人衰老相关DNA片段的筛选及特征分析

目的:探索衰老相关新基因.方法:采用RAPD法筛选衰老相关的DNA片段,采用Southern blot 分析基因状态,Northern blot 分析mRNA水平.结果:筛选出衰老特异的DNA片段,长894 bp,命名为sad.将sad片段克隆、测序,查询GenBank,确认为一种新的衰老相关序列,基因登录号为AQ324104.Southern blot分析表明,sad基因可能是一种单拷贝基因;sad在衰老2BS细胞中的Southern blot图谱不同于年轻细胞,而与人胃癌细胞系BGC-823类似.Northern blot分析显示,sad基因具有表达活性,其RNA长约0.5 kb,相对水平在各代龄的细胞间差异无显著性.结论:sad是一种新的与衰老相关的DNA片段,sad基因可能为单拷贝基因,具有表达活性.     

表皮生长因子对衰老2BS细胞抗癌基因表达的影响

我们以不同代龄的人胚肺二倍体成纤维细胞（简称２ＢＳ细胞）为实验对象，通过斑点杂交和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交方法，观察了年轻及衰老细胞中Ｒｂ、ｐ５３基因的ｍＲＮＡ转录水平以及表皮生长因子（ＥＧＦ）刺激对Ｒｂ、ｐ５３基因转录的影响。结果表明，衰老细胞中Ｒｂ基因的ｍＲＮＡ表达水平与年轻细胞基本相同，但衰老细胞中ｐ５３基因的转录水平较年轻细胞低。ＥＧＦ刺激后，Ｒｂ表达水平增加，年轻细胞为３０５％，衰老细胞则为５２％，远没有年轻细胞敏感；ＥＧＦ对２ＢＳ细胞中ｐ５３基因的表达无影响。上述结果从生长因子诱导角度为探讨衰老机制提供了新的线索。     

大鼠衰老过程中脑细胞DNA与Yas原癌基因的甲基化

衰老过程中DNA甲基化水平常有明显改变。我们用MSPⅠ/HpaⅡ酶解电泳和高效液相色谱(HPLC)两种方法进行比较,研究了不同年龄大鼠的肝脑细胞基因组DNA甲基化的程度。酶解电泳图谱未观察到青年鼠和老年鼠之间基因组甲基化的差别,但用HP-LC测量DNA中5-甲基胞嘧啶的含量时发现,老年     

老年大鼠肝细胞核与染色质对DNA酶Ⅰ消化敏感性的研究

生物衰老时,活性基因数减少,本实验以DNA_(ase)I为活性基因探针,以断奶大鼠为对照,研究老年大鼠肝细胞核与染色质对DNA_(ase)I消化的敏感性。发现老年大鼠肝细胞核与染色质对DNA_(ase)的消化敏感性明显低于断奶大鼠,经统计学处理差异显著,其P值分别<0.02。     

癌胚抗原(CEA):关于一种有用肿瘤标志物令人眼花缭乱的新知识

1965年 Gold 和 Freedman 首先从结肠癌分离出癌胚抗元(CEA)。最初认为 CEA 是结肠癌的一种特异标志物。其后,很多研究工作者的工作表明,许多其它类型的癌患者,吸烟很厉害的健康者或有某些其它非恶性情况者,血液的 CEA 浓度亦升高。因而,CEA 不能用于肿瘤的实际过筛。但一些初步结果指出,CEA 对于监测肿瘤治疗的过程有很大的价值。3年前,美国食物与药物行政机构特许某公司制造并卖成套的放射免疫分析药箱,以用于监测肿瘤     

细胞周期抑制因子p16可诱导人成纤维细胞发生衰老样变化

目的 探讨细胞周期抑制因子p16在细胞衰老中的作用。方法 利用逆转录病毒载体将p16基因转染入人胚肺二倍体成纤维细胞2BS中,获得高表达,检测其对2BS细胞衰老的影响。结果 与对照组细胞相比,p16基因转染后,2BS细胞生长速度下降了约50％,细胞周期阻滞于G1期,细胞对生长因子刺激的反应性下降了79．4％,细胞形态呈衰老细胞样变化。结论 p16在人二倍体成纤维细胞的衰老过程中起促进作用。     

