A53Tα—synuclein与Ⅱ型单胺囊泡转移体相互作用的鉴定

目的鉴定A53Tα—synuclein（A53T—SYN）与Ⅱ型囊泡单胺转移体（VMAT2）在体外分子间的相互作用，为研究α-synuelein在帕金森病（PD）发病机制中的作用提供依据。方法大肠杆菌B121中表达带GST标签的A53T-SYN蛋白，考马斯亮蓝染色和Western印迹检测蛋白质的表达，以该蛋白为诱饵，通过GST-Pull Down鉴定A53T-SYN与人脑提取物中的VMAT2在体外分子间的作用。结果考马斯亮蓝染色和Western印迹检测到GST-A53T-SYN在大肠杆菌中的高效表达，GST-Pull Down实验后的Western印迹检测发现与A53T—SYN作用的VMAT2蛋白。结论A53T-SYN与VMAT2在体外存在着分子间的相互作用。     

COX-2在胃癌组织中的表达及与Hp感染的关系

目的 探讨环氧合酶-2(COX-2)的表达与胃癌发生的关系及幽门螺杆菌(Hp)感染对COX-2表达的影响,为研究Hp感染致胃癌的机制及以COX-2为靶标的胃癌防治提供理论依据.方法 采用免疫组织化学染色法(SP法)检测对照组10例正常胃黏膜及实验组50例胃癌组织中COX-2的表达情况,用快速尿素酶诊断法和13C呼气试验两种方法检测胃癌患者Hp感染状况,分析它们在不同组织中的表达及与胃癌的关系.结果 胃癌组织COX-2的阳性表达率明显高于正常胃黏膜(P<0.001);COX-2的表达与淋巴结转移有关(P<0.05).有Hp感染的胃癌组织中COX-2的阳性表达率明显高于未感染者(P<0.05).结论 COX-2参与胃癌的发生发展且与胃癌的侵袭、转移及预后有一定的关系;Hp感染可能上调胃癌组织中COX-2的表达.     

青心酮对载脂蛋白E缺陷小鼠主动脉粥样硬化形成及斑块中主要细胞的TLR4表达的影响

张萍青主任医师曾师从国家级名中医裘笑梅,得其真传。从事中医妇科临床30余年,积累了丰富的临床经验。擅长应用中西医结合的方法诊治妇科常见病、多发病,对子宫内膜异位症、多囊卵巢综合征、ABO血型不合及免疫不孕等疑难杂症有独特的见解,治疗封闭抗体不足性复发性流产疗效显著。笔者有幸师从张萍青老师,临证侍诊,受益匪浅。现将其经验整理总结如下。     

青心酮防治动脉粥样硬化与内脂素的关系

目的:观察青心酮对ApoE(-/-)小鼠主动脉粥样硬化病变的影响与内脂素的关系。方法:取8只8周龄C57BL/6小鼠为正常对照组;取24只8周龄雄性ApoE(-/-)小鼠,随机分成3组:动脉硬化组(n=8,im,等量生理盐水);青心酮治疗组(n=8,im,10mg·kg-1·d-1);辛伐他汀治疗组(n=8,im,10mg·kg-1·d-1)。所有实验小鼠均饲以"西方类型膳食"饲料至12周。取血检测内脂素、血脂;剪取主动脉根部行冰冻切片,油红O染色观察主动脉粥样硬化病变情况;剪取主动脉根部斑块组织,观察斑块中内脂素的分布情况;行电镜切片,观察青心酮对斑块中平滑肌细胞、内皮细胞的结构影响。结果:青心酮治疗组血清内脂素减少,血脂降低,主动脉粥样硬化病灶形成减少,平滑肌细胞、内皮细胞损伤减轻,斑块中内脂素含量减少。结论:青心酮能减少ApoE(-/-)小鼠主动脉粥样斑块的形成,可能通过抑制内脂素生成而降低血脂发挥其作用。     

