低,与病理组相应时间点相比,分别降低了55％、33％、56％和50％(P＜0.01).脑缺血再灌注组各时相点NF - κB p65表达及活化明显增加,为Sham组的4～8倍(P＜0.01),12h表达最高(P＜0.01),是Sham组的13倍.EPO治疗组与病理组相应时相点相比,NF - κB p65表达显著减弱,EPO处理后1、3、6和12 h,NF - κB p65表达较相应的I/R组降低了33％ ～40％(P＜0.01).缺血2h再灌注1h后缺血侧皮质IκBα蛋白水平从248.6±4.2降低至195.3±4.8(P ＜0.01),6h降至最低(134.7±19.9,P＜0.01).EPO治疗组可显著增高缺血再灌注组缺血侧皮质IκBa蛋白水平(P＜0.01),各时相点分别增高了11％、34％、83％、40％、23％和20％.结论 EPO可能通过抑制NF - κB/IκB信号传导通路,减少炎性因子IL-1β的合成和分泌而达到保护脑损伤的作用.     

骨髓间充质干细胞在脑胶质瘤治疗中的应用前景

背景：骨髓间充质干细胞具有向胶质瘤趋向性迁移的能力和抗胶质瘤作用。目的：在复习相关文献的基础上,探讨骨髓间充质干细胞在脑胶质瘤治疗中的应用前景。方法：由第一作者对CNKI和PubMed数据库进行检索,英文关键词为＂mesenchymal stemcells,bone marrow,glioma＂,中文检索词为＂间充质干细胞,骨髓,胶质瘤＂。共检索到51篇相关文献,根据入选标准最终剩余29篇文章进行归纳总结。结果与结论：骨髓间充质干细胞具有较强的向胶质瘤趋向性迁移的能力,还可抑制胶质瘤细胞增殖、诱导胶质瘤分化;携带特定自杀基因、免疫基因、肿瘤坏死因子和溶瘤病毒的骨髓间充质干细胞可发挥更强大的抗肿瘤作用。骨髓间充质干细胞可作为脑胶质瘤基因治疗的理想载体。     

骨髓间充质干细胞在脑胶质瘤治疗中的应用前景

背景：骨髓间充质干细胞具有向胶质瘤趋向性迁移的能力和抗胶质瘤作用。 目的：在复习相关文献的基础上,探讨骨髓间充质干细胞在脑胶质瘤治疗中的应用前景。 方法：由第一作者对CNKI和PubMed数据库进行检索,英文关键词为“mesenchymal stem cells,bone marrow,glioma”,中文检索词为“间充质干细胞,骨髓,胶质瘤”。共检索到51篇相关文献,根据入选标准最终剩余29篇文章进行归纳总结。 结果与结论：骨髓间充质干细胞具有较强的向胶质瘤趋向性迁移的能力,还可抑制胶质瘤细胞增殖、诱导胶质瘤分化;携带特定自杀基因、免疫基因、肿瘤坏死因子和溶瘤病毒的骨髓间充质干细胞可发挥更强大的抗肿瘤作用。骨髓间充质干细胞可作为脑胶质瘤基因治疗的理想载体。     

大剂量甲波尼松龙对兔脊髓空洞前状态蛋白激酶C活性变化的影响

目的 观察大剂量甲波尼松龙对脊髓空洞前状态蛋白激酶C（PKC）活性变化的影响。方法 用新西兰兔96只制作模型，随机分为Kaolin组、MP干预组，其中后者用大剂量甲波尼松龙（30mg／kg体重）干预。术后1,3,7,14、21d用光镜、干湿重法和底物磷酸化法观察两组动物上颈髓病理学演变、脊髓含水量以及胞膜、胞质PKC活性。结果 与Kaolin组比较，MP干预组动物上颈髓水肿程度减轻，高峰延迟，脊髓含水量显著降低，以3d的含水量（68．66±0．37）％和Tarlov评分（5．00±0．00）改善最为明显，同时胞膜和胞质PKC活性明显下降，以7d[（5．76±0．45）／（3．41±0．54）pmol·mg^-1·min^-1]和14d[（6．21±0．40）／（3．77±0．31）pmol·mg^-1·min^-1]最为显著，下降达50％。结论 大剂量甲波尼松龙通过抑制脊髓空洞前状态PKC移位激活、降低PKC活性发挥对空洞前状态脊髓缺血、水肿的保护作用。     

中国人视神经管显微解剖学研究

的研究中国成人视神经管显微解剖学特点。方法20例无颅眶疾病、经福尔马林固定的国人尸头,在手术显微镜下测量视神经管颅口、眶口的宽度、高度及管顶、底、内侧壁、外侧壁长度,并观察筛、蝶窦气化情况。结果视神经管颅口宽(5.05±0.42)mm,高(4.61±0.27)mm,眶口宽(5.30±0.64)mm,高(5.62±0.83)mm;管顶长(9.67±1.51)mm,底长(5.41±0.84)mm,内侧壁长(9.58±0.72)mm,外侧壁长(9.26±0.66)mm。结论成人视神经管壁薄,中部有狭窄,管壁依蝶窦、筛窦气化程度分为倒U型、C型及D型;颅口硬膜返折部长且边缘锐利。     

人脐带间充质干细胞向神经细胞分化过程中ILK的表达变化及意义

目的 研究在人脐带间充质干细胞(hUCMSC)向神经干细胞样细胞(hucNSC)、神经细胞(Nc)诱导分化中整合素连接激酶(ILK)的表达变化及意义.方法 将体外培养、传至第3代的hUCMSC,用无血清培养基加入bFGF、EGF和B27预诱导分化为hucNSC,继之将其用BHA、弗司扣林等向神经细胞定向诱导分化,并用AF488分别标记hUCMSC、hucNSC、NC细胞骨架变化过程加以证实,免疫组化及RT-PCR检测ILK在hUCMSC、hucNSC、NC中的表达,并用实时定量PCR加以定量分析.结果 hUCMSC被诱导后首先聚集成细胞球样悬浮生长,表达nestin、CD133,ILK表达明显增强;再被诱导后表达NSE、TH,GFAP,并持续表达ILK.hUCMSC细胞骨架呈丝状规律排列,hucNSC时则成巢状,定向诱导后的神经细胞骨架转变成多突起的树枝状.实时定量PCR检测ILK在hUCMSC中微量表达,hucNSC中表达明显上调,是hUCMSC表达水平的12倍;在NC中ILK表达较hucNSC降低,但仍高于hUCMSC 8.6倍(P＜0.05).结论 人脐带间充质干细胞向神经干细胞样细胞、神经细胞诱导分化及细胞形态重塑中ILK可能发挥重要作用.