应用主动免疫方法建立不同节段脊髓损伤大鼠自身免疫神经保护动物模型

目的：应用不同主动免疫方法建立不同节段大鼠脊髓损伤自身免疫神经保护动物模型，并以其行为学变化加以评估验证。方法：实验于2004—06／09在河北医科大学附属第二医院实验中心进行。①实验动物选择：取近交成年雌性SD大鼠75只，随机分为5组，髓鞘碱性蛋白免疫组；全脊髓匀浆免疫组；卵白蛋白免疫组；假手术组；单纯损伤组，每组15只。豚鼠5只用于全脊髓匀浆制备。髓鞘碱性蛋白、卵白蛋白（均为Sigma）。②模型建立：除假手术组以外，按Gruner改良法制作B或T。脊髓背侧损伤模型，打击强度为25势能克厘米（gcf），假手术组仅行椎板切除术。③主动免疫：在损伤前1周，髓鞘碱性蛋白免疫组，皮下注射髓鞘碱性蛋白100μ／只；全脊髓匀浆免疫组，皮下注射全脊髓匀浆300μg／只；卵白蛋白免疫组，皮下注射卵白蛋白200μg／只。假手术组亦用髓鞘碱性蛋白100μg／只。损伤后即刻免疫，各组抗原剂量、种类同前者，但行腹腔注射。单纯损伤组，不做主动免疫。④大鼠行为学评估标准：分别在术后1，7，14，21，28d进行斜板试验角度测评；开阔地运动评分（观察大鼠后肢运动、关节活动、步态稳定性，爪、尾巴的位置等，时间为4min。0—21分标准，分值高为功能好，低为差）；网格试验和平衡试验。结果：实验用75只大鼠均进入结果分析。①大鼠不同胸段脊髓损伤的开阔地运动评分：伤后7d，T，损伤大鼠评分明显低于T9损伤大鼠（1．5比4．2分,t=22．71，〈0．05）；28d时，两者比较差异更显著，（2．9比8．2分，t=19．18,P〈0．01）。②免疫组大鼠斜板实验角度：脊髓损伤后28d，髓鞘碱性蛋白和全脊髓匀浆免疫组均显著大于卵白蛋白组（65&;#176;，60&;#176;比35&;#176;．P〈0．01）。⑧各组脊髓损伤后不同时间开阔地运动评分：免疫组明显高于卵白蛋白组（14．5，13．0比8．0分，P〈0．01）。④网格试验和平衡试验：各组评分结果与开阔地运动评分结果一致。结论：不同节段脊髓损伤时应用不同主动免疫方法建立的动物模型表明：①脊髓损伤的节段越低，恢复的效果越好。②髓鞘碱性蛋白或全脊髓匀浆主动免疫可促进大鼠脊髓损伤后神经功能康复，卵白蛋白为异体蛋白，非自身抗原，则无此作用。     

髓鞘碱性蛋白主动免疫对大鼠弥漫性轴索损伤的保护作用

目的：探讨应用髓鞘碱性蛋白主动免疫对弥漫性轴索损伤的保护作用。 方法：实验于2004-10／2005-06在河北医科大学附属第二医院中心实验室进行。成年雌性SD大鼠60只，随机分为髓鞘碱性蛋白组、全脊髓匀浆组、卵自蛋白组和对照组4组，每组15只。以不完全福氏佐剂为乳化剂进行主动免疫，①髓鞘碱性蛋白组：自身抗原髓鞘碱性蛋白加不完全福氏佐剂，髓鞘碱性蛋白用量100彬只。②全脊髓匀浆组：自身抗原全脊髓匀浆加不完全福氏佐剂，全脊髓匀浆用量300μg／只。③卵白蛋白组：非自身抗原卵白蛋白加不完全福氏佐剂，卵白蛋白用量200μg/只。④对照组：磷酸盐缓冲液加不完全福氏佐剂。7d后按Marmarou氏方法制备弥漫性轴索损伤模型。在大鼠弥漫性轴索损伤后3h，6h，1d，3d，5d，7d6个时间点，进行标本取材及形态学检查。包括光镜下苏木精-伊红染色、尼氏染色、Bielschowsky改良法轴索染色，神经微丝68蛋白免疫组织细胞化学检测及透射电镜观察。 结果：各组实验动物全部完成实验，无脱落。均进入结果分析。①弥漫性轴索损伤后3h，光镜下发现脑干、小脑上脚及胼胝体的中央灰质和白质区大片细胞肿胀。1d后卵白蛋白组出现少许轴突回缩球，3d后达到高峰。而髓鞘碱性蛋白组及全脊髓匀浆组的变化较轻。②神经微丝68蛋白免疫组织化学检测可见弥漫性轴索损伤后3h各组均出现轴突局部肿胀，6h后神经纤维排列紊乱；至1d时出现少许轴突回缩球，3d后出现更多的轴突回缩球，且神经微丝68蛋白染色减低，髓鞘碱性蛋白组、全脊髓匀浆组、卵白蛋白组与对照组比较差异均有显著性意义（P〈0．05）。5d后以卵白蛋白组减少最明显，而髓鞘碱性蛋白组及全脊髓匀浆组阳性细胞数分别与卵白蛋白组比较，差异有显著性意义（P〈0．05）。③透射电镜观察弥漫性轴索损伤后3h神经细胞轴突肿胀，神经丝排列紊乱。至1d时．卵白蛋白组细胞核变形，亚细胞器亦变形或消失，神经髓鞘分层松解甚至断裂．出现较多的轴索回缩球。而髓鞘碱性蛋白组和全脊髓匀浆组的胞质内线粒体等仍较丰富，排列正常，髓鞘分层轻微，神经微丝较规则。 结论：髓鞘碱性蛋白或全脊髓匀浆可减轻损伤对神经细胞的破坏，包括减少尼氏小体的溶解．促进神经微丝68蛋白的表达以及对亚细胞器的保护自身抗原免疫后激活自身免疫T细胞。     