罗格列酮对胰岛素诱导的兔血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：观察罗格列酮对胰岛素诱导的兔胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响。方法:以组织块法原代培养兔胸主动脉血管平滑肌。采用细胞计数法测定细胞增殖，［3H］-TdR掺入法反映细胞DNA累积合成量。用RT-PCR方法测定蛋白激酶C mRNA含量。结果:罗格列酮对正常生长的细胞数目和掺入量无明显影响，与胰岛素组相比，1、5和10 μmol/L罗格列酮减少细胞数目分别为39.8%、46.9%和57.9%（P<0.01）；减少［3H］-TdR掺入量分别为29.6%、43.4%和53.8%（P<0.01）；对胰岛素诱导的a-PKC的表达上调无明显影响。结论:罗格列酮呈剂量依赖性抑制胰岛素诱导的平滑肌细胞的增殖。。     

A30Pα-synuclein原核表达载体的构建及表达

目的构建A30Pα-synuclein基因的原核表达载体,分析其在大肠杆菌中的表达。方法酶切质粒pcDNA3.0-A30Pα-synuclein,获得A30Pα-synuclein基因的目的片段,克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,转化大肠杆菌BL21。IPTG诱导后,经考马斯亮蓝染色和Western-blot分析目的蛋白的表达。结果 A30Pα-synuclein基因克隆至pGEX-6P-1载体中,考马斯亮蓝染色及Western-blot检测到A30Pα-synuclein蛋白在BL21中的表达。结论成功构建A30Pα-synuclein的原核表达载体,并在大肠杆菌中表达了A30Pα-synuclein融合蛋白,为进一步研究A30Pα-synuclein在帕金森病中的作用奠定了良好基础。     

青心酮对RAW264.7细胞可溶性Toll样受体4表达及TNF-α的影响

目的 探讨中药成分青心酮（3，4-dihydroxyacetophenone,DHAP）对RAW264．7细胞炎症反应时可溶性Toll样受体4（soluble Toll-like reoeptor 4，sTLR4）mRNA、蛋白表达及TNF-α分泌的影响。方法 建立细胞炎症反应模型，用RT-PCR及Western blot分析sTLR4 mRNA及蛋白水平的改变，用ELISA方法检测TNF-α分泌的变化。结果 RAW264．7细胞炎症反应时，sTLR4 mRNA及蛋白表达均下调，该细胞经青心酮处理后在炎症反应时，sTLR4 mRNA及蛋白表达均上调，与未处理组比较，表达明显增加，而TNF-α分泌下降。结论 DHAP预处理能显著上调sTLR4 mRNA及蛋白表达，减少TNF-α分泌，抑制炎症反应。这将为临床治疗感染性休克提供一个新的研究方向。     

胃癌组织中核因子κB和环氧合酶2的表达及其与幽门螺杆菌感染的关系

目的 观察胃癌组织中核因子κB(NF-κB)和环氧合酶2(COX-2)的表达,探讨二者与幽门螺杆菌(H.pylori)感染的关系.方法 采用免疫组织化学染色法(SP法)检测10例正常胃黏膜组织及50例胃癌患者手术切除胃黏膜组织中NF-κB和COX-2的表达,用快速尿素酶诊断法和13C呼气试验两种方法检测胃癌患者H.pylori感染状况,分析NF-κB和COX-2的表达及H.pylori感染与胃癌的关系.结果 胃癌组织NF-κB和COX-2的阳性表达率[分别为74%(37/50)和86%(43/50)]显著高于正常胃黏膜组织(分别为0/10和1/10),差异有统计学意义(P＜0.01).胃癌组织中NF-κB与COX-2的表达呈正相关(r=0.524,P＜0.01).H.pylori感染者胃癌组织中NF-κB、COX-2的阳性表达率[分别为93%(27/29)和86%(25/29)]显著高于未感染者[分别为52%(11/21)和48%(10/21)],差异有统计学意义(P＜0.05).结论 胃癌组织中NF-κB和COX-2的表达增加,且NF-κB与COX-2表达呈正相关;H.pylori感染可能上调胃癌组织中NF-κB、COX-2的表达.