丙型肝炎病毒核酸的荧光定量检测及其临床意义

目的:建立实时荧光定量RT-PCR(RFQ-RT-PCR)检测HCV-RNA含量方法的临床应用价值。方法:在HCV基因组5’非编码区(5’-UTR)设计特异性引物和一对杂交探针,PCR扩增目的片段并构建相应基因片段载体,体外转录RNA作为标准品,根据其建立的标准曲线对血清HCV RNA进行定量,同时用传统的巢式RT-PCR进行定性分析。结果:138例样本在HCV抗体阳性患者中,肝硬化和肝癌患者的HCV RNA含量显著高于慢性肝炎患者(P<0.05),而且HCV RNA含量与ALT水平呈正相关(r=0.91)。结论:RFQ-RT-PCR检测HCV-RNA含量比ELISA法具有更好的灵敏度和特异性,能准确反映HCV在体内的复制情况。     

荧光定量两探针法检测HCV RNA的研究

目的 建立荧光定量两探针检测HCV RNA方法.方法 对105例抗HCV抗体阳性和220例阴性样本,用荧光定量两探针法和2种商品荧光定量试剂进行检测,并对检测结果进行比较.结果 荧光定量两探针法阳性率分别为89.5%（94/105）和2.3%（5/220）.两种商品荧光定量试剂阳性率分别为71.4%（75/105）和0.45%（1/220）;69.5%（73/105）和1.8%（4/220）.结论 荧光定量两探针法检测HCV RNA有较高的敏感性和特异性.     

HPLC法测定注射用哌拉西林钠舒巴坦钠有关物质

目的建立注射用哌拉西林钠舒巴坦钠有关物质测定方法。方法采用C18柱;流动相为：水、乙腈、0．2mol／L磷酸二氢钾溶液,线性梯度洗脱;检测波长为220nm。结果线性范围为舒巴坦1．5～36．3μg／mL,1-乙基哌嗪-2,3-二酮1．7～40．6μg／mL,氨苄西林1．4～34．5μg／mL,哌拉西林1．6～38．2μg／mL;重复性为1-乙基哌嗪-2,3-二酮RSD4．8％,氨苄西林RSD14．1％,杂质ⅡRSD4．1％;1-乙基哌嗪-2,3-二酮的回收率均值为（98．9±7．8）％,氨苄西林回收率均值为（103．8±9．7）％;哌拉西林的定量限为4ng,检测限为1ng。样品溶液不稳定,需要配制后立即进样,耐用性试验显示需要选定专用色谱柱。结论本方法简便,专属性、重复性良好,可用于注射用哌拉西林钠舒巴坦钠有关物质的测定。     

遗传性凝血因子Ⅶ缺乏症43例回顾性研究

目的探讨遗传性凝血因子Ⅶ(FⅦ)缺乏症的发病机制、临床表现、实验室检查、诊断、治疗及预后。方法对1999年4月至2019年9月就诊于中国医学科学院血液病医院的43例遗传性FⅦ缺乏症患者进行回顾性分析。结果全部43例患者中,男16例,女27例,中位年龄16(1～70)岁,6例有家族史。29例(67.4%)有出血症状,皮肤/黏膜出血13例(30.2%),口腔黏膜出血13例(30.2%),鼻出血9例(20.9%);27例女性患者中,11例有月经过多(占育龄期女性的47.6%)。实验室检查均见凝血酶原时间(PT)延长、活化部分凝血活酶时间(APTT)正常、FⅦ活性(FⅦ∶C)减低。10例患者接受F7基因检测,发现3个新的突变位点。输注凝血酶原复合物(PCC)14例(32.6%),输注新鲜冰冻血浆(FFP)12例(27.9%),输注重组活化凝血因子Ⅶ(rFⅦa)3例(7.0%),20例(46.5%)无出血症状或轻微出血患者未接受替代治疗。9例(20.9%)患者未再发生先前出血症状,5例(11.6%)既往出血症状复发或持续存在,8例仍有月经量大,9例(20.9%)失访。结论多数遗传性FⅦ缺乏症患者...     

人胃腺癌中缺氧诱导因子-1α、血管内皮生长因子、生存素表达及意义

目的 探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1 α)、血管内皮生长因子(VEGF)、生存素(Survivin)表达在胃腺癌发生、发展中的作用以及相互关系.方法 应用免疫组化(SABC)法检测71例胃腺癌组织及20例正常胃黏膜组织中HIF-1 α、VEGF、Survivin的表达情况,并分析其与胃腺癌临床病理特征的关系.结果 HIF-1 α、VEGF、Survivin在胃腺癌组织中阳性表达率分别为59.15%(42/71)、53.52%(38/71)、47.89%(34/71),而在正常胃黏膜组织中表达不明显或不表达,两者比较差异有统计学意义(P＜0.01),HIF-1 α、VEGF及Survivin表达与胃腺癌组织学分级、浸润深度、淋巴结转移和TNM分期均密切相关(P＜0.05或＜0.01).胃腺癌组织中HIF-1 α表达与VEGF及survivin 表达均呈显著正相关,VEGF与Survivin表达亦呈显著正相关.结论 HIF-1 α通过上调VEGF及Survivin表达促进胃腺癌发生、发展;VEGF与Survivin间存在协同作用.     