胡椒碱预防实验性家兔SAH后迟发性脑血管痉挛

目的观察胡椒碱对蛛网膜下腔出血(SAH)后迟发性脑血管痉挛是否具有预防作用,并对其可能的作用机制进行初步探讨。方法将新西兰大白兔32只随机分为4组(n=8),A组(假注血组):只接受枕大池穿刺而不注血;B组(SAH组):经枕大池穿刺2次注血的方法,制作脑血管痉挛模型;C组(SAH 胡椒碱组):自第1次穿刺日始,静脉给予胡椒碱(20 mg/kg,溶媒0.5 mL/kg),每日1次;D组(SAH 溶媒组):静脉注射给予胡椒碱溶媒(0.5 mL/kg)。在第1次穿刺后的第7天处死,测定基底动脉内径、内径与血管壁厚度之比(D/T);用免疫组化法检测血管壁ET-1、eNOS表达。结果与A组比较,B组血管痉挛明显、血管壁ET-1表达增多e、NOS表达减少。C组分别与B组、D组比较,血管痉挛明显缓解(P<0.01),其血管壁上ET-1表达明显减少(P<0.05),eNOS在内皮细胞表达相对增多(P<0.05)。D组血管痉挛无明显缓解,血管壁ET-1、eNOS表达与SAH组无显著差异。结论胡椒碱(20 mg/kg)对蛛网膜下腔出血后迟发性脑血管痉挛有预防作用,其抗血管痉挛作用可能与胡椒碱抑制ET-1、促进eNOS活性有关。     

核因子-κB在实验性迟发性脑血管痉挛中的表达变化

目的 研究实验性家兔脑血管痉挛基底动脉核因子-κB(NF-κB)的活性变化。方法 建立中国大耳白兔枕大池二次注血脑血管痉挛模型,应用免疫组化、免疫印迹以及EMSA等方法检测NF-κB在不同时间表达情况及水平。结果 (1)实验组在注血后4～7d基底动脉有明显的狭窄及炎细胞浸润,7d时最明显;(2)NF-κB的活性表达于注血后4～7d较对照组明显增高,7d时最明显,与基底动脉炎性反应一致。结论 脑血管痉挛后NF-κB明显激活,导致痉挛动脉明显的炎性浸润。     

骨髓干细胞移植在中枢神经系统的应用

神经移植已应用于中枢神经系统发育、成型和再生研究,胚胎干细胞中枢神经系统移植研究也取得很大突破。但因大量的道德伦理问题使其深入研究和广泛应用受到极大的限制。而骨髓干细胞作为一种多潜能干细胞,业已证实在中枢神经系统变性、缺血和损伤性疾病中发挥着神经保护和神经修复的作用,具有广阔的应用前景。     

颅内血管网织细胞瘤的临床特点及治疗

目的 探讨颅内血管网织细胞瘤的临床特点及治疗方法。方法 对７２例颅内血管网织细胞瘤的临床资料进行回顾性分析,并结俣献对其临床、病结合献对其临床、病理及影像学特点等问题进行了讨论。结果 ７２例颅内血管网织细胞瘤占同期颅内肿瘤的１．５７％,６４例位于幕于,占８９％,囊性肿瘤５２例,占７２％。７２例均手术治疗,５８例均行手术治疗,５８例治愈,９例好转,５例死亡。结论 本病临床特点为男性多于妇性,多发     