α-2-巨球蛋白在人胚肺二倍体成纤维细胞衰老过程中的作用

目的了解α-2-巨球蛋白（A2M）对人胚肺二倍体成纤维细胞（2BS细胞）衰老过程的影响. 方法将正、反义真核表达载体,经脂质体（lipofectin）介导,转染年轻2BS细胞,分别获得正、反义转染细胞.经Southern及Northern印迹验证后,测定正、反义转染细胞的衰老相关指标,再用Western印迹法检测转染细胞中p16、p21的变化. 结果转染的外源性A2M cDNA片段已完全整合到基因组中.与对照2BS/neo（空载体）细胞和正常细胞相比,正义A2M表达载体转染2BS细胞得到的稳定细胞（2BS/A2Ms细胞）生长更为迅速,S期和M期的比例略高于对照2BS/neo细胞和正常细胞组.衰老相关的β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色阳性率约为55.4%,而且细胞寿限较正常细胞和对照细胞组略有延长,但无统计学意义（P＞0.05）.与之相反,反义A2M表达载体转染2BS细胞得到的稳定细胞（2BS/A2Ma细胞）较对照和正常细胞组生长更为缓慢,S期和M期的比例略低,SA-β-Gal染色阳性率约为72.3%,细胞形态扁平、增大,表现为衰老细胞的特征,细胞寿限略短于对照和正常细胞组,但也无统计学意义（P＞0.05）.此外发现2BS/A2Ms细胞的生长速率、S期和M期的比例、细胞寿限均明显高于2BS/A2Ma细胞（P＜0.01）.比较正、反义转染细胞最大传代次数差异有统计学意义（P＜0.05）.转染细胞中p16、p21的表达变化并无统计学意义. 结论α-2-巨球蛋白延缓2BS细胞衰老作用甚微,且不经过p16、p21基因起作用.     

人胚肺成纤维细胞复制性衰老的基因表达变化

目的检测人胚肺成纤维细胞(2BS细胞)复制性衰老过程中的基因表达变化,并试图寻找细胞衰老的标志性基因。方法利用cDNA芯片对比检测28代龄和64代龄的2BS细胞基因表达谱,通过RT-PCR对挑选的9个差异基因在7个不同代龄2BS细胞中的表达进行验证分析。结果和年轻细胞相比,衰老2BS细胞有117种基因的变化幅度在2倍以上,46种基因在2.5倍以上;细胞衰老过程中下调的基因主要是细胞周期相关基因,上调基因主要参与细胞应激反应和蛋白分泌等过程;9个差异基因的RT-PCR验证结果与芯片结果基本一致。结论基因芯片是研究细胞衰老基因表达和调控网络的重要工具,可用于衰老特征性基因的筛选。     

对年轻细胞诱导早衰前后凋亡敏感性的研究

目的探讨年轻细胞被诱导衰老后对凋亡的敏感性与年轻细胞的差异,并分析可能存在的机制。方法以人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS)为研究对象,以H2O2诱导2BS细胞早衰后,再以H2O2分别诱导早衰2BS细胞和年轻细胞凋亡,DNA ladder分析和苔盼蓝排除法检测细胞死亡率。结果早衰细胞较年轻细胞不易被H202诱导凋亡。该因素是多方面的,不限于caspase-3的作用。结论早衰细胞与衰老细胞一样,对凋亡诱导因素的反应性降低。     

大鼠衰老过程中肝细胞活性染色质DNA的甲基化

用高效液相色谱（ＨＰＬＣ）法测定大鼠衰老过程中肝细胞活性染色质与非活性染色质ＤＮＡ甲基化程度的变化。结果表明，老年鼠肝细胞活性染色质ＤＮＡ甲基化程度较青年鼠的低，二者有显著性差异；而老年鼠肝细胞非活性染色质ＤＮＡ甲基化程度较青年鼠高，亦具有显著性差异，这表明衰老过程中基因组ＤＮＡ各组分甲基化程度的变化不一致。