Toll样受体2在原发免疫性血小板减少症中的作用研究

本研究通过检测原发免疫性血小板减少症（ITP）患者外周血淋巴细胞中TLR2的表达,同时评价体外活化TLR2对炎症因子分泌的影响,旨在探讨TLR2在ITP发病机制中的作用.39例ITP患者及21例正常对照者纳入本研究.应用实时定量PCR及流式细胞术检测外周血单个核细胞（PBMNC）中TLR2的表达.采用pam3CSK4体外刺激活化PBMNC,48 h后检测细胞培养上清中IL-6及TNF-α的浓度.结果显示,活动期ITP患者PBMNC中TLR2 mRNA的表达显著高于正常对照（3.561±0.741 vs 1.750±0.314） （P ＜0.05）,而缓解组（2.333±0.448）和正常对照之间TLR2 mRNA差异无统计学意义（P＞0.05）.流式细胞术分析显示,TLR2在正常对照及ITP患者T、B细胞表面不表达,但表达于所有单核细胞表面.进一步体外实验发现,TLR2活化能诱导ITP患者PBMNC中IL-6（1644±634.0 vs 4111±525.2 pg/ml）及TNF-α （75.37±22.31 vs 326.0±109.9 pg/ml）的表达（P均＜0.05）,但仅对正常对照PBMNC中IL-6（2119±636.9 vs4671±315.9 pg/ml） （P＜ 0.05）的分泌有促进作用.结论：TLR2mRNA在ITP患者PBMNC中高表达,这些高表达的TLR2可能通过促进炎症因子的分泌加快ITP疾病进程.     

老年高血压病患者室性心律失常的昼夜变异

有关心脏病人其心血管事件的发生（如摔死）有昼夜分布规律的问题已有报道。近年高血压病人并发的室性心律失常亦引起众多学者的关注。本文研究老年原发性高血压患者24h动态心电图（Holier）中室性心律失常的昼夜变异规律。1临床资料本组病例为1990年6月～1997年2月因心悸而行动态心电图检查的原发性高血压老年患者。诊断符合1978年（WHO）高血压诊断标准。Holter检测中室性早搏≥100次／天87例中男64例，女23例，年龄60～77岁。经病史、体检、心电图、K线、胸片、心脏超声、尿常规、眼底、血糖、尿素氮肌醉及肾动脉彩色多谱勒检查，除外…     

增殖诱导配体及其受体在肿瘤组织中的表达与意义

目的分析增殖诱导配体(APRIL)及其受体在不同肿瘤组织及肿瘤发展不同阶段的表达水平,探讨其与肿瘤发生的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(RFQ-PCR)检测了临床上常见肿瘤组织中APRIL及其受体mRNA的准确含量,并以靶基因和内参mRNA含量的比值作为评价靶基因表达水平的指标。结果肿瘤组织中APRIL表达水平显著高于交界组织(P<0.05)和正常组织(P<0.05);B细胞成熟抗原(BCMA)和穿膜蛋白活化物(TACI)表达水平在大多数肿瘤组织中与正常组织差异无统计学意义(P>0.05);APRIL在肠上皮化生、异型增生和胃癌组织中表达水平显著高于正常黏膜(P<0.05),APRIL在胃癌组织中表达水平显著高于肠上皮化生和异型增生(P<0.05),而其受体BCMA和TACI在各组胃黏膜病变之间表达水平无统计学意义(P>0.05)。结论成功建立RFQ-PCR检测APRIL及其受体mRNA含量的方法,具有较好的检测灵敏度和重复性;APRIL在肿瘤发生、发展过程中可能起了重要作用;除了BCMA和TACI外,肿瘤细胞可能还存在APRIL未知受体;APRIL在某些类型肿瘤有可能主要是通过受体BCMA而不是TACI发挥作用。     

人结直肠癌中缺氧诱导因子-1α、血管内皮生长因子、生存素表达及意义

目的 探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)、生存素表达在结直肠癌发生发展中的作用以及相互关系.方法 应用免疫组化法检测69例结直肠癌及20例正常肠黏膜中HIF-1α、VEGF、生存素的表达情况,并分析其与结直肠癌临床病理特征之间的关系.结果 HIF-1α、VEGF、生存素在结直肠癌中的表达率分别为56.52%、66.67%、46.38%,而在正常肠黏膜则表达不明显或不表达,两者差异有统计学意义(P＜0.01).HIF-1α、VEGF及生存素的表达与结直肠癌分化程度、肿瘤浸润深度、淋巴结转移和临床分期均密切相关(P＜0.05).HIF-1α蛋白的表达与VEGF及生存素蛋白的表达均呈显著正相关,VEGF与生存素的表达亦呈显著正相关.结论 HIF-1α通过上调VEGF及生存素表达促进结直肠癌的发生发展;VEGF与生存素间存在协同作用.     

视网膜色素变性视紫红质部分基因序列检测

建立了重盐、异丙醇提取视紫红质 ( RHO)基因 DNA序列检测方法。结果显示正常人 RHO第 5外显子基因所选 2 77碱基排列与 Nathans- Hogness报道的基因密码一致。RHO基因直接提取法不能用于序列测定。该法与酚提取法相比 ,时间缩短数个小时 ,成本降低 50 %