大鼠衰老过程中肝细胞活性染色质DNA的甲基化

用高效液相色谱（ＨＰＬＣ）法测定大鼠衰老过程中肝细胞活性染色质与非活性染色质ＤＮＡ甲基化程度的变化。结果表明，老年鼠肝细胞活性染色质ＤＮＡ甲基化程度较青年鼠的低，二者有显著性差异；而老年鼠肝细胞非活性染色质ＤＮＡ甲基化程度较青年鼠高，亦具有显著性差异，这表明衰老过程中基因组ＤＮＡ各组分甲基化程度的变化不一致。     

关于染色质的结构

染色质(chromatin)是间期细胞在电镜下所见的纤维状细丝,而染色体(chromosome)则是细胞进行有丝分裂时在光镜下所见的棒状结构。当细胞周期由间期进入有丝分裂期时,染色质高度螺旋卷曲密集成染色体。这样看来,染色质与染色体在化学组成上是基本相同的。大多数人认为,二者均由组蛋白、DNA、非组蛋白染色体蛋白质(Nonhistone chromosomal protein缩写为NHCP)以及RNA所组成。各组成成分之     

彗星试验——一种DNA损伤水平与修复能力的测定方法

目的介绍彗星试验（Cometassay）方法，并运用其分析人胚肺二倍体成纤维细胞（2BS）及外周血淋巴细胞（Lymphocytes）DNA损伤水平与修复能力。方法将2BS或淋巴细胞悬液与1％低熔点琼脂糖（LMA）等体积混合，铺于0．5％正常熔点琼脂糖（NMA）胶面上，细胞经充分裂解、电泳、PI染色后，用Leica图象分析系统每样本分析100个细胞彗距和彗尾面积。结果多数年轻与老龄2BS细胞、年轻与老龄人群淋巴细胞均无明显彗尾。28PD2BS经H2O2损伤后彗尾明显，且彗距与彗尾面积随H2O2浓度升高而增大。批间（n=6）重复性实验显示，H2O2处理后细胞彗距s=1．7—3．5（μm）、CV=1．6％-2．8％，彗尾面积百分率s=1．5％-2．3％、CV=1．8％-2．5％。结论年轻与老龄细胞DNA单链断裂水平均较低。H2O2可明显损伤DNA，其损伤水平随H2O2浓度升高而加大，彗星试验是评价DNA损伤水平与修复能力的较好方法。     

衰老人胚肺成纤维细胞核及染色质的体外转录活性

研究人胚肺成纤维细胞（简称2BS）核及染色质体外转录活性与代龄的关系。方法：用γ-~(32)PATP及~3H-UTP参入法测定衰老2BS细胞核及染色质的转录活性。结果：（1）衰老2BS细胞核的转录起始能力较年轻的下降44％（P＜0.01）；（2）衰老和年轻2BS细胞核内不与染色质结合的RNA聚合酶（RNP）转录活性无差异（P＞0．05），而与染色质结合的RNA聚合酶转录活性则随增龄明显下降（P＜0．01）；（3）衰老2BS染色质体外转录活性较年轻2BS下降58％（P＜0．01），对DNaseⅠ的敏感性也有所降低。结论：衰老2BS细胞核染色质结构的改变可能是转录活性下降的原因。     

益气养阴活血治法的抗衰老机理研究——Ⅲ、“气血通”对老年大鼠组织细胞核体外转录活性的影响

用益气养阴活血中药方剂“气血通”(人参、丹参、沙参等八味中药组成)掺入饲料喂养大鼠,可增加老年动物存活率,并提高老年大鼠肝、脾、脑、肾细胞核体外转录活性。     

DNA去甲基化引起人二倍体成纤维细胞端区缩短并加速衰老进程

目的:研究DNA甲基化水平变化对细胞衰老进程和端区长度的影响.方法:从细胞形态和Southern印迹杂交测定端区长度两方面观察5-氮胞苷处理对人胚肺二倍体成纤维细胞衰老进程的影响.结果:5-氮胞苷处理使老年细胞衰老表型更为突出,其端区长度缩短较年轻细胞亦为显著(约为对照细胞的96%).结论:甲基化水平降低及其导致的端区缩短的共同作用可能在细胞衰老过程中发挥着重要的作用.     

cDNA文库构建策略

随着cDNA文厍应用的日益广泛,其构建方法也有了很大改进和提高。获得完整和均一的mRNA是构建成功的基础,合成cDNA时可根据不同目的选择相应的反转录酶和方法,用于构建的载体也由质粒发展到噬菌粒并各有其利弊,双链cDNA克隆前应视连接方案进行末端修饰和分级分离,克隆时则需把握cDNA和载体的比例。近来发展起来的PCR介导的cDNA文库、消减cDNA文库、标准化cDNA文序和染色体或区域特异性cDNA文库进一步满足了不同的分子生物学需要。     

衰老相关基因研究进展

子女的寿命常与双亲的寿命有关 ;各种动物的平均寿命和最高寿限相当恒定。由此看来 ,物种的寿命主要决定于遗传物质。衰老过程可能与分化、发育相似 ,系由早已安排好的遗传程序控制。细胞中是否存在类似于原癌基因和抑癌基因的另一对矛盾 ,即调控衰老进程与寿限的“长寿基因”与“衰老基因” ?这一问题已越来越受到各方面的重视。1　动物的长寿基因多年研究表明 ,长寿常与代谢及应激能力增强有关。对真菌、昆虫、蠕虫等研究表明 ,抗氧化酶类的缺乏可能是短寿的分子基础 ,长寿种群常伴有丰富的超氧化物岐化酶和过氧化氢酶。常见氧化还原酶类…     

抑制性消减杂交筛选细胞衰老相关基因

目的 研究人胚肺二倍体成纤维细胞2BS在衰老过程中的基因表达变化。方法 对年轻2BS细胞[低于30PD(population doubling)]和衰老2BS细胞(高于55PD)样品进行双向抑制性消减杂交，并筛选分析。结果 构建了2个抑制性消减文库，分别代表年轻细胞和衰老细胞高表达基因，点杂交筛选获得30个差异表达片断(差异比例大于2)包含多种细胞功能的变化。部分差异基因表达在新生儿脐带血和老年人外周血样中差异也有显著性。结论首次报道了RBM4、FBXO7、TOM1等基因在2BS细胞衰老时的表达变化，并表明体外培养细胞与个体的衰老变化过程有一定相似性。