间充质干细胞在脑胶质瘤实验性靶向治疗中的应用

不同组织中分离出的间充质干细胞在体外培养中均具有向胶质瘤细胞趋化性迁移的能力,移植到脑胶质瘤模型后也能向胶质瘤定向迁移并抑制肿瘤生长。这一特异性定向迁移的机制可能与白介素-8、转化生长因子、神经营养因子-3、血小板源性生长因子-BB和基质金属蛋白酶-1等分子的表达有关。此外,经修饰后携带特定治疗基因的间充质干细胞可通过向肿瘤分泌抑瘤因子发挥更强的抗肿瘤作用,在脑胶质瘤的基因治疗中有良好的应用前景。     

重组人促红细胞生成素对大鼠局灶性脑缺血再灌注炎症损伤的保护作用

目的 探讨重组人促红细胞生成素（r-HuEPO）对大鼠局灶性脑缺血再灌注炎症损伤的保护机制。方法 采用线栓法制备大鼠局灶性大脑中动脉栓塞（MCAO）模型，应用ELISA方法检测r-HuEPO治疗前后缺血侧脑皮质TNF-α含量变化，应用Westernblot检测缺血侧脑皮质p38MAPK表达的变化。结果 与假手术组相比，缺血再灌注组脑皮质TNF-α、磷酸化p38MAPK表达水平明显增加，r-HuEPO可抑制缺血再灌注脑皮质TNF-α增加及磷酸化p38MAPK表达。结论 r-HuEPO可能通过抑制磷酸化p38MAPK表达，减少炎症因子TNF-α的释放而抑制脑缺血再灌注损伤炎症反应。     

VEGF对实验性脊髓空洞前状态的血-脊髓屏障功能的调节作用

目的:通过建立兔脊髓空洞症模型,观察脊髓空洞前状态中血脊髓屏障功能变化和脊髓水肿程度,以及脊髓组织中VEGF蛋白、mRNA表达水平,并探讨VEGF表达在脊髓空洞前状态形成和发展中的作用。方法:应用干湿法测定脊髓空洞前状态中脊髓含水量,Evansblue法测定血脊髓屏障功能,应用免疫组织化学和RT-PCR测定脊髓组织中VEGF蛋白和mRNA的表达含量。结果:Kaolin组于术后第1天VEGFmRNA(0.31±0.02)表达有明显升高,第3天(0.44±0.03)、7天(0.66±0.02)、14天(0.56±0.01)呈强阳性表达,第21天(0.35±0.04)表达明显减弱;VEGF蛋白表达也呈现相同的变化趋势。同时Kaolin组动物在术后2周内出现脊髓水肿且随时间延长逐渐加重;组织中Evansblue含量在术后第3天有开始增高(2.79±0.42μg/ml),第7天达到高峰(3.53±0.45μg/ml),持续到第14天(3.45±0.35μg/ml),第21天有好转(3.36±0.27μg/ml)但仍高于正常。统计学分析结果显示VEGF高表达和脊髓空洞前状态中血脊髓屏障功能变化和脊髓水肿程度存在明显正相关。结论:在脊髓空洞前状态中,VEGF高表达对脊髓组织中血脊髓屏障功能和结构的破坏存在重要影响,在脊髓水肿和空洞形成、发展中起着重要作用。     

CCK-8对家兔SAH后迟发性脑血管痉挛病理变化的影响

目的:利用胆囊收缩素-8(CCK-8)的抗炎作用,观察其对自发性蛛网膜下腔出血后迟发性脑血管痉挛病理改变的影响。方法:雄性新西兰白兔60只随机分为四组(n=15)。①假手术组:仅进行枕大池穿刺和假注血;②SAH组:经家兔枕大池二次注射自体动脉血(0．8ml／kg)制作SAH模型;③SAH+CCK-8组:对SAH模型自day 0开始经枕大池注入 CCK-8(8μg／kg,0．5ml),每日一次直到动物处死;④SAH+生理盐水组:对SAH模型自day 0开始经枕大池注入等量37℃生理盐水,每日一次直到动物处死。各组分别在day 4、day 7和day 14分三批处死动物,每批5只。结果:假手术组动物基底动脉组织结构正常。SAH组动物基底动脉在day4、day7时出现血管痉挛,以day 7时最为显著,day 14血管痉挛得到缓解。CCK-8治疗组动物的血管痉挛程度有不同程度缓解,血管壁NF-κB、TNF-a表达明显减弱,与同时段SAH组和SAH+ 生理盐水组比较以day7时最为显著(P<0．05)。结论:CCK-8对SAH后迟发性脑血管痉挛具有一定的预防作